铁皮石斛茎、叶多糖含量及多糖部位柱前衍生化—高效液相色谱指纹图谱比较研究

[摘要] 为更好地开发利用铁皮石斛叶资源，该文采用苯酚-硫酸比色法和PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）柱前衍生化-HPLC-DAD-ESI-MSn对铁皮石斛茎、叶中多糖含量、单糖组成、多糖中甘露糖和葡萄糖的含量及多糖部位HPLC指纹图谱进行了比较研究；并用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价软件2004A”建立了对照图谱和进行了相似度评价。结果表明，铁皮石斛茎与叶多糖含量，组成多糖的单糖种类，各单糖组成比例及单糖含量明显不同。叶中多糖含量约为相应茎中多糖含量的1/3。茎多糖主要由甘露糖和葡萄糖组成；叶多糖为酸性杂多糖，由甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，但茎和叶多糖中均以甘露糖组成比例最高。茎中甘露糖和葡萄糖的含量均比相应叶中高。14个不同种植基地铁皮石斛茎和叶多糖部位指纹图谱相似性较好，相似度均在0.9以上。该文为进一步研究铁皮石斛叶多糖中各单糖连接顺序、连接位置和多糖药理活性及申报铁皮石斛叶新资源提供了研究资料。

[关键词] 铁皮石斛；茎；叶；多糖；指纹图谱；甘露糖；葡萄糖

[收稿日期] 2013-09-12

[基金项目] 国家“十二五”科技支撑计划项目（2011BA104B06）；浙江省教育厅科研项目（Y201328964）；浙江省重大科技专项重点项目（2006C13014）

[通信作者] *吕圭源，教授，博士生导师，主要研究方向为中药药理及新产品开发，Tel：（0571）86613601，E-mail：

铁皮石斛为兰科植物铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的干燥茎，自古素有“药中黄金”之美誉。2010年版《中国药典》规定其药用部位为茎，叶属非药用部位；但有部分企业将叶与茎混合投料，生产保健食品。最近几年人们也发现铁皮石斛叶对高血压等症状有较好的辅助疗效，并作为保健茶饮用，说明铁皮石斛叶有很好的开发价值。因此，有必要对铁皮石斛叶进行深入研究，合理利用铁皮石斛叶资源，将更有利于铁皮石斛产业的健康发展。

近些年国内外学者对铁皮石斛化学成分的研究几乎全部集中在茎部[1-5]，对其叶的研究报道较少。课题组前期首次从铁皮石斛叶中鉴定了苷元均为芹菜素的8个黄酮碳糖苷类化合物[6]，并建立了黄酮碳苷类成分指纹图谱[7]；比较了铁皮石斛不同部位各黄酮碳苷的相对含量，叶中相应黄酮碳苷的含量远比茎中高[8]。铁皮石斛叶除含有丰富的黄酮碳苷类化合物，还有多糖等生物大分子化合物。研究表明，多糖类物质不仅能够提高免疫系统功能，而且具有较好的抗癌等生物活性[8-9]。不同植物中提取的多糖其生物活性也有很大差别，其糖链的一级结构与活性密切相关，而一级结构的研究主要体现在组成多糖的单糖种类及各单糖的组成比例。因此，对多糖的单糖组成进行分析具有重要意义。

浙江是全国最大铁皮石斛产销区，人工栽培总产量占全国90%以上。铁皮石斛叶多糖含量和组成铁皮石斛叶多糖的单糖类型和各单糖的组成比例与茎有何差异？基于此问题，本实验在前期研究基础上，对浙江省14个不同种植基地铁皮石斛茎、叶中多糖的含量，组成多糖的单糖类型和多糖部位指纹图谱等进行了比较研究，以期为申报铁皮石斛叶新资源，拓展铁皮石斛药用部位提供实验依据，对深入开发铁皮石斛叶资源具有重要意义。

1 材料

Agilent1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；Agilent6330离子阱质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）（美国Agilent公司）；Lambda 45紫外-可见分光光度计（美国PerkinElmer公司）； AG135电子天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）；LXJ-ⅡB低速大容量多管离心机（上海沪粤明科学仪器有限公司）。

