C—myc和PTEN蛋白表达在宫颈癌中的临床意义

【摘要】目的探讨宫颈癌组织中C-myc和PTEN蛋白表达的临床意义。方法应用免疫组化PV-9000两步法检测宫颈癌、宫颈上皮内瘤变（CIN）及正常宫颈组织中C-myc和PTEN的表达。结果C-myc蛋白在宫颈癌中表达明显高于CIN和正常宫颈组织（P

【关键词】宫颈癌；C-myc；PTEN；免疫组织化学

宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率位于第二位，早期诊断一直是人们关注的焦点。肿瘤的发生是一个复杂的过程。其中，癌基因的激活及抑癌基因的失活是肿瘤形成的基础。癌基因C-myc是myc基因家族的一员。C-myc蛋白的过表达发生于人类多种肿瘤。PTEN蛋白是一种肿瘤抑制基因，主要是通过促进肿瘤细胞的凋亡而在肿瘤的发生、发展中起重要作用。有关C-myc和PTEN蛋白的表达在宫颈癌发生、发展及相关性的研究尚少见报道。本研究应用免疫组织化学技术，分别检测了C-myc和PTEN蛋白在宫颈癌组织中的表达，并研究二者与临床病理特征之间的关系，为宫颈癌的早期诊治提供有用的理论依据。

1资料与方法

1.1病例资料所有标本均选自本院2009年12月到2011年12月间手术切除或门诊活检标本共130例。宫颈癌标本70例，年龄28-74岁，中位年龄48.4岁，术前均未进行放、化疗及内分泌治疗。按病理学类型分为：宫颈鳞癌60例，腺癌10例。按组织学分级：高中分化48例、低分化22例。依据2009年FIGO临床分期标准：Ⅰ期20例、Ⅱ期40例、Ⅲ期及以上10例。宫颈上皮内瘤样病变（CIN）40例和正常宫颈组织20例作为对照。其中CIN包括：I级15例，II级15例，III级10例。所有标本均由两位以上病理医师确诊。

1.2试剂鼠抗人C-myc单克隆抗体（稀释浓度1：100）；兔抗人PTEN单克隆抗体（稀释浓度1：100）；PV-9000免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒。

1.3方法采用免疫组织化学PV-9000两步法：切片（4μm）脱蜡高压抗原修复自然冷却3%H2O2内10min（灭活内源性过氧化物酶）滴加抗体（C-myc、PTEN）4°C冰箱过夜PBS液冲洗5min3次后，滴加试剂1（聚合物辅助剂），37°C温箱内孵育20min重复PBS液冲洗，滴加试剂2（辣根酶标记羊抗鼠IgG多聚体），37°C温箱内孵育30min重复PBS液冲洗5min3次DAB显色蒸馏水冲洗苏木精复染乙醇脱水二甲苯透明、中性树脂封片。每批均设已知阳性切片作对照，用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

1.4结果判定C-myc蛋白阳性表达产物定位于细胞核，PTEN蛋白阳性表达产物位于细胞浆，均呈棕黄色颗粒。由两位以上病理医师采用双盲法观察每张切片：每张切片随机选取5个高倍视野（×400），共计数1000个细胞。按染色细胞的百分比评分（A）：染色细胞未见为0分，50%为3分；按染色深浅度评分（B）：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。（A）×（B）记为阳性标记指数（labelindex，LI），并通过LI判断表达强度：0分为阴性（-），1-3分为弱阳性（+），4-6分为中等阳性（++），7-9分为强阳性（+++）。

1.5统计学处理采用SPSS17.0统计软件进行数据分析处理，各组间率比较采用x2检验，分析C-myc、PTEN蛋白间关系采用Spearman秩相关分析。P

2结果

2.1C-myc和PTEN蛋白在宫颈癌、CIN及正常宫颈组织中的表达由表1知，C-myc蛋白在宫颈癌、CIN及正常组织中阳性表达率分别为72.9%、42.5%、10%。在宫颈癌中的阳性表达率显著高于CIN和正常组织（P

2.2C-myc和PTEN蛋白表达与宫颈癌临床病理特征的关系C-myc蛋白的表达在组织学分级、病理学类型、淋巴结转移等组间差异均有统计学意义（P0.05）；PTEN蛋白的表达在淋巴结转移及临床分期组间差异均有统计学意义（P0.05）。见表2。

2.3C-myc和PTEN蛋白在宫颈癌中表达的相关性在70例宫颈癌中，C-myc和PTEN蛋白同时表达阳性的例数11例，同时表达阴性的例数5例，应用Spearman相关分析C-myc和PTEN蛋白的表达呈负相关（r=-0.484，P=0.000）。见表3。

3讨论

C-myc基因是myc基因家族成员之一，主要功能是参与肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡[1]。它是一个原癌基因，定位于8q24区，是近年来分子生物学研究的一个热点。C-myc蛋白的过表达参与人类多种肿廇的形成。PTEN基因定位于10q23.3区，参与细胞周期调控、诱导凋亡、细胞的粘附和转移[2]。它的功能是具有PTPs（蛋白质酪氨酸磷酸酶）活性[3]，可通过拮抗PTKs（酪氨酸蛋白激酶）抑制肿瘤细胞的生长，从而起到抑瘤作用。因此，联合研究C-myc和PTEN蛋白可能为肿瘤的预防、早期诊断和治疗起到指导作用。