两种土荆皮习用药材提取物体外抗真菌活性研究

【摘要】 目的 研究市场两种习用土荆皮代用药材的体外抗真菌活性，为土荆皮的习用药材(水翁皮与余甘子皮)的药理应用提供依据。方法 采用药基琼脂稀释法，研究水翁皮与余甘子皮的提取物对11株浅表性皮肤癣菌的最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC)。结果 土荆皮的提取物对武汉须毛癣菌、武汉滑癣菌的MIC和MFC 3.13 μl/ml,对其余9株皮肤癣菌的MIC和MFC 6.25 μl/ml,水翁皮与余甘子皮的提取物对试验11株皮肤癣菌的MIC和MFC>50 μl/ml, 达克宁的MIC和MFC

【关键词】

土荆皮；水翁皮；余甘子皮；抗真菌活性；体外

Study on antifungal activity of cortex pseudolaricis alternative medicine in vitro

GUI Shu-hua, FU Tao, WANG Jie,et al.

New Drug R&D Dept. in Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006,China

【Abstract】 Objective To study the antifungal activity of extracts from Bark of Cleistocalyx operculateand Phyllanthus emblica L. in vitro for their application of medicinal pharmacology. Methods The minimum inhibitory concentration (MIC) and the minimum concentration (MFC) of extracts from Bark of Cleistocalyx operculateand Phyllanthus emblica L. against 11 strains dermatophytes were determined by media dilution method. Results Apart from Trichonphyton mentagrophyton (Wuhan strain) and Candida parapsilosis (Wuhan strain) (MIC=3.13μl/ml), MIC of Cortex Pseudolarici extract against other strains were 6.25μl/ml, MFC value were similar to its MIC. All the strains were not susceptible to extracts from Bark of Cleistocalyx operculateand Phyllanthus emblica L, their MIC>50 μl/ml, miconazole nitrates MIC and MFC

【Key words】

Cortex Pseudolarici； Cleistocalyx operculate； Phyllanthus emblica L;Antifungal activity; In vitro

土荆皮来源于松科植物金钱松(Pseudolarix kaempferi Gord)的干燥根皮和近根树皮。最早见于清代赵学敏所著《本草纲目拾遗》, 性辛、温、有毒、止痒杀虫, 用于治疗癣症。经研究发现, 其含有二萜类、三萜类、三萜内酯及甾醇类等成份。现代药理实验表明其具有抗真菌、抗肿瘤、抗生育、使胆囊自截等作用［1］。

金钱松为我国二级保护植物，资源难求，在临床上用药治疗有一定的困难，因此水翁皮与余甘子皮常作为土荆皮的替代品在临床上使用。但对于水翁皮和余甘子皮是否真正具有抗真菌活性尚缺乏实验研究报道。本课题拟对作为“土荆皮”入药的习用替代药材水翁皮与余甘子皮进行抗真菌活性筛选研究，为水翁皮与余甘子皮的临床应用提供依据。

1 资料与方法

1.1 仪器 Spx-150B生化培养箱(上海康华生化仪器厂)，EYELA型旋转蒸发仪，水浴锅，高压灭菌锅，蛇形冷凝管，打粉机，小研钵，一次性试管，三角烧瓶，蒸发皿，移液管 1、2、10 ml各若干。

1.2 实验药物与试剂 沙氏琼脂培养基(批号200903023)；达克宁，购自广东市药检所，批号：20080301；药材1购于广州杏园春大药房，经广州中医药大学中药鉴定教研室吴文如讲师鉴定为桃金娘科植物水翁(Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr. Et Perry)的树皮水翁皮；药材2购于广州致信药业，经鉴定为桃金娘科植物水翁(Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr. Et Perry)的树皮水翁皮药材；药材3购于云南村药材市场，经鉴定为大戟科叶下珠属植物余甘子(Phyllanthus emblica L.)的树皮余甘子皮。药材4采于四川五块石药材市场，经鉴定为松科植物金钱松(Pseudolarix kaempferi Gord)的干燥树皮。