D-甘露糖（批号 140651-200602），D-半乳糖醛酸（批号 111646-200301），D-葡萄糖（批号 110833-200904），D-半乳糖（批号 100226-201105），L-阿拉伯糖（批号 1506-200001），D-盐酸氨基葡萄糖（批号 140649-201103）均购于中国食品药品检定研究院；乙腈和乙酸铵为色谱纯（美国Tedia公司），其余试剂均为分析纯。

铁皮石斛地上部分鲜品由浙江森宇药业、寿仙谷药业、胡庆余堂药业、天目山药业和牧歌实业等14个铁皮石斛种植基地于2012年12月—2013年2月提供，将茎与叶分拣，60 ℃烘干，备用。用S1～S14表示14个种植基地铁皮石斛茎和叶。

2 方法与结果

2.1 多糖的含量测定

2.1.1 供试品溶液制备 分别取铁皮石斛茎、叶粉末（过3号筛）约0.3 g，精密称定，加水200 mL，加热回流2 h，放冷，转移至250 mL量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过。精密吸取续滤液（茎2 mL，叶5 mL），置离心管中，精密加入无水乙醇（茎10 mL，叶25 mL），涡旋混匀，冷藏1 h，取出，离心（转速为4 000 r·min-1）20 min，弃去上清液，沉淀加80%乙醇洗涤2次，每次8 mL，离心，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至10 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，备用。

2.1.2 对照品溶液制备 精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖对照品9.10 mg，置100 mL量瓶中，用蒸馏水溶解并定容，配制成91 mg·L-1的葡萄糖对照品溶液，备用。

2.1.3 测定波长的选择 精密吸取葡萄糖对照品溶液和铁皮石斛叶样品溶液各1.0 mL，分别置于25 mL具塞试管中，精密加入5%苯酚溶液1 mL，摇匀，再精密加入浓硫酸5 mL，涡旋混匀，置沸水浴中加热20 min，取出，置冰水浴中冷却5 min，另取蒸馏水同上操作制得空白溶液。紫外-可见分光光度计于400～600 nm进行波长扫描。对照品溶液和叶供试品溶液在488 nm处有最大吸收。2010年版《中国药典》铁皮石斛茎中多糖含量测定的波长也是488 nm，因此，选488 nm为测定波长。

2.1.4 标准曲线制备 精密吸取质量浓度为91 mg·L-1的葡萄糖对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，分别置于25 mL具塞试管中，各加水补至1.0 mL，精密加入5%苯酚溶液1 mL，摇匀，再精密加入浓硫酸5 mL，摇匀，置沸水浴中加热20 min，取出，置冰水浴中冷却5 min，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在488 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=0.064 9X+0.009 7（r=0.999 7），结果表明葡萄糖在1.3～13.0 mg·L-1与吸光度呈良好线性关系。

2.1.5 样品测定 精密吸取2.1.1项下的多糖供试品溶液1 mL，置25 mL具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加入5%苯酚溶液1 mL”起，依法测定吸光度，通过回归方程计算供试品溶液中多糖含量。14个不同种植基地铁皮石斛茎、叶中多糖的含量测定结果见表1。

表1 14个不同种植基地铁皮石斛茎、叶中多糖的质量分数（n=3）

Table 1 Contents of polysaccharide in Dendrobium officinale stems and leaves （n=3）%

由表1可知，不同种植基地铁皮石斛茎、叶中多糖含量差异较大，14批铁皮石斛茎，其多糖的质量分数均在25%以上，符合2010年版《中国药典》一部铁皮石斛中多糖含量限度（不得少于25%），其中S7质量分数最高（50.89%），为含量最低（S3）的2倍。同一种植基地铁皮石斛茎中多糖含量均比叶中高，14批铁皮石斛茎中多糖的平均质量分数（34.2%）约是叶中多糖（11.8%）的3倍。14批铁皮石斛虽然均来源于浙江省，但由于铁皮石斛品种差异、栽培环境差异（如接受光照时间等）和水肥管理等不同，可能是造成不同种植基地铁皮石斛茎、叶多糖含量差异的主要原因。

2.2 铁皮石斛茎、叶多糖部位指纹图谱的建立和单糖组成分析

2.2.1 对照品溶液制备 取盐酸氨基葡萄糖适量，精密称定，加水制成每1 mL含12 mg的溶液，作为内标溶液；另取甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖对照品各约5 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，精密加入内标溶液0.5 mL，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。

