TNF-α基因单核苷酸多态性与HBV感染结局

【关键词】 ,乙型肝炎；TNF-α基因；单核苷酸多态性（SNPs）；单体型

摘要： 目的 探讨肿瘤坏死因子α（TNFα）基因启动子区238G/A、-857T/C、-863C/A与乙型肝炎病毒（HBV）感染结局之间的关系。方法 采用病例-对照研究方法，募集244例HBV自限性感染者、212例HBsAg携带者和391例慢性乙型肝炎患者作为研究对象，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法，对（TNF-α）基因启动子区-238G/A、-857C/T、-863C/A基因型进行测定。结果 自限性感染者携带-238A等位基因的频率显著低于HBsAg携带者（P=0.04）和慢性乙肝患者（P=0.047）；慢性乙肝患者携带TNF-α-857C等位基因的频率显著高于HBsAg携带者（P=0.0008）和自限性感染者（P=0.03）；慢性乙肝者TNF-α-863A等位基因频率显著高于HBsAg携带者（P=0.02）。应用多元Logistic回归分析，控制年龄、性别等混杂因素后，慢性乙肝患者与HBV自限性感染者比较，TNF-α-857CC和TNF-α-238 GA与慢性乙肝显著关联（OR=1.53,P=0.044;OR=2.11，P=0.045）；慢性乙肝患者与HBsAg携带者比较，TNF-α-857CC与慢性乙肝显著关联（OR=1.92,P=0.004）；HBsAg携带者与HBV自限性感染者比较，TNF-α-238GA与HBsAg携带者显著关联（OR=2.34,P=0.020）。结论 TNF-α基因启动子区多态性可能是影响HBV感染结局的重要危险因素。

关键词： 乙型肝炎；TNF-α基因；单核苷酸多态性（SNPs）；单体型

Relationship between polymorphisms of TNF-α gene promoter region and HBV infection outcome

Abstract： Objective To determine whenther -238G/A,-857T/C and -863C/A polymorphisms of tumor necrosis factor-alphya (TNF-α) gene promoter were associated with outcomes of hepatitis B virus (HBV) infection.Methods A total of 244 HBV self-limited infected subjects,212 asymptomatic HBsAg carriers (HBsAg carriers) and 391 chronic hepatitis B (HB) patients were recruited to conduct a case-control study.TNF-α-238G/A,-857C/T and -863C/A gene promoter polymorphisms were examined by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP).Results The frequency of -238 allele A in self-limited individuals was 2.6%,significantly lower than 5.0% in chronic HB patients and 5.3% in HBsAg carriers (P=0.04 and P=0.047),respectively.The frequency of TNF-α-857 allele C in chronic HB patients was 87.5%,significantly higher than 80.5% in HBsAg carriers and 82.8% in self-limited individuals (P=0.0008 and P=0.03),respectively.The frequency of TNF-α-863 allele A in chronic HB group was 77.5%,significantly higher than 71.5% in HBsAg carriers (P=0.02).Multiple logistic regression analyses indicated an increased risk of chronic HB associated with TNF-α-238GA and -857CC after gender and age adjusting (OR=1.53,P=0.044;OR=2.11,P=0.045),and HBsAg carriers with -857CC significantly increasing risk of chronic HB associated with TNF-α -238GA and -857CC after gender and age adjusting (OR=1.53,P=0.044;OR=2.11,P=0.045),an HBsAg carriers with -857CC significantly increasing risk of chronic HB(OR=1.92,P=0.004),and -238GA associated with and increasing risk of HBsAg carriers (OR=2.34,P=0.020).Conclusion TNF-α promoter polymorphism is probably an important risk factor of the influence of outcome of HBV infection.

Key words： hepatitis B;tumor nectosis factor-alpha(TNF-α)gene;single nucleotide polymorphisms(SNPs);genotype

乙型肝炎的治疗是亟待解决的全球性公共卫生问题〔1〕。感染乙型肝炎病毒(HBV)后可产生自限性感染、HBsAg携带者、慢性乙肝多种不同临床结局。HBV感染结局多样性一直是研究者关注的问题，从遗传易感性角度探讨其原因是一个重要研究方向。细胞因子在抵抗病毒感染中起重要作用，它能够间接和直接抑制病毒复制〔2〕。肿瘤坏死因子α（TNF-α）的转录水平与TNF-α启动子区单核苷酸多态性有关〔3〕。本研究比较了TNF-α启动子区-238G/A、-857C/T及-863C/A基因型在自限性感染、HBsAg携带状态和慢性乙肝3种不同HBV感染结局者中分布频率的差异，探讨TNF-α基因多态性与HBV感染结局关系。

1 对象与方法

11 对象 采用病例对照研究，于2002年11月～2004年3月在北京佑安医院募集慢性乙肝患者391例，HBsAg携带者244例，自限性感染者212例。研究对象的诊断参照2000年中华医学会传染病分会，肝病学会联合修订病毒性肝炎防治方案的标准〔4〕。所有研究对象均自愿同意参加本次研究。受试者均为中国北方汉族，并除外合并其他肝炎病毒感染者。

12 血清学检测 用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBsAg，抗-HBs，HBeAg，抗-HBe和抗HBc。

13 基因型检测 基因组DNA由酚-氯仿法从外周血抽提。用聚合酶链-限制性片段长度多态性方法，检测TNF-α启动子区-238G/A〔5〕、-857C/T〔6〕和-863〔7〕。

