小鼠卵巢切除术中戊巴比妥钠麻醉使用及围手术期改良

摘要：目的 通过应用戊巴比妥钠对10周龄的ICR小鼠实施麻醉，探索安全有效的麻醉剂量，并改良小鼠双侧卵巢切除术的围手术期处理。方法 选用SPF级ICR品系6w龄雌性小鼠60只，随机分为正常组和肝损伤组，正常组喂养标准饮食，肝损伤组喂养胆碱蛋氨酸缺乏饮食（Methionine and choline deficient diets， MCD diets）。4w后分别给予1%戊巴比妥钠80mg/kg、10mg/kg腹腔注射，对麻醉效果及术后复苏进行测试，术中术后采取保暖、伤口涂抗生素预防感染等措施，探索小鼠双侧卵巢切术围手术期改良。结果 正常组和肝损伤组，1%戊巴比妥钠80mg/kg和10mg/kg可保证麻醉安全有效；术中术后给予保温，缝合时伤口涂抗生素等手段改良，可促进复苏，大大提高存活率。 结论 在生理和病理状态下，戊巴比妥钠的麻醉剂量不同，尤其在肝损伤情况下，麻醉剂量应大大降低且应慎用。通过保温、预防感染等手段对卵巢切除术的围手术期处理进行改良，可加快术后苏醒，提高存活率，减少术后并发症。

关键词：戊巴比妥钠；麻醉；肝损；卵巢切除术；围手术期

中图法分类号：R332 文献标志码：A

戊巴比妥钠是实验中广泛运用的麻醉剂，小剂量镇静，中等剂量催眠，大剂量麻醉与抗惊厥，主要抑制网状结构上行激活系统。麻醉剂量即可显著抑制呼吸、循环系统及基础代谢，使心排量减少、血压下降、体温降低[1]；戊巴比妥钠主要在肝脏内代谢。在肝功能损伤情况下，戊巴比妥钠代谢受影响，在血中长时间维持较高浓度，加重呼吸循环抑制。通过对ICR小鼠麻醉实验的研究，探讨戊巴比妥钠对ICR小鼠的麻醉效果及安全性，确定在生理和病理状态下的安全剂量，同时在该剂量下行双侧卵巢切除术，对围手术期处理进行改良。为科研相关动物麻醉及围手术期处理提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 SPF级ICR小鼠60只，6w，体重30～35g，重庆医科大学实验动物中心提供（实验动物生产许可证号为SCXK（渝）2012-0001，实验动物使用许可证号为SYXK（渝）2012-0001）；戊巴比妥钠，德国Merck公司；MCD饮食和标准饮食，美国Research Diets公司（货号分别为A02082002B、A02082003B。MCD饮食配方：L -氨基酸171.4 g/kg、蔗糖455.3g/kg、玉米淀粉150.0 g/kg、麦芽糊精50.0 g/kg、纤维素30.0 g/kg、玉米油100 g/kg、矿物质混合物35.0 g/kg、碳酸氢钠 7.5g/kg、维生素混合物10.0 g/k g、蛋氨酸 0 g/kg，胆碱 0 g/kg；标准饮食配方是MCD饮食配方加上蛋氨酸3 g/kg、胆碱2 g/kg）；手术器械，上海医疗器械有限公司；电子天平；分析天平；量筒；称量纸；称量勺；滤器；计时器；注射器。

1.2 方法

1.2.1模型建立 6w龄小鼠共60只，随机分为两组，每组30只。一组喂养MCD饮食4w，诱导发生非酒精性脂肪肝炎为肝损伤组，另一组喂养标准饮食4w为正常组。

1.2.2 麻醉剂浓度及配制 用分析天平对戊巴比妥钠称量并用氯化钠注射液做稀释剂配制成1%的戊巴比妥钠溶液，用无菌滤器过滤，即配即用。

1.2.3 分组及麻醉剂量的探索 分别从正常组、肝损伤组中随机选取20只进行预实验，探索最佳麻醉剂量，剩下10只用于正式试验。选取正常组小鼠20只，随机分为4组，每组5只，戊巴比妥钠剂量分别为：A1组40mg/kg，A2组60mg/kg，A3组80mg/kg，A4组100mg/kg；肝损伤组20只，随机分为4组，每组5只，戊巴比妥钠剂量分别为：B1组5mg/kg，B2组10mg/kg，B3组20mg/kg，B4组40mg/kg；于右下腹靠外侧腹腔注射戊巴比妥钠，然后行双侧卵巢切除术，进行麻醉效果的测定。麻醉前禁食12h。

1.2.4 麻醉状态的观察 物注射后初期仍然存在爬行动作，紧接着出现步态不稳、后肢无力、身体摇晃，随后停止爬动呈侧卧状，不能翻正，部分小鼠出现肌肉颤动，刺激眼睑无反应，角膜反射微弱，肌肉松弛，最后针刺手术部位皮肤不引起有害反射考虑进入手术所需麻醉状态。

