丹参药材中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的不同提取方法的探讨

摘要：目的：研究丹参药材不同提取工艺的丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量高低。方法：采用HPLC法，比较了两种不同提取方法的丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量高低。 结果：提取方法丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量明显高于药典方法。结论：该提取方法节省溶剂，重现性好。

关键词：丹参酮ⅡA;丹酚酸B；HPLC

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2008)04-0873-03

丹参为唇形科植物(Salvia Miltiorrhiza Bge)的干燥根及根茎[1],具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦之功。临床上用于治疗心绞痛、冠心病等心血管疾病。丹参主要含有脂溶性和水溶性两类成分[2]。脂溶性成分主要是丹参酮类,而水溶性成分主要是酚酸类,如丹参素、原儿茶醛等。2005版《药典》一部复方丹参片下丹参的提取采用95％乙醇加热回流1.5h药渣再用50％乙醇回流1.5h。笔者通过研究发现丹参提取采用70％乙醇10、8、6倍量分别回流2、1、1h，通过HPLC测定丹参酮ⅡA含量明显高于药典方法。而且该方法节省溶剂、重现性好、操作简便。故本文就其含量测定方面的研究工作做一简要介绍。具体如下。

1仪器和试药

1.1仪器

Waters515双泵，2487双波长紫外检测器，WDL-95色谱工作站（大连化学物理研究所生产）。

1.2试药

甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司),乙腈色谱纯（德国Merck公司），水为超纯水,其他试剂均为分析纯。丹参药材购于南京市药材公司,经南京中医药大学鉴定教研室吴启南教授鉴定，符合《中华人民共和国药典》(2005版)有关规定。

1.3对照品

丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用,批号:110766-200416)。丹酚酸B（中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：111562-200302）。

2实验方法与结果

2.1丹参酮ⅡA含量测定方法

2.1.1色谱条件[3-6] 色谱柱：Lichrospher C18 (4.6mm×250mm);流动相:甲醇∶水(70∶30);流速:1.0mL/min;检测波长:270nm;柱温:30℃;AUFS=0.1。

2.1.2对照品溶液的制备精密称取丹参酮ⅡA 5.46mg,置于25mL量瓶内,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。然后精密吸取1mL置于5mL量瓶内,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为43.68μg/mL淫羊藿苷对照品溶液（色谱图如图1所示）。

2.1.3标准曲线的制备分别精密吸取上述0.2184mg/mL的丹参酮ⅡA对照品2、4、6、8、10mL于25mL量瓶加甲醇稀释至刻度摇匀，得到浓度分别为17.472、34.944、52.416、 69.888、87.36μg/mL。分别吸取上述对照品溶液各5μL，注入液相色谱器仪中,测定色谱峰面积,以进样量X为横坐标,色谱峰面积Y为纵坐标,绘制标准曲线,经线性回归,回归方程为Y=1386532X-1832,r=0.9996,由测定结果显示,丹参酮ⅡA进样量在0.08736～0.4368μg范围内线性关系良好。

2.1.4供试品溶液的制备称取丹参药材8份各20g，分别按两种不同提取工艺(70％乙醇10、8、6倍量分别回流2、1、1h和95％乙醇加热回流1.5h药渣再用50％乙醇回流1.5h)制备的干燥体约0.2g研细并精密称定，置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量超声处理15min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5mL置25mL量瓶用甲醇定容即得。

2.1.5精密度试验考察分别精密吸取同一对照品溶液5μL,连续进样5次,结果所得丹参酮ⅡA的 RSD为1.68%。

2.1.6重复性试验考察取5份同一批样品,按供试品溶液制备方法制备,进行测定,结果,丹参酮ⅡA的平均含量RSD为2.6%。

2.1.7稳定性试验考察取同一供试品溶液,按0、2、4、6、8h时间间隔,分别进样分析,测定色谱峰面积,结果丹参酮ⅡA在8h内稳定,RSD为2.3%。

2.1.8回收率试验考察精密称取已测知丹参酮ⅡA含量的样品及一定量的对照品(共5份)按样品含量测定项下方法操作,测定,结果丹参酮ⅡA平均回收率为99.7%,RSD为2.6%。