2.2.2 供试品溶液制备 多糖的提取：分别取铁皮石斛茎、叶粉末（过3号筛）约0.12 g，精密称定，置索氏提取器中，加80%乙醇适量，加热回流提取4 h，弃去乙醇液，药渣挥干乙醇，滤纸筒拆开置于烧杯中，加水（茎100 mL，叶50 mL），再精密加入内标溶液（茎2 mL，叶1 mL），煎煮1 h，并时时搅拌补充水分，放冷，转移至量瓶中（茎100 mL，叶50 mL），用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，离心，备用。

多糖酸水解：精密吸取上述多糖溶液1 mL，置顶空瓶中，加3.0 mol·L-1的盐酸溶液0.5 mL，封口，混匀，110 ℃水解1 h，放冷，用3.0 mol·L-1的氢氧化钠溶液调节pH至中性，备用。

单糖衍生化产物制备：吸取单糖混合对照品溶液和供试品溶液各400 μL，加0.5 mol·L-1的PMP甲醇溶液与0.3 mol·L-1的氢氧化钠溶液各400 μL，混匀，70 ℃水浴反应100 min；再加0.3 mol·L-1的盐酸溶液500 μL，混匀，用三氯甲烷洗涤3次，每次2 mL，弃去三氯甲烷液，水层离心后（12 000 r·min-1），取上清液（茎5 μL，叶10 μL）注入高效液相色谱仪，测定。

2.2.3 色谱条件 Welch Materials XB C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温 30 ℃；流动相 0.02 mol·L-1醋酸铵（A）-乙腈（B），梯度洗脱（0～20 min，B 17%；20～40 min，B 17%～37%）；流速 1.0 mL·min-1；检测波长 250 nm。在此条件下，样品中5个单糖衍生物均达到基线分离，理论塔板数按葡萄糖衍生物峰计算应不低于10 000。

2.2.4 质谱条件 离子源：ESI，二级质谱使用负离子模式；全扫描质核比（m/z） 50～600；干燥气温度 350 ℃；干燥气流量 12.0 L·min-1；雾化气压力 241.32 kPa；毛细管电压 4.5 kV；进入质谱的流动相按1∶2分流，即流速 0.33 mL·min-1。

2.2.5 方法学考察 精密度试验：取经提取、水解和衍生化处理后的S2样品（叶），在2.2.3项下的色谱条件，连续进样6次，以3号峰（葡萄糖）的保留时间和峰面积为参照，测得各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取经提取、水解和衍生化处理后的S2样品（叶），在2.2.3项下的色谱条件，分别于0，2，4，8，12，20，24 h进样，记录色谱图，以3号峰（葡萄糖）的保留时间和峰面积为参照，测得各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2%，表明供试品溶液24 h内稳定性良好。

重复性试验：分别准确称取S2铁皮石斛叶样品6份，按2.2.2项下提取、水解和衍生化处理，在2.2.3项下的色谱条件测定，以3号峰（葡萄糖）的保留时间和峰面积为参照，测得各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%，表明该方法重复性良好，符合指纹图谱技术要求。

2.2.6 铁皮石斛茎、叶多糖部位指纹图谱比较 各取14批铁皮石斛茎、叶样品按2.2.2项下分别制备供试品溶液，按2.2.3色谱条件进行检测。分别将14批茎、叶HPLC图谱信号数据导入国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价软件（2004A版）》进行处理，以S4为参照图谱，时间窗宽度为0.2，比较各样品的色谱图。结果表明，组成茎与叶多糖的单糖数目不同，茎有2个单糖衍生物色谱峰，而叶有5个，进行多点校正，平均数法分别生成铁皮石斛叶、茎多糖类成分“对照图谱”；14批茎、叶匹配后的谱图和对照图谱分别见图1，2。并分别测得14批茎、叶与对照图谱间的相似度，茎（S1～S14）：0.998，0.999，0.965，0.997，0.999，0.988，0.998，0.987，0.983，0.989，0.976，0.974，0.999，0.962；叶（S1～S14）：0.994，0.999，0.996，0.997，0.999，0.995，0.999，0.999，0.997，0.992，0.942，0.997，1，0.999。14批铁皮石斛茎、叶多糖类成分指纹图谱相似度均较高，均在0.9以上。因此建议规定供试品指纹图谱与对照图谱的相似度不得低于0.9，将相似度0.9作为判定铁皮石斛茎、叶真伪的限度。将对照图谱和待测样品色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统检验版（2004B）”，即可计算出待测样品与对照图谱的相似度。

