水通道蛋白1在羊水过多患者胎盘及胎膜组织中的表达及意义

摘 要 目的：研究水通道蛋白1(AQP1)在羊水过多患者胎盘及胎膜组织中的表达，探讨其在羊水过多发病机制中的作用。方法：采用免疫组织化学法检测20例羊水过多患者(羊水过多组)及20例正常孕妇(正常妊娠组)的胎盘及胎膜组织中AQP1的表达。结果：两组胎盘及孕妇腹膜组织中均有AQP1表达且表达部位相同，分别位于胎盘组织中血管及毛细血管的内皮细胞、胎膜组织羊膜上皮细胞上。羊水过多组胎盘中AQP1表达水平明显高于正常妊娠组；羊水过多组胎膜中AQP1表达水平明显低于正常妊娠组，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：与正常妊娠相比，AQP1在羊水过多患者胎盘中的表达增强、在其胎膜中的表达减弱，可能与羊水过多的发病机制有关。

关键词 羊水过多 水通道蛋白1 免疫组织化学

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.07.275

羊水过多是常见的妊娠期并发症，但其分子病理机制并不清楚。水通道蛋白(AQPs)是一族广泛存在于机体组织细胞膜上，选择性高效转运水的特异孔道。AQPs参与母胎间的液体交换，与羊水的形成、成分及羊水量有关［1］。本研究采用免疫组织化学方法对羊水过多患者胎盘及胎膜组织中AQP1表达情况进行检测，以探讨AQP1在羊水过多发病中的作用。

资料与方法

2006年1月～2007年4月在郑州大学第一附属医院、第三附属医院以及郑州市妇幼保健院妇产科分娩的孕妇40例，其中正常妊娠妇女20例为正常妊娠组，平均年龄26±7岁，平均分娩孕周39±4周，平均羊水量(AFV)880±168ml。羊水过多患者20例为羊水过多组，平均年龄27±5岁，平均分娩孕周38±2周，平均AFV 2752±443ml。羊水过多的诊断标准参照高等医学院教材《妇产科学》第6版中的标准［2］。两组孕妇AFV比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，两组孕妇平均年龄和分娩孕周比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。所有产妇均无其他妊娠合并症及并发症。

方法：①标本采集：胎盘娩出后，分别取胎盘组织母面中央(避开钙化、机化灶)大小约1.0cm×1.0cm×1.0cm，胎膜约2.0cm×2.0cm大小，生理盐水漂洗3次后，置10%中尔马林溶液中固定24～48小时，常规石蜡包埋，连续切片，制成4μm厚的切片备用。②AQP1免疫组化检测：常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化、蒸馏水洗5分钟共3次；枸椽酸缓冲液中抗原修复；3%过氧化氢封闭内源性过氧化氢酶活性20分钟，磷酸盐缓冲液(PBS)洗3分钟共3次；10%山羊血清室温作用20分钟，滴加一抗(兔抗人AQP1多克隆抗体，美国Santa Crutz公司，工作浓度1:100)，置于冰箱4℃过夜；复温后，PBS洗3分钟共3次；生物素化羊抗兔二抗(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒S-PKit，Ultra Sensitive产品)室温下作用20分钟，PBS洗3分钟共3次；滴加试剂过氧化物酶标记链酶卵白素，室温作用20分钟，PBS洗3分钟共3次；二氨基联苯胺(DAB)显色3分钟，自来水冲洗，切片用苏木素复染，脱水、透明、封片。免疫组化染色阴性对照采用PBS代替一抗，以已知AQP1阳性表达的正常肾脏组织标本做阳性对照，光学显微镜观察。③结果判定：参照Fromowitz综合计分法进行半定量分析［3］。以细胞膜或细胞浆出现明显的棕黄色颗粒为阳性细胞，无着色或与背景颜色一致的为阴性细胞，随机选择10个高倍视野，每个视野计数100个细胞，按阳性细胞数占总计数细胞的百分比，得出阳性细胞百分率及计分，阳性细胞百分率≤5%为0分，阳性细胞百分率6%～25%为1分，阳性细胞百分率26%～49%为2分，阳性细胞百分率≥50%为3分；根据多数细胞的着色强度计算强度得分，无着色为0分，浅棕褐色为1分，棕褐色为2分，深棕褐色为3分；阳性率和强度相加后的结果：0～1分为(-)，2分为(+)，3～4分为(++)，5～6分为(+++)。将(+)、(++)、(+++)视为阳性。

统计学处理：采用SPSS13.0统计软件进行统计处理。对数据进行X2检验和秩和检验，P＜0.05差异有显著性。

结 果

两组妇女胎盘组织中AQP1表达的比较：两组胎盘组织中均有AQP1表达，主要表达于胎盘组织中血管及毛细血管内皮细胞的胞膜及胞浆中。羊水过多组胎盘组织中的AQP1的表达强度高于正常妊娠组(P＜0.05)。见表1。

两组妇女胎膜组织中AQP1表达的比较：两组胎膜组织中均有AQP1表达，主要表达于羊膜上皮细胞的胞膜及胞浆中。羊水过多组胎膜组织中的AQP1的表达强度高于正常妊娠组(P＜0.05)。见表2。

讨 论

膜内转运途径是指羊水与胎儿血液间的交换，主要指通过胎盘胎膜的交换。AQPs在妊娠期母胎之间的液体交换及羊水平衡中起重要作用。

用免疫组化法对羊水过多患者胎盘及胎膜组织中AQP1进行定位和定量分析，发现其分布与正常妊娠基本一致，主要位于胎盘血管及毛细血管的内皮细胞、胎膜羊膜上皮细胞中。本试验结果与文献报道的一致［4］。但羊水过多组胎盘AQP1表达强度较正常妊娠组显著增强，羊水过多组胎膜AQP1表达强度较正常妊娠组显著减弱，差异有显著性(P均＜0.05)。此结果与Beall等报道的AQP1在胎膜促进膜内水转运，其变化与羊水量呈反相关一致。这些发现暗示AQP1的在胎盘内增多及胎膜内减少可能与羊水过多相关联。需要进一步的研究阐明羊水增多和AQP1在胎盘内表达增多、胎膜内表达减少的机制。进一步深入研究AQP1在羊水过多中的作用，不仅有助于对羊水过多发病机制的认识，而且有可能从蛋白和(或)基因水平找到新的干预靶点，通过使用特异性拮抗剂为羊水过多治疗提供新途径。

参考文献

1 Beall MH,Wang S,Yang B,et al.Placental and membrane aquaporin water channels correlation with amniotic fluid volume and composition［J］.Placenta,2007,28(5-6):421-428.

2 乐杰.妇产科学.北京:人民卫生出版社,2004:99-101.

3 Fromowitz FB,Viola MV,Chao S,et al.Ras P21 expression in the progression of breast cancer［J］.Hum Pathol,1987,18(12):1268-1275.

4 Mann SE,Ricke EA,Yang BA,et al.Expression and localzation of aquaporin 1 and 3 in human fetal membranes［J］.Am J Obstet Gyneco1,2002,187(4):902-907.