2.1.9样品测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL,注入高效液相色谱仪,按外标法计算。

2.1.10实验结果见表1和表2。

2.2丹酚酸B的含量测定方法

2.2.1色谱条件色谱柱：Lichrospher C18（4.6mm×250mm）；流动相：乙腈∶甲醇∶甲酸∶水（10∶30∶1∶59）；流速：1.0mL/min；检测波长：286nm；柱湿：30℃；AUFS＝1.0。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B 15.3mg，置于25mL量瓶内，加水溶解并释释至刻度，摇匀。然后精密吸取1mL置于10mL量瓶内，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为61.2μg/mL丹酚酸B对照品溶液（色谱图如图2所示。）

2.2.3标准曲线的制备分别精密吸取上述0.612mg/mL的丹酚酸B对照品1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL于25mL量瓶加水稀释至刻度摇匀，得到浓度分别为24.48、36.72、48.96、61.2、73.44、85.68μg/mL分别吸取上述对照品溶液各5μL，注入液相色谱器仪中，测定色谱峰面积，以进样量X为横坐标，色谱峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，回归方程为Y＝51128.1X-8.7849，r＝0.9996，由测定结果显示，丹酚酸B进样量在0.1224～0.4284mg范围内线性关系良好。

2.2.4供试品溶液的制备分别称取2.1.4项下的干燥体约2g研细并精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，加水50mL称重，超声处理30min，放冷，称重补足减失的重量，摇匀，离心取上清液即得。

2.2.5精密度试验考察分别精密称取同一对照品溶液5μL，连续进样5次，结果所得丹酚酸B的RSD为1.76％。

2.2.6重复性试验取5份同一批样品，按供试品溶液制备方法制备，进行测定，结果丹酚酸B的平均含量RSD为2.2％。

2.2.7稳定性试验考察取同一供试品溶液，按0、2、4、6、8h时间间隔，分别进样分析测定色谱峰面积，结果丹酚酸B在8h内稳定，RSD为2.1％。

2.2.8回收率试验考察精密称取已测知丹酚酸B含量的样品及一定量的对照品（共5份）按样品含量测定项下方法操作，测定，结果丹酚酸B平均回收率为99.8％，RSD为2.4％。

2.2.9样品测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入高效液相色谱仪，按外标法计算丹酚酸B含量。

2.2.10实验结果见表3和表4。

3讨论

丹参功善活血化瘀，性微寒而缓，能祛瘀生新而不伤正，善调经水，为妇科调经常用药。文献中对于丹参药材中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的提取方法报道较多。本文采用70％乙醇提取和采用药典方法95％乙醇提取相比，在保证丹参酮ⅡA和丹酚酸B的提取率的同时可以节省溶剂，这一点对于大工业生产可以起到节省成本和降低后续工序能耗的作用。本文在测定丹酸酮ⅡA的实验过程中，首先采用药典方法流动相：甲醇∶水（73∶27）发现分离效果不是很好，之后改变比例甲醇∶水（70∶30）取得满意效果。通过HPLC法测定表明本文方法的丹参酮ⅡA含量明显高于药典方法。更为重要的是该方法重现性好。因此笔者认为复方丹参片下丹参的提取采用70％乙醇10、8、6倍量分别回流2、1、1h较为适宜。最后本文的试验结果对于丹参药材的提取精制具有现实的参考价值。

参考文献

［1］林秀芬.中药丹参药理的研究进展［J］.天津医科大学学报，2004：10.

［2］黄泰康.常用中药成分与药理手册[M].北京：中国医药科技出版社,1994：586.

[3]陶春梅，于治国.丹参药材中丹参素和原儿茶醛含量的HPLC测定法［J］.西北药学杂志，2006,21(4):155-156.

[4]李铁强，白岩.高效液相色谱法测定乙肝扶正胶囊中丹参酮ⅡA的含量［J］.中国药事，2006,20(11).

[5]伍毅，吴金美.复方田七滴丸质量标准的研究［J］.江西中医学院学报，2006，1018（5）.

[6]国家药典委员会.中国药典2005版一部[S].北京：化学工业出版社，2005:527.