秀丽隐杆线虫在药物筛选中的应用

摘 要 秀丽隐杆线虫在药物和靶蛋白筛选方面越来越受到药物学家的重视，已形成了较为完善的药物筛选技术平台。本文以新药的发现为目标，介绍线虫作为新药筛选模型的特点、研究现状及该模型在新药发现中的应用。

关键词秀丽隐杆线虫 模型 药物筛选 药靶筛选

Applications of Caenorhabditis elegans in drug screening

ZHOU Yu-meng，CHEN Dai-jie*

（Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry of China State Institute of Pharmaceutical Industry，

State Key Lab for New Drug and Pharmaceutical Process，Shanghai，200040）

ABSTRACTCaenorhabditis elegans (C. elegans) has attracted an increasing attention of pharmaceutical scientists working on drug screening. A relatively complete technology platform for drug screening has been formed by this model. The characteristics of C. elegans as new drug screening model，disease models established by C. elegans currently and their application in discovery of new drug are described in this review.

KEY WORDSCaenorhabditis elegans; model; drug screening; target of drug screening

生物学界对秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans，C. elegans）的研究始于20世纪60年代。英国科学家Brenner [1]选择了线虫作为确定完整神经系统的较为简单的生物模型。随后，Sulston经过20年的努力，到20世纪90年代中期构建了完整的线虫细胞谱系图，使线虫成为唯一一个身体中所有细胞能被逐个盘点并归类的生物。Horvitz利用遗传突变和基因克隆等手段，揭示了线虫细胞程序性死亡的遗传调控机制，并证明相应的调节基因在高等动物和人体中也存在。这三位科学家的研究对生命科学领域做出了极为重要的贡献，于2002年分享了诺贝尔生理或医学奖[2]，使秀丽隐杆线虫成为当代生命科学和医学研究中最重要的模式生物之一。

近年来，秀丽隐杆线虫在药物或靶蛋白筛选方面越来越受到药物学家的青睐，已形成了较为完善的药物筛选技术平台。本文从药物研发的角度讨论线虫作为模式生物的特点，以及目前利用秀丽隐杆线虫建立的疾病模型在新药发现中的应用。

1秀丽隐杆线虫整体生物模型的特点

秀丽隐杆线虫属于线形动物门线虫纲动物，结构如图1[3]所示。利用秀丽隐杆线虫整体生物能够建立和模拟与人类疾病相关的模型、筛选不同的新型活性物质并发现新颖生物功能的靶点或靶标，实现这些目标的基础主要在于以下两个方面。

1.1线虫整体生物模型的优点[4]

1）虫体小（成虫1 mm），容易操作（线虫可以饲养在含有大肠埃希菌的琼脂平板或是液体培养基中）并且便于长期保藏（虫体可以冻存在甘油中）。2）发育的各个阶段虫体呈透明状，可以通过微分干涉对比（differential interference contrast，DIC）显微镜和各种荧光显微镜对所有细胞进行观察。3）世代和生命周期较短。在实验室20 ℃的环境下，从卵发育到成虫只要4 d，平均寿命为3周。4）繁殖快并且多产。一只雌雄同体线虫可以产下300多个后代，经雄虫后可以产下1 000多个后代。5）一个雌雄同体的成虫完整固定不变的体细胞有959个，雄虫有1 031个。6）发育专门的生理器官，神经环和神经节、肠道、肌肉、皮下组织、排泄系统、先天免疫系统、性腺和子宫。7）完整的神经网络图，302和391个神经元组成雌雄同体成虫和雄虫的神经系统。8）具有复杂的行为学特征，包括机械感知和化学感知，避免有害刺激物和温度趋向性。9）拥有完善的实验技术，包括转基因动物技术、单细胞激光光解技术、通过化学诱变和RNA干扰进行正向和反向的遗传基因筛选、通过个体大小和荧光采用流式细胞仪对线虫进行数量控制、表型特征对应的单细胞多态性图谱（SNP mapping）和小分子化合物库的筛选。10）一个完整的基因组序列，含有约19 700编码序列和约1 300非编码RNAs。11）完整的基因组文库和cDNA克隆。12）一个线虫突变保藏中心，拥有大量突变体线虫。13）丰富的免费网络资源（如WormBook）和数据库（如WormBase）。