1.甘露糖；2.半乳糖醛酸；3.葡萄糖；4.半乳糖；5.阿拉伯糖；PMP-1.苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮。

图1 5种单糖对照品（A），铁皮石斛叶对照图谱（B）和14批样品（C）各单糖PMP衍生化产物HPLC图

Fig.1 HPLC chromatograms of PMP derivatization of 5 monosaccharide reference substances （A）， standard fingerprint of Dendrobium officinal leaves （B） and 14 batches of samples （C）

2.2.7 基于HPLC-ESI-MSn和与对照品对照鉴定铁皮石斛茎、叶多糖的单糖类型 铁皮石斛叶总离子流图正离子模式比负离子模式响应高，但正离子模式下的多级质谱，主要是糖上羟基以H2O依次脱去，对结构解析意义不大； 而负离子模式下的多级质谱，糖环有规律地脱去90或120质量单位的碎片峰，故选择负离子模式。比较混合对照品与铁皮石斛茎、叶多糖衍生物的色谱保留时间和（-）ESI-MS2数据，叶中5个单糖和茎中2个单糖均被鉴定，具体数据见表2，质谱总离子流色谱图见图3，各单。

1.甘露糖；2.葡萄糖。

图2 铁皮石斛茎对照图谱（B）和14批样品（C）各单糖PMP衍生化产物HPLC图

Fig.2 HPLC chromatograms of PMP derivatization of standard fingerprint of Dendrobium officinal stems （B） and 14 batches of samples （C）

糖衍生物在负离子模式下的碎片离子图见图4～8茎中1～2号色谱峰依次为甘露糖和葡萄糖；叶中1～5号色谱峰依次为甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖；1号峰和2号峰之间的色谱峰，是为进一步计算各单糖的含量加入的内标物质（D-盐酸氨基葡萄糖）。从图1，2可知，浙江省14个不同种植基地铁皮石斛叶多糖的单糖组成相同，为酸性杂多糖，主要分成3类，第1类六碳醛糖（葡萄糖，甘露糖和半乳糖），第二类五碳醛糖（阿拉伯糖），第3类六碳糖醛酸（半乳糖醛酸）组成；铁皮石斛茎多糖主要由甘露糖和葡萄糖组成。5种单糖混合对照品PMP衍生物HPLC图谱见图1。并以葡萄糖为参照物，分别计算14批铁皮石斛茎、叶多糖指纹图谱中各单糖的相对峰面积，结果见表3。

从图1，2可看出，铁皮石斛叶多糖与茎多糖的单糖组成明显不同，并且各单糖间的组成比例（表3）也不同，铁皮石斛茎多糖的生物活性研究较为深入，叶多糖的药理活性如何，有待课题组后期继续研究。叶中三类单糖衍生物分子量不同，很容易根据分子离子峰[M-H]-/[M+H]+进行区别，表2中[M-H]-/[M+H]+为各单糖与衍生化试剂PMP（相对分子质量174）按照1∶2进行反应的产物。三类单糖衍生物一级质谱中，基峰均为分子离子丢失一质谱中，均为糖环特征性碎裂离子峰，六碳醛糖为脱去120的质量碎片峰，五碳醛糖脱去90的

