溶血标本对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗原影响的分析

摘要：目的 探讨溶血标本对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗原结果的影响。方法 对400份不同的血清标本采用酶联免疫吸附试验（ELISA）进行乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的测定，其中阴性标本217份，强阳性标本95份，弱阳性标本88份；用人为方法造成溶血，对溶血标本重新测定，对2次检测结果进行比较。结果 217例HBsAg阴性标本和95例HBsAg强阳性标本，非溶血标本和溶血标本血清检测结果（阴性或强阳性）全部一致，非溶血标本和溶血标本血清的HBsAg的OD值无统计学意义；88例HBsAg弱阳性标本，溶血标本血清检测出现假阳性率为7.95%（7/88），非溶血标本和溶血标本血清的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的OD值具有统计学意义。结论 溶血对乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性及乙型肝炎表面抗原（HBsAg）强阳性的标本影响不大，而对乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱阳性标本的检验结果具有一定影响，甚至可能造成假阴性。

关键词：乙型肝炎表面抗原；酶联免疫吸附试验；溶血标本

ELISA是检测HBsAg的主要方法，但是，文献[1]指出，ELISA检测过程中易受到各种因素影响。溶血是临床检验中最为常见的一种干扰和影响因素，我院通过对400份不同的血清标本采用ELISA进行HBsAg测定，探讨溶血标本对ELISA检测乙型肝炎表面抗原的影响，旨在为临床提供参考，现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料 随机抽取400份不同人群的血清标本，样本中男性241例，女性159例；年龄19～65岁，平均年龄（40.1±5.7）岁；标本中阴性标本本217份，强阳性标本95份，弱阳性标本88份；采用人工方式，即冰冻法使血清标本溶血，再取血清检测。

1.2 方法

1.2.1人工溶血血清制备 将全部标本放置于-40℃冰箱内，静置20min后，取出，室温融化，采用3000r/min离心10min，造成样本溶血，离心后的溶血样本上清液Hb浓度为8g/L。

1.2.2 ELISA夹心法检测HBsAg采用二步法检测 取出试剂盒，于常温中放置约30min，在微孔反应条中加入75μL待测标本，取阴、阳性对照组，每阴加入对照组组，各1滴对照液；设立1个空白对照组；37℃避光孵育60min。弃孔内液体，洗板后拍干。每孔加酶结合物1滴，混匀后封板。37℃避光孵育30min。弃孔内液体，洗板后拍干。加显色剂A、B各1滴，封板，再次于37℃避光孵育约15min，观察显色结果。

2 结果

溶血标本经检测，217例HBsAg阴性标本和95例HBsAg强阳性标本，与非溶血标本检测结果全部一致，非溶血标本与溶血标本HBsAg的OD值阴性分别为（0.33±0.10）、（0.41±0.21），两组阴性或强性性检测OD值对比，结果无统计学意义；但是，在对88例HBsAg弱阳性标本检测时发现，溶血标本血清检测7例假阳性，假阳性率为7.95%，非溶血标本和溶血标本血清的HBsAg的OD值分别为（0.34±0.14）、（0.61±0.11），结果对比具有统计学意义（P

3讨论

ELISA检测HBsAg快速、简便、特异性强、灵敏度高，是各级实验检测HBaAg的主要方法，但是，实验中不可避免会接受到溶血标本，对检测结果产生影响。

临床研究指出，样本溶血后红细胞内容物，如水、Hb、蛋白质、无机盐等会对血清有稀释作用，而细胞释放出的Hb非特异性吸附于反应孔壁与包被物非特异结合，难以完全被洗脱；分析认为，溶血血清中细细胞或血红蛋白中的亚铁血红素作为一种过氧化酶物质，有类似过化酶的活性，这种过氧化酶物质可以还原出原生态氧，从而催化底物四甲基联苯胺，从而生成可溶性的有色物质，使检测结果呈蓝色，呈阳性状态，从而易导致标本用ELISA法检测HBsAg易产生假阳性的现象。

本组采用ELISA检测HBsAg时发现，溶血标本与非溶血标本在强阳性与阴性方面并无明显差异，与文献[2]基本一致，但是，在88例弱阳性标本中，7例检测出假阳性，表明溶血对检测结果在临界阴性的HBsA生干扰。王碧玉等研究[3]指出，随着溶血程度的加深，检出OD值也不断升高，表明溶血对ELISA试验存在干扰作用。

分析认为，血清发生溶血的因素较多，一般来说可分为体外溶血与体内溶血两种，体外溶血是由物理因素、化学因素、代谢性因素等造成的，物理因素如机械性破坏、冰冻等作用均可能造成，而化学因素如血样接触表面活性剂引起；内因素有物理因素，如人工心脏瓣膜或大血管手术后引起的机体物理反应，生物因素，药物毒性反应等均可能引起溶血。溶血标本不宜做HBsA检测，通常这类标本被认为是不合格标本，要求重新抽取，这会给临床工作带来许多重复性的工作。这种假阳性问题给临床诊断产生了干扰，可在检测中采用二步法进行检测，将血清彻底洗脱掉，减少残留的过氧化物酶的含量，从而降低假阳性的发生，以保证检测结果。

总之，通过本组研究表明，溶血虽然对HBsAg强阳性及阴性标本的影响不大，但是对于弱阳性标本检测结果会产生较大的影响，甚至可能存在假阳性，对临床诊断带来一定困难，在临床操作上应给予重视，应严格按操作流程执行，尽量采用二步法减少假阳性干扰的问题。

参考文献：

[1]王静.酶联免疫吸附试验法检测乙型肝炎病毒表面抗原的影响因素分析[J].检验医学与临床，2010，4（7）：671-672.

[2]白占杰.论酶联免疫吸附试验中影响因素及解决方法[J].实验与检验医学，2012，4（30）：185.

[3]王碧玉，黄芳.溶血对临界阴性HBsAg结果的影响及抗溶血因素干扰的研究[J].文广西医学，2011，9（33）：1174-1175.