1.2线虫与人类基因之间的保守性

以秀丽隐杆线虫为模型来模拟人类疾病是最简单直接的，但是两者之间的药物靶点要具有保守性。庆幸的是，这种保守性的确存在。依靠生物信息学方法，发现已知的秀丽隐杆线虫药靶基因与人类基因的同源性达到60%～80%[5]。在许多重要的信号传导途径中，线虫都存在高度保守性，如与细胞增殖分化相关的途径包括RAS信号途径、Notch信号途径和Wnt信号途径[6～8]；与免疫相关的途径包括TGF-β信号途径、胰岛素信号途径、p38 MAPK信号途径和Toll信号途径[9～12]等。在孟德尔人类遗传资料库（Online Mendelian Inheritance in Man）的2 466个人类疾病基因中，有533个与秀丽隐杆线虫同源[13]。

鉴于线虫具有丰富的生物学、遗传学信息的研究以及作为模式生物的优越性，使其在人类疾病研究和新药开发中发挥着重要的作用。

2基于秀丽隐杆线虫的疾病模型及在新药发现中的应用

目前，已建立了大量的秀丽隐杆线虫模型和有效的研究方法来模拟人类疾病，并实施大规模高通量化合物的筛选。

2.1代谢综合征疾病的线虫模型

2.1.1糖尿病模型

胰岛素超家族基因普遍存在于脊椎和非脊椎动物中。在秀丽隐杆线虫中存在胰岛素样信号途径（insulin-like signaling pathway），负责控制代谢、生长和寿命，其中daf-2基因编码属与哺乳动物同源的胰岛素样生长因子（insulin-like growth factors，IGFs）受体家族[14]。秀丽隐杆线虫daf-2基因突变株发育受限，只能停留在dauer幼虫期，但当胰岛素样信号途径被刺激后，可以二次生长，发育成成虫，故能使daf-2基因突变株转变成成虫的化合物可能对人类胰岛素信号传递存在调节作用。因此，DevGen公司利用daf-2基因突变株建立了抗2型糖尿病的药物筛选模型，并于2001年申请了专利[15]。随后，该公司又构建了能产生定量荧光信号的daf-2基因工程虫体，建立了高通量筛选方法。

2.1.2脂肪代谢模型

研究人员利用线虫寻找影响脂肪代谢的相关基因，为治疗肥胖和相关疾病提供研究靶点。Lemieux等[16]对3 200个化合物进行筛选，用尼罗红（Nile Red）染色来监测处理2 d后的线虫脂肪水平，发现有2种化合物可以诱导脂肪增加、8种化合物可以降低脂肪含量。实验人员针对F17化合物进行研究，发现该化合物是AMP-活化蛋白激酶（AMP-activated kinase，AMPK）拮抗剂，能有效降低线虫脂肪储存（见图2[17]）。

用野生型线虫对3 200个化合物进行筛选，2 d后尼罗红染色并检测脂肪水平。大部分化合物是无效的，线虫脂肪水平与对照相似（中间的线虫）。2个化合物可以增加线虫脂肪含量（顶部的线虫），8个化合物可以降低脂肪含量（底部的线虫）。其中一个化合物F17影响脂肪含量降低是依赖于AMPK（aa-1）和转录因子K08F8.2。

Chronogen公司采用另外一种线虫脂肪代谢模型[18]，利用clk-1缺陷型线虫排便循环的长短直接受胆固醇量调节的特点，筛选了20 000个小分子化合物，得到190个阳性化合物（hits），再用人肝癌细胞HepG2验证，其中15个化合物能减少细胞ApoB100的分泌，而化合物CHGN005效果最好。在随后的小鼠活体高血脂模型中，CHGN005可以明显降低胆固醇和甘油三酯的含量，进一步验证了此化合物的活性。