表2 铁皮石斛叶中5种单糖衍生物HPLC-（-）ESI-MS2数据

Table 2 HPLC-ESI/MS2 data of 5 monosaccharides in Dendrobium officinale leaves

1.甘露糖；2.半乳糖醛酸；3.葡萄糖；4.半乳糖；5.阿拉伯糖。

图3 铁皮石斛叶样品总离子流图谱

Fig.3 Total ion chromatogram （TIC） of Dendrobium officinale leaves

图4 甘露糖MS，MS2图谱

Fig.4 MS， MS2 of mannose

图5 葡萄糖MS，MS2图谱

Fig.5 MS，MS2 of glucose

图6 半乳糖MS，MS2图谱

Fig.6 MS， MS2 of galactose

图7 半乳糖醛酸MS，MS2图谱

Fig.7 MS，MS2of galacturonic

图8 阿拉伯糖MS，MS2图谱

Fig.8 MS，MS2 of arabinose

质量碎片峰，而六碳糖醛酸分子量比六碳醛糖大14，故脱去134的质量碎片峰，最终均生成糖环的特征性碎裂离子峰m/z 215。从图1，3可看出，5号色谱峰（阿拉伯糖）之后还有2个色谱峰，这2个色谱峰的ESI-MS2没有出现糖环特征性碎裂离子峰m/z 215，所以判断这2个色谱峰可能不是组成铁皮石斛茎、叶多糖的单糖衍生物。

表3 14批铁皮石斛茎、叶多糖指纹图谱中各单糖色谱峰峰面积相对葡萄糖峰面积比值

Table 3 Relative peak areas to glucose in the polysaccharide fingerprint of Dendrobium officinale stems and leaves

14批铁皮石斛茎多糖均由甘露糖和葡萄糖组成，2010年版《中国药典》一部铁皮石斛项下，规定甘露糖与葡萄糖峰面积比为2.4～8.0，从表3可知，样品S3，S10，S12，S14其比值均在2.4以下，组成多糖的单糖种类相同，但组成比例未在规定范围内，并且不同种植基地铁皮石斛茎多糖中甘露糖与葡萄糖相对峰面积的RSD较大。

从图1和表3可看出，不同种植基地铁皮石斛叶多糖中各单糖的类型相同，但不同种植基地铁皮石斛叶多糖中各单糖的相对峰面积的RSD均较大，说明化学成分的相对含量有明显差异。组成铁皮石斛叶多糖的各单糖中甘露糖的相对比例最大，甘露糖峰面积与葡萄糖的峰面积比值为2.2～23.5，波动范围较大。

2.2.8 不同种植基地铁皮石斛茎、叶多糖中甘露糖和葡萄糖含量比较 组成铁皮石斛茎、叶多糖的单糖中均有甘露糖和葡萄糖，为了进一步比较茎和叶多糖中甘露糖和葡萄糖的含量差异，笔者以D-盐酸氨基葡萄糖为内标，利用校正因子法计算组成多糖的甘露糖和葡萄糖的含量，结果见表4。

表4 14批不同种植基地铁皮石斛茎、叶多糖中甘露糖和葡萄糖的含量（n=3）

Table 4 Contents of mannose and glucose in Dendrobium officinale stems and leaves （n=3）%

由表4可见，14个不同种植基地铁皮石斛茎中甘露糖和葡萄糖的含量均比相应叶高。14批茎中甘露糖的平均质量分数（30.1%）比叶中甘露糖平均质量分数（11.7%）高近2倍；茎中葡萄糖的平均质量分数（11.8%）是叶中葡萄糖平均质量分数（1.4%）的8倍。2010年版《中国药典》铁皮石斛项下，规定茎中甘露糖的量为13.0%～38.0%，从表4可看出，样品S3茎中甘露糖较低，在13%以下（其多糖含量也比其他样品低，见表1）；S4，S7甘露糖质量分数在38%以上（其多糖含量也比其他样品高，见表1），不符合《中国药典》标准。不同种植基地铁皮石斛叶中甘露糖和葡萄糖含量差异较大，其中甘露糖含量最高的S6是含量最低S11的2倍。S11相似度最低，可能与甘露糖的含量低有一定相关性。

3 讨论

为了与铁皮石斛传统用药部位茎中多糖的含量进行平行比较，本研究中铁皮石斛茎、叶多糖的制备方法和含量测定方法均参照2010年版《中国药典》铁皮石斛项下，并在此基础上加以改进。本文研究结果表明，茎中多糖含量是叶中多糖含量的3倍。课题组前期还对铁皮石斛茎和叶中的另一大类成分（黄酮碳苷类）的含量进行了比较研究，结果表明，叶中黄酮碳苷的含量比传统用药部位茎高近10倍。由于植物在生长发育过程中各器官所起的作用不同，其生理代谢量也不同，从而使各器官部位中各化学成分的代谢生成和积累存在着明显的差异。从本文研究结果来看，黄酮碳苷类成分更趋于光合作用强的叶，而多糖类成分更趋向分布在茎中。