1.3 实验菌种 11株菌种，由上海华山医院皮肤科真菌室以及武汉同济医科大学医学真菌室提供。上海株：断发毛癣菌、絮状表皮癣菌、羊毛状小孢子菌，武汉株：须毛癣菌、猴毛毛癣菌、黑青毛癣菌、白色念珠菌32035、白色念珠菌38253、犬状小孢子菌、滑念珠菌、无色红毛毛癣菌。

2 方法与结果

2.1 实验样品制备 分别取土荆皮、水翁皮和余甘子皮药材粗粉各约50 g，分别加70%乙醇回流提取2次，第一次加入10倍量体积的乙醇，第一次加入8倍量体积的乙醇，1.5 h/次。过滤，洗涤药渣后，合并提取液，用旋转蒸发仪回收至无醇味，水液回收至少量，转移至蒸发皿，水浴蒸干，并置于60℃烘箱中烘干得浸膏。用打粉机将浸膏粉碎，过100目筛，得实验粉末。

2.2 含药培养基的制备(试管药基法)

称取沙氏琼脂培养基39 g，加入600 ml蒸馏水使充分溶解后，置高压灭菌锅中115℃灭菌15 min，备用。称取样品各2.2 g，加入44 ml灭菌培养液，即得5%浓度的样品，分装2 ml至试管并置斜面。依次稀释至浓度2.5%, 1.25%，0.625%, 0.313%l, 0.152%, 0.076%浓度,同法置斜面。

2.3 菌液制备 将沙氏培养基斜面上25℃孵育2周的菌种，用接种钩挑取适量菌落放入消毒乳钵中，加入1 ml生理盐水，研磨成真菌混悬液，再在血细胞计数板上用生理盐水调整菌液浓度到1×105~106/ml。

2.4 菌液接种 对照管和试验管每管均用划线法接种1白金耳，置28℃恒温箱中培养，每日观察实验结果。

2.5 杀菌试验 将上述培养未生长的菌落接种至液体培养基，继续孵育12 d，每天观察实验结果。

3 实验结果

判断标准：以有无菌生长为判断标准，与阴性对照组(菌落生长正常)比较，有肉眼可见菌落生长者为无抑菌作用，无菌落生长者的药物最低浓度为药物的最低抑菌浓度(MIC)。

药基法观察结果:阴性对照组试管均在接种1~3 d后菌落开始正常生长，水翁皮1、水翁皮2及余甘子皮含药基试管与对照组相比无明显的抑制生长效果，对11菌种MIC均>50 μl/ml。土荆皮有较强的抑菌活性，除对武汉须毛癣菌、武汉滑念珠菌的MIC为3.13 μl/ml外，其余菌株均为6.25 μl/ml。阳性对照药达克宁对11株皮肤癣菌株均表现出显著抑菌活性， MIC均

杀菌实验结果:含达克宁药基接种到液体培养基后，再培养的菌落，生长十分缓慢，说明达克宁有明显的抑菌作用，观察12 d后，液体培养基中仍无真菌生长的浓度判断为药物的MFC，达克宁MFC

4 讨论

土荆皮又名土槿皮、金钱松、水松皮、荆树皮，为松科植物金钱松(Pseudolarix kaempferi Gord)的干燥根皮或近根树皮［2］，为《中华人民共和国药典》收载的常用中药，性温，味辛；有毒，有杀虫、止痒作用，常用于疥癣瘙痒。其中含有二萜类、三萜类、三萜内酯及甾醇类等成分,具有强烈的抗真菌、抗肿瘤作用［3,4］,其应用前景广阔,但当前有限的植物资源已成为开发其活性产物的巨大障碍。

