生龙接骨胶囊的质量标准的研究

摘要：目的 建立生龙接骨胶囊的质量标准。方法 采用薄层色谱法对生龙接骨进行定性鉴别，并应用高效液相色谱法对制剂中三七的主要活性成分人参皂苷Rg1进行含量测定。结果 生龙接骨的薄层色谱图斑点清晰，阴性对照无干扰；人参皂苷Rg1在1.138～11.38μg范围内与峰面积的线性关系良好，r=0.9994、专属性强、重现性好、平均回收率为96.5%，RSD%=0.35%（n=6）。结论 所建立的鉴别方法操作简单，专属性强，定量方法稳定灵敏，重现性良好，能够较好控制生龙接骨胶囊质量。

关键词：生龙接骨胶囊；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准

生龙接骨胶囊主要由三七、当归、熟地、鸡血藤、续断、骨碎补等17味药材组成，具备温经行血、续筋接骨、消肿止痛以及通络散瘀的作用，临床主要应用于骨折、跌打损伤、愈合较慢的患者中[1]。目前，该制剂已部分应用于临床治疗中，为有效控制生龙接骨胶囊的生产质量，本文对其质量标准进行了系统的研究。

1 仪器和试剂

高效液相色谱仪（Agilent1100，美国）；电热恒温水浴锅（泰斯特，天津）；电热恒温鼓风干燥箱（精鹰医疗器械，山东）；Mole search超纯水仪（摩尔科技，上海）等仪器。

人参皂苷Rg1对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110703-200424）；自制生龙接骨胶囊（生产批号：20060816、20060817、20060818）；乙腈、甲醇为色谱纯；正丁醇、磷酸、乙醚、氨水均为分析纯。

2 制作方法

十七种成分，将三七和血竭粉碎为细粉，备用；其余当归等成分加入到水中进行二次煎煮，其中，第一次煎煮时间为2h，第二次煎煮时间为1.5h，滤过。将上述滤液合并，并浓缩为密度1.30，约为70℃以上稠膏，烘干，将其粉碎为细粉，然后将上述三七等细粉加入，混合均匀，制作成颗粒，装入胶囊，共制为1000粒颗粒。该药物属于硬胶囊，内容物为棕褐色、红棕色的粉末、颗粒，气微、味微苦。

3 鉴别

3.1供试品溶液制备 取5g本品，研为细末，加入25ml甲醇，超声下处理30min，滤过，蒸干滤液，在残渣中加入20ml水溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，提取20ml/次；合并正丁醇液，应用氨试液进行2次洗涤，洗涤20ml/次；将氨试液弃去，再用水洗涤3次，30ml/次，然后将水液弃去；在残渣内加入5ml水有效溶解；应用D101型大孔树脂柱，依次应用50ml水和50ml的30%乙醇将其洗脱，丢弃洗脱液；继续用50ml的70%乙醇进行洗脱，对洗脱液进行收集，蒸干后，在残渣中加入1ml甲醇进行溶解，备用。

3.2阴性样品溶液制备 除川续断外，其余各种药物均按照处方量进行投料，作为阴性样品；然后按照上述制备方法，制成阴性对照溶液。

3.3对照品溶液制备 将川续断皂苷Ⅵ作为对照品，加入甲醇后，将其制作为每1ml中含有1mg溶液。

3.4实验方法 按照《中国药典》2010年版一部附录VIB制定的薄层色谱法进行试验[2]。首先分别吸取5～10μl供试品溶液和阴性样品溶液，及2μl对照品溶液，将其点到同一个硅胶G薄层板上，薄层板成分主要为羧甲基纤维素钠，展开剂主要应用在10℃环境下放置的三氯甲烷-甲醇-水，展开后将其取出，晾干，应用10%硫酸乙醇溶液喷洒，放置到105℃的环境下加热处理，直到斑点显色清晰为止。在供试品色谱内，于对照品色谱互相对应位置，其所显示的斑点颜色相同，且在阴性样品色谱图中无斑点出现。

