莪术饮片中牛儿酮的含量测定

摘要 目的：建立莪术饮片中牛儿酮含量测定方法。方法：Hypersil ODS2 C18色谱柱(250mm×4.6mm，5mm)；以甲醇-水(67∶33) 为流动相，检测波长210nm；柱温：30℃；体积流量：1.0ml/min。结果：牛儿酮在6.422μg•ml-1～205.50μg•ml-1范围内与峰面积呈良好的线性关系；平均回收率分别为98.14%（RSD=1.42%）。结论：该法操作简便、准确，重复性好，可用于莪术饮片的质量控制。

关键词 莪术饮片 牛儿酮 含量测定 HPLC

莪术为姜科植物蓬莪术Curcuma phaeocaulis Val.、广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Ling或温郁金Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling的干燥根茎；后者称“温莪术”。温莪术为主流商品，其所含挥发油（称“莪术油”），现代药理证明具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗炎、治疗癫痫等作用,临床应用广泛。油中主要成分为多种倍半萜类,包括莪术醇、莪术二酮、牛儿酮（吉马酮）、β-榄香烯等。莪术药材的含量测定，《中国药典》2005版和2010版均收载挥发油测定法，对莪术饮片未作要求。笔者参考莪术油项下的方法［1］，经改进后，建立了莪术饮片中牛儿酮含量测定方法。实验表明，该方法简便、快捷、准确，重复性较好，可作为莪术饮片的质量控制标准。

1 仪器与试液

1.1 仪器：Agilent 1200高效液相色谱系统（四元泵、自动进样器、VWD检测器）；Agilent-Chemstation色谱工作站；Sartorius ME235P电子天平（感量0.1mg；0.01mg）；超声处理器（USC-502，上海波龙电子设备有限公司）。

1.2 试液：牛儿酮对照品(批号111665-200902，含量测定用)购自中国药品生物制品检定所；莪术饮片部分采自浙江瑞安，部分为市售（均经舟山市食品药品检验所鉴定为“温莪术”）；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件：依利特Hypersil ODS2 C18色谱柱(250mm×4.6mm，5mm)；以甲醇-水(67:33) 为流动相，检测波长210nm；柱温：30℃；体积流量：1.0ml/min；进样量：10ml。在此条件下样品中牛儿酮峰能得到很好的分离，见图1。

2.2 溶液的制备：分述如下。

2.2.1 对照品溶液: 精密称取牛儿酮对照品(含量98.8%)10.40mg，置25ml量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，作对照品贮备液(浓度为0.4110mg•ml-1)。精密量取贮备液1ml，置20ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，作对照品溶液(20.55μg•ml-1)。

2.2.2 供试品溶液:取莪术粉末（过60目筛）约0.7g, 精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入无水乙醇20 ml，摇匀，称定重量，超声处理40min，放冷,称重，用无水乙醇补足减少的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm滤膜滤过，即得。

2.3 线性试验：精密吸取牛儿酮对照品贮备液,分别用无水乙醇制成浓度为6.422、12.844、25.688、51.375、102.75、205.50μg•ml-1的溶液，按上述色谱条件进行测定，以浓度为X,相应峰面积为Y，得线性回归方程为：Y=33.7902X+1.7340，r=1.0000（n=6），说明牛儿酮在6.422μg•ml-1 ～205.50μg•ml-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验：取对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6 次，测定峰面积，结果牛儿酮峰面积的RSD为0.77%(n=6)。

2.5 稳定性试验：取同一样品（1号）溶液，于16小时内每隔一定时间进样一次, 共进样8 次, 测得牛儿酮峰面积的RSD =1.32%。表明样品溶液在16小时内稳定。

2.6 重现性试验：取供试样品（1号）共6份，每份约0.7g, 按2.2.2项下操作制得供试品溶液,依2.1项下色谱条件进样测定, 结果牛儿酮平均质量分数为2.24 mg•g-1，RSD=1.58%。

2.7 回收率试验：精密称取已知含量的样品（1号）9份，每3份分别精密加入牛儿酮对照品储备液（0.4110mg•ml-1）1ml、1.5ml、2ml，按供试品制备法制备，并依法测定，结果见表1。

2.8 样品测定：实验测定5批样品，其中4批采自温州瑞安，按《浙江省中药炮制规范》（2005年版）莪术项下进行加工切片，另一批为市售莪术饮片。取上述各批样品，每批平行称取3份，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，照2.1项下色谱条件进样测定，以外标法计算样品含量，结果见表2。

3 讨论

3.1 超声法的选择：实验考察了超声法、浸渍法、浸渍加超声法、回流法对测定结果的影响，试验表明，不同的提取方法，测定结果无明显差异，因此，选用简便快捷的超声法。

3.2 流动相的选择：文献报道多采用乙腈-水系统［2-5］，试验结果当乙腈组分小于50%时，牛儿酮峰或保留时间较长，或峰形较差。笔者改用甲醇-水(67∶33)试验，结果牛儿酮峰保留时间适中，峰形较好，而且甲醇比乙腈经济，实验成本大为降低。

4 参考文献

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京:化学工业出版社，2005:279.

［2］张鹏,祝明,唐登峰，等. HPLC同时测定莪术油中3种倍半萜类成分的含量［J］.药物分析杂志,2009,29(11):1825-1827.

［3］程辉跃.莪术油葡萄糖注射液中莪术醇及牛儿酮的含量测定［J］.中国药业,2007,16 (23):32-33.

［4］贾东明，姜义娜，薛胜霞.反相高效液相法测定莪术油凝胶剂中莪术醇和吉马酮的含量［J］.温州医学院学报,2007,37 (5):500-501.

［5］黄赵刚，李绍平，李俊.反相HPLC法测定莪术油葡萄糖注射液中莪术醇和吉马酮的含量［J］.中成药,2007,27(10):1141.

收稿日期 2010-12-03