金钱松(Pseudolarix kameferi Gord)是我国特有的著名古老孑遗松(Pinaceae)树种，大约起源于白垩纪中晚期，曾广泛分布于北纬33°~52°地区［5］。在更新世大冰期后，各地金钱松相继灭绝，只有在长江中下游地区幸存下来,现在正处于濒危状态，已被列为国家二级保护植物［6，7］。该树种的根皮和近根皮部分被称为土荆皮，在我国民间作为中药入药已有悠久的历史。

水翁皮，为桃金娘科水翁Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr. Et Perry的干燥树皮，味辛，性温，有止痒，杀虫功效，可用于癣癞，阴囊瘙痒，脚癣，皮肤瘙痒等。据文献报道，广东习用其作土荆皮入药。据考证，广东在清代(公元1711年)已开始应用，用于杀虫，治癣。疗效可靠，与正品相仿。为了与正品区别，可称为广东土荆皮入药［8］。

余甘子皮是大戟科叶下珠属落叶乔木余甘子(Phyllanthus emblica L.)的树皮，分布于我国的福建、广东、广西、云南等省及东南亚、印度等地。经研究发现，主要含酚性成分、有机酸、还原糖、多糖、黄酮类、类酯与香豆精、植物甾醇、三萜、挥发油等，果仁中还含有不饱和脂肪酸。全世界有17个国家或民族在自己的传统药中使用余甘子［9］。

目前国内市场上土荆皮的代用药材十分混乱，主要流行的土荆皮习用药材主要为水翁皮［8］、紫荆皮［10，11］、余甘子皮［12］。由于来源科属不同，功能主治互有差别，亟待统一标准，正本清源，以达到一药一名，规范用药。建议国家药典委员会尽快制定质量标准。临床医生及药房工作人员在使用土荆皮时，在质量标准未统一的情况下， 应详细了解本地的使用习惯，以期正确使用和鉴别土荆皮。

水翁皮与余甘子皮作为土荆皮入药，是否同土荆皮一样具有抗真菌活性，目前未见有实验室报道。在我们的研究结果中，水翁皮和余甘子皮提取物并没有体现出体外抗真菌活性，因此在临床使用中，作为土荆皮的习用药材，水翁皮和余甘子皮用治癣类等真菌感染所致皮肤类疾病，可能并不具有土荆皮同样的疗效，此研究结果对土荆皮的临床使用有一定的提示。

参考文献

［1］ 宋永锋,陈虹,李灵芝.土荆皮的研究进展.天津药学,2001，12,13(6)：9-10.

［2］ 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编.人民卫生出版社,1992:628.

［3］ Chen K, Zhang YL, Li Z L,et al. St ructure and stereochemistry of pseudolarolide J,anovel nortriterpene lactone from pseudolarix kaemp feri. JNa Prod,1996,59 (12)：1200-1202.

［4］ Li X C,Elsohly H N. Two auronols f rom Pseudolarixamabilis.J Nat Prod,1999,62 (5)：767-769.

［5］ 王理达,胡迎庆,果德安,等.13种生药提取物及化学成分的抗真菌活性筛选.中草药,2001,32(3)：241-244.

［6］ 魏学智,胡玉熹,林金星,等.中国特有植物金钱松的生物学特性及其保护.武汉植物学研究,1999,17(增刊)：73-77.

［7］ 傅立国.中国植物红皮书一稀有濒危植物.第1册.北京：科学出版社,1992.

［8］ 房志坚,王瑾,罗集鹏.土荆皮与广东土荆皮的生药鉴定.中药材, 1994,17(2),15-19.

［9］ 朱艳媚.余甘子的研究进展.中华实用中西医杂志,2007, 20 (7)：622-623.

［10］ 游燕.土荆皮和紫荆皮的鉴别.时珍国医国药,2001,11(5)：420-421.

［11］ 李素芹.来源混乱的紫荆皮的鉴别.江苏中医药, 2004, 25(7)：46-47.