14 统计分析 采用FoxPro60软件建立数据库，SAS612软件进行t检验、Fisher精确概率法和χ2检验，进行组间比较，所有的P值均由双侧检验确定。采用非条件Logistic回归模型进行多因素分析。

2 结果

21 一般人口学持征 慢性乙肝患者391例(其中男性311例，女性80例)，HBsAg携带者244例，其中男性140例，女性104例；自限性感染者212例，其中男性110例，女性102例。慢性乙型肝炎病人、HBsAg携带者、HBV自限性感染者3组人群的平均年龄分别为332，307和337岁。

22 TNF-α启动子区基因多态性与HBV感染结局的关系

221 TNF-α-238G/A位点等位基因及基因型频率在3组研究对象中的分布 慢性乙肝患者与HBsAg携带者携带TNF-α-238A等位基因的频率差异无统计学意义(P=079)；自限性感染者携带A等位基因的频率显著低于HBsAg携带者(χ2=435，P=004)和慢性乙肝患者(χ2=396，P=0047)。3组人群均未检测到TNF-α-238AA基因型。慢性乙肝组与HBV携带组TNF-α-238的GG、GA基因型分布差异无统计学意义(P=078)。对照人群自限性感染组GG及GA基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P=071)，并与慢性乙肝患者(χ2=413，P=004)及HBsAg携带者(χ2=455，P=003)的基因型分布差异有统计学意义。

222 TNF-α-857C/T位点等位基因及基因型频率在3组研究对象中的分布 慢性乙肝患者携带TNF-α-857C等位基因的频率为875%，高于HBsAg携带者的805%(χ2=112，P=00008)和自限性感染者的828%(χ2=496，P=003)；HBsAg携带组与自限性感染组比较差异无统计学意义(P=038)。慢性乙肝组中TNF-α-857CC、CT及TT基因型的频率分别为798%，153%和49%，HBsAg携带组和HBV自限性感染组这3种基因型频率分别为680%，250%，70%和70.3%，250%，47%。对照人群自限性感染组的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P=007)。慢性乙肝组的基因型频率分布与HBsAg携带组(χ2=113，P=0004)和自限性感染组比较差异有统计学意义(χ2=847，P=0015)，但后两者差异无统计学意义(P=059)。

223 TNF-α-863C/A位点等位基因及基因型频率在3组研究对象中的分布 慢性乙肝组TNF-α-863位点等位基因A频率为775%，高于HBsAg携带者的715%(χ2=576，P=002)；HBV自限性感染组为741%，与慢性乙肝组和HBsAg携带组比较差异无统计学意义(P=018，P=039)。慢性乙肝组CC、CA及AA基因型频率为87%、276%和637%，与HBsAg携带组的152%，266%和582%比较差异有统计学意义(χ2=641，P=004)。对照人群HBV自限性感染组CC、CA及AA基因型频率为90%，340%和570%，其分布符合Hardy-Weinberg平衡(P=009)。HBV自限性感染组与HBsAg携带组和慢性乙肝组比较差异无统计学意义(P=006；P=024)。

23 基因多态性与HBV感染结局关联的多元Logistic回归分析 为控制年龄、性别等因素引起的混杂偏倚影响，采用多元非条件Logistic回归分析，TNF-α-238/-857/-863与HBV感染不同结局的关联性分析。结果显示，在控制了年龄、性别混杂因素后，慢性乙肝病人和HBV自限性感染者比较，携带TNF-α-857CC基因型者感染HBV后，较携带TNF-α-857TT或CT基因型者发生慢性乙肝的风险增加(OR=153；P=0044)，而携带TNF-α-238GA者则较TNF-α-238GG携带者发生慢性乙肝的风险增加(OR=211；P=0045)；慢性乙肝病人和HBsAg携带者比较，携带TNF-α-857CC基因型者较携带TNF-α-857TT或CT者增加成为慢性乙肝的风险(OR=192；P=0004)；HBsAg携带者和HBV自限性感染者比较，携带TNF-α-238GA者在感染HBV后，较GG基因型者增加发展为HBsAg携带者的风险(OR=234；P=0020)。

3 讨论

编码TNF-α的基因位于人类第6号染色体短臂HLA-Ⅲ类基因区内。它可调节HLA-Ⅱ类分子和黏附分子的表达。本研究以慢性乙肝病人作为病例组，HBV自限性感染组作为对照组进行分析比较时，感染HBV后携带TNF-α-238GA基因型者成为慢性乙肝的风险增加，当以HBsAg携带者作为病例组，自限性感染组作为对照组进行分析比较，感染HBV后携带TNF-α-238GA基因型者成为HBsAg携带者的风险也增加。本研究观察到慢性乙肝患者携带TNF-α-857C等位基因的频率，显著高于HBsAg携带者HBV自限性感染者。调整年龄、性别等因素的混杂作用后，TNF-α-857CC仍然是影响HBV感染结局(慢性乙肝和HBsAg携带)的危险因素。结果提示，TNF-α启动子区的等位基因与HBV感染后的结局相关，TNF-α启动子区基因多态性在清除HBV中可能发挥了重要作用。其机制可能与基因多态性影响TNF-α转录水平，从而降低血清TNF-α水平，导致炎症连锁反应降低有关〔8〕。

参考文献

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