1.2.5麻醉效果分级 麻醉效果分级好，手术不躁动，或稍有躁动，但不影响手术；差，动物有躁动，勉强手术；极差，动物躁动剧烈，难以手术[2]。

1.2.6双侧卵巢切除术 戊巴比妥钠腹腔注射，待小鼠进入麻醉状态后，手术部位去毛，碘伏消毒、铺巾，从背部中线两侧切口入[3]，切开皮肤0.5～1.0cm，逐层分离，暴露卵巢周围脂肪组织，用手术镊轻轻牵出脂肪组织，完全暴露卵巢，在卵巢基部（卵巢动静脉的后方），钝性穿过两根手术缝合线，分别将卵巢两侧血管全部结扎，然后用剪刀将结扎中间部分包括卵巢全部剪掉，确定卵巢剪切干净、无活动性出血后，将卵巢周围脂肪送回腹腔，然后关闭腹腔，在切口下方与肌层之间涂抹青霉素粉末，缝合皮肤。缝合完毕后再于伤口处涂上青霉素，预防感染，同样方法行右侧卵巢切除。在术中及术后将小鼠置于白炽灯下保温直至苏醒。

1.2.7正式试验 正常组与肝损伤组分别给予1%戊巴比妥钠80mg/kg、10mg/kg腹腔注射后行双侧卵巢切除术。记录此过程中小鼠进入深度麻醉起效时间（从麻醉剂注射完毕，至动物皮肤疼痛反应消失、眼睑刺激无反应、肌肉松弛、呼吸平顺的这段时间为起效时间） [4]、麻醉复苏时间（从注射麻醉剂到胡须自主运动为标准）、手术时间及麻醉效果。若术中麻醉过浅，追加原总剂量的1/4。

1.3统计学处理 实验数据经SPSS1.1统计软件分析，计量资料采用双侧t检验，数据以平均值±标准差表示，P

2结果

2.1 麻醉效果观察 正常组与肝损伤组最佳安全麻醉剂量分别为80mg/kg、10mg/kg，与正常组相比，肝损伤组戊巴比妥钠剂量大幅度降低，见表1，表2；正常组、肝损伤组分别在上述麻醉剂量下实施双侧卵巢切除术获得了满意麻醉效果，见表3，保障了手术顺利进行。因本手术操作时间短，术中未追加麻醉剂。复苏后2h两组小鼠均能自由向前爬行。

2.2 麻醉起效及复苏时间观察 与正常组相比，肝损伤组中戊巴比妥钠麻醉起效时间明显缩短，麻醉持续作用时间明显延长，见表4，说明在肝损状态下戊巴比妥钠在肝内代谢出现障碍，所需麻醉剂量明显降低，动物复苏较慢。

2.3 手术情况 由表4可知，无论是在正常组还是肝损伤组手术持续时间约22min，动物在手术期间没有躁动及苏醒。手术切口较小，对动物预后较好，卵巢切除时，对卵巢周围血管进行结扎，减少动物术后出血，缝合时在皮下及伤口表面涂抹青霉素粉末，预防感染，术中术后在白炽灯下保温，可促进动物体循环，加快苏醒。术后无小鼠死亡及并发感染。

3 讨论

在动物实验中实验动物的麻醉是关键环节，麻醉效果的维持直接影响手术质量，进而影响实验结果的准确性[2]。由于动物品种、品系不同，麻醉剂用量亦不同，麻醉效果和麻醉维持时间存在差异[5]。良好的麻醉效果可使动物保持制动及全身肌肉松弛，方便手术，缩短手术时间，减少术中并发症。戊巴比妥钠药性相对稳定，起效快，安全剂量下不良反应较少[6]，小鼠苏醒后活动自如。本实验观察发现，正常组中当戊巴比妥钠达100mg/kg时小鼠开始出现死亡；而40mg/kg时大多达不到手术要求，剂量为80mg/kg时能满足手术所需麻醉深度；肝损伤组中，最佳麻醉剂量为正常组的1/8，且麻醉起效时间早于正常组，麻醉维持时间较正常组明显延长。本手术操作时间较短，正常组、肝损伤组分别在80mg/kg、10mg/kg麻醉剂量下保持了良好麻醉状态，保证了手术的顺利进行，术后均正常复苏。小鼠在肝损伤情况下，戊巴比妥钠的麻醉剂量大大降低，究其原因，考虑戊巴比妥钠主要由肝微粒体细胞色素P450 （CYP）代谢而失去活性，少量以药物原形经肾排泄[7]，在肝损状态下其代谢发生现障碍，在血中维持较高血药浓度。手术缝合时，在皮下、切口表面涂摸青霉素，是预防动物术后发生感染的重要手段。在本实验中，术后没有动物发生切口渗液、化脓等感染现象，切口均达一期愈合.动物麻醉后体温逐渐下降[1]，在术中术后采用保温手段，可以明显缩短深度麻醉和麻醉后恢复自主期的时间[8]，提高成活率，本实验中无小鼠死亡现象。卵巢切除术在研究骨质疏松症、非酒精性脂肪肝等研究中广泛应用[9-10]，因此对此手术进行改良探究，为动物模型构建提供技术支撑。

综上所述，在肝功正常情况下，使用常规剂量的戊巴比妥钠进行麻醉是安全的，而在肝功损伤情况下，戊巴比妥钠麻醉剂量大大降低，小剂量即可达到麻醉效果，但应慎用，或者选择其它的非肝脏代谢途径代谢的麻醉剂。本实验为戊巴比妥钠在对生理及病理状态小鼠实施麻醉时的安全有效剂量提供了参考，并改良了围手术期处理，大大提高了动物术后存活率，为与卵巢切除相关的动物模型奠定了基础。

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