本文研究结果表明，铁皮石斛茎与叶多糖的单糖组成不同，铁皮石斛叶多糖是一种酸性杂多糖，主要由3种六碳醛糖（葡萄糖，甘露糖和半乳糖），1种六碳糖醛酸（半乳糖醛酸）和1个五碳醛糖（阿拉伯糖）组成，而铁皮石斛茎多糖主要由葡萄糖和甘露糖组成。叶与茎多糖中均有甘露糖和葡萄糖，茎中甘露糖和葡萄糖含量均比叶中高。叶中甘露糖与葡萄糖的峰面积比值介于2.2～23.5，2010年版《中国药典》铁皮石斛项下，规定茎中甘露糖与葡萄糖峰面积之比应为2.4～8.0。一般来说，多糖所具有的生物活性往往与其单糖组成类型和单糖的组成比例密切相关，茎、叶多糖部位生物活性是否也具有差异性有待课题组进一步研究。本文确定了铁皮石斛叶多糖的单糖组成和各单糖的组成比例，为铁皮石斛叶多糖的进一步结构分析和研究铁皮石斛叶的药用价值提供了参考。茎和叶多糖部位指纹图谱的相似度均在0.9以上，相似性较好。为了考察所建立的茎和叶多糖部位对照图谱对石斛属不同种石斛茎和叶的分辨能力，实验中还对多个石斛属不同种石斛的茎和叶按照同样的供试品制备方法和检测方法进行检测，结果相似度均在0.9以下，说明所建立的铁皮石斛茎、叶多糖部位的指纹图谱能较好的区分铁皮石斛和石斛属不同种石斛。

本文仅对浙江省铁皮石斛茎、叶多糖含量和多糖部位指纹图谱及单糖组成等进行比较研究，后续将继续收集云南、广东、广西和湖南等不同省份铁皮石斛样品进行比较研究，扩大研究结果的应用范围。仅以某类成分为指标很难全面反映药材质量，而以不同类型成分的多指标含量变化来反映药材质量更为科学，故笔者将进一步把铁皮石斛茎、叶多糖部位指纹图谱和黄酮碳苷部位指纹图谱进行综合统计分析，体现中药的整体性，为确定铁皮石斛叶能否与茎混合投料提供更完善的依据。

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Comparison on polysaccharide content and PMP-HPLC fingerprints of

polysaccharide in stems and leaves of Dendrobium officinale

ZHOU Gui-fen， PANG Min-xia， CHEN Su-hong， LV Gui-yuan， YAN Mei-qiu

（1.Zhejiang Chinese Medical University， Hangzhou 310053， China；

2.Wenzhou Medical University， Wenzhou 325035， China ）

[Abstract] In order to provide scientific basics for exploitation and sufficient application of Dendrobium officinale leaves resources，the phenol-sulfuric acid method was applied to determine the polysaccharide content. The monosaccharides were derivated by PMP and the derivatives were identified by HPLC-DAD-ESI-MSn and the contents of mannose and glucose were determined simultaneously. Similarity evaluation system for chromatographic fingerprint of traditional Chinese medicine （2004A） was employed to generate the mean chromatogram and similarity analysis of the samples was carried out. The results demonstrated that polysaccharide content， monosaccharide compositions and composition ratio had an obvious difference between stems and leaves. The polysaccharide content of stems was higher than that of leaves. Monosaccharide composition in leaf was significantly different from that in stem. The polysaccharide from stems was composed of mannose and glucose， however the polysaccharide of leaves was acid heteropolysaccharide and was mainly composed of five monosaccharides， including mannose， galacturonic acid， glucose， galactose and arabinose. The similarity value of the 14 batches was above 0.9， indicating that similarity of fingerprints among different samples was high. The study can provide evidence for expanding the medicinal parts of D. officinale.

[Key words] Dendrobium officinale； stem； leaf； polysaccharide； fingerprints； mannose； glucose

doi：10.4268/cjcmm20140508