3.5实验结果 通过阴性样品对照实验和三批样品实验结果的观察分析，于供试品色谱内，和对照品色谱相应位置，其所显示出的斑点颜色相同。且其分离效果较好，不会与阴性样品产生较大干扰。

4 含量测定

4.1色谱条件和系统适用性试验 将十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂；将乙腈-0.1%磷酸溶液（23：77）作为流动相；检测波长为203nm；柱温为40℃；按人参皂苷Rg1峰对理论板数进行计算，应不低于3000。

4.2供试品溶液的制备 取装量差异下的本品，研细后取约2g，精密称定，置于具赛锥形瓶内，精密加入50ml甲醇，对其重量进行称定，加热回流2h，静置冷却后，再次对其重量进行称量；甲醇补充缺失重量，混摇均匀后，滤过处理；精密量取25ml续滤液，水浴蒸干，在残渣中加入30ml水进行溶解，转移到分液漏内，20ml乙醚振摇提取，弃乙醚液，再用水饱和的正丁醇液振摇提取4次，20ml/次；合并正丁醇液，继续使用30ml氨试液进行洗涤，再应用20ml正丁醇饱和的水进行洗涤，分取正丁醇液水浴蒸干，用甲醇对残渣进行溶解，定容于10ml容量瓶内，滤过即得[3]。

4.3测定方法 分别精密吸取20μl供试品溶液和对照品溶液，将其注入到液相色谱仪内，见图1、图2。本品每粒含三七以人参皂苷Rg1（C42H72O14）进行计算，不能少于0.60mg。

图1 对照品色谱图

图2 供试品色谱图

4.4线性范围考察 精密称定14.23mg人参皂苷Rg1对照品，将其放置到25ml的量瓶内，加入甲醇定容，分别精密量取1ml、3ml、5ml、7ml以及10ml，置于10ml量瓶内，加入甲醇至刻度位置，充分摇匀后，精密吸取上述溶液20ul，在色谱条件下测定峰面积；将对照品量作为横坐标，峰面积作为纵坐标，对其进行线性回归分析。结果表明，在1.138～11.38ug范围内，人参皂苷Rg1的线性关系良好，线性回归方程：y=254648×-9204.4，R=0.9994。

4.5精密度试验 称取对照品溶液，每毫升0.2845mg，重复性进行6次测定，结果显示具有较好的精密度，RSD%为0.48%（n=6）。

4.6稳定性试验 称取对照品溶液，每毫升0.2845mg，每2h进样1次，结果显示，在10h内，人参皂苷Rg峰面积无明显变化，表明对照品稳定性好，RSD%为0.14%（n=6）。

4.7重复性试验 在同一批样品内，共称定6份，应用上述色谱试验法进行检测，结果显示样品均具有较好的重复性，RSD%为0.35%（n=6）。

4.8加样回收率试验 称取1g本品（1.905mg/g）6份，分别将其加入到一定量的对照品溶液内，按照含量测定法进行以下试验，对回收率进行计算，回收率计算公式为：（实测值-样品所含人参皂苷Rg1含量）/加入人参皂苷Rg1量×100%，本组平均回收率达到96.5%。

5 结论

本文主要通过薄层色谱法对续断中川续断皂苷Ⅵ进行鉴别，该方法操作简便，且具有较强的专属性和重现性，并应用高效液相色谱法对三七中的人参皂苷Rg1进行含量测定，该法线性范围宽、专属性强，重现性好，且样品稳定可控，在制剂质量标准的控制中发挥着十分重要的作用。

参考文献：

[1]李勇强，牛海彬，侯宇，等.生龙接骨胶囊在骨折愈合早中期X光影像学研究[J].医学美学美容（中旬刊），2014，01（08）：56-57.

[2]郭征兵，徐倩.生龙接骨胶囊薄层色谱鉴别[J].江西医药，2010，45（06）：585.

[3]孔令提，代龙.接骨七厘散软胶囊内容物加PEG400湿法超微粉碎工艺研究[J].时珍国医国药，2009，20（11）：2810-2812.