2.1.3衰老模型

利用秀丽隐杆线虫研究衰老现象和老化相关的疾病已经有近30年的历史。秀丽隐杆线虫生命周期较短，使其成为衰老研究和抗衰老药物筛选的理想模型。目前，主要采用野生型N2和突变体线虫（如daf-16、daf-9等）作为实验动物。

Evason 等[19]以具有不同结构、不同药效的19个经FDA 批准的药物组成小样本库筛选发现，抗癫痫药物乙琥胺（ethosuximide）能使秀丽隐杆线虫的寿命延长17%，并存在明显的量效关系。构效关系研究表明，与乙琥胺结构类似并具有抗癫痫作用的化合物三甲双酮（trimethadione）和3，3-二乙基-2-吡咯烷酮（3，3-diethyl-2-pyrrolidinone）也能明显延长秀丽隐杆线虫的寿命，而与乙琥胺结构类似、但无抗癫痫作用的化合物丁二酰亚胺（succinimide）却没有延长秀丽隐杆线虫寿命的作用。作者推测，可能是上述化合物的抗癫痫机制与延长秀丽隐杆线虫寿命的机制相同、通过影响线虫的神经活动而导致生命延长。

Petrascheck 等[20]用秀丽隐杆线虫筛选抗衰老药物，筛选了 8.8 万个化合物，发现 115 个化合物能延长秀丽隐杆线虫的寿命，有4个化合物是5-羟色胺受体抑制剂，它们能使秀丽隐杆线虫的寿命延长22%～30%，其中包括抗抑郁药米安色林（mianserin），但米安色林不能延长对5- 羟色胺的合成、摄取发生变异的线虫寿命。研究人员认为，米安色林能阻断线虫与觅食有关的神经递质的信号传递，产生饥饿感，导致线虫寿命延长。

Gerisch等[21]发现一种胆酸化合物dafachronic acid与秀丽隐杆线虫的衰老调控有关。白藜芦醇（resveratrol）能延长酵母、果蝇、小鼠的寿命，也能延长秀丽隐杆线虫的寿命[22]。具有抗氧自由基损伤的化合物如维生素E、辅酶Q等以及蓝莓、银杏叶提取物也能延长秀丽隐杆线虫的寿命[23]。

延长人类寿命一直广受关注，但是有关人类生命周期的探索才刚刚起步，基因调控、系统调控、环境和精神因素等都在不同水平上影响人类寿命。能延长线虫寿命的化合物（见图3）在结构上差异较大，说明小分子对衰老的干预具有多靶点、多机制的特征。值得注意的是，干预神经活动的小分子能延长秀丽隐杆线虫寿命，说明神经活动可能与衰老现象有关，但是这些分子能否成为抗衰老药物还需要一个漫长的评价过程。而白藜芦醇是通过Sir2蛋白进行调控，与神经干预机制无关，这种分子似乎更具有抗衰老研究的价值。

2.2神经系统退化性疾病的线虫模型

2.2.1阿尔茨海默病模型

研究者在线虫中发现早老素（presenilin）sel-12基因，其编码的蛋白具有多跨膜结构域，并且与阿尔茨海默病（AD）相关蛋白S812相似。目前已构建了转基因线虫模型，将人源β-淀粉样蛋白在线虫中异源表达，诱导淀粉样蛋白沉淀物形成，引起线虫麻痹，从而导致线虫“排卵”困难[24]。Pharmacia & Upjohn公司开发了一个“几丁质酶检测”方法，可以间接地监测排卵数量，其原理是：秀丽隐杆线虫的胚胎会分泌几丁质酶，以便从卵中孵化出来。几丁质酶浓度越高，线虫排卵数量越多。辉瑞公司正利用转基因线虫AD模型和几丁质酶检测技术对10 000多个化合物进行高通量筛选，期望获得有效的抑制剂[25]。

2.2.2帕金森病模型

利用线虫建立帕金森病模型主要有两种：转基因线虫模型和药物诱导模型。转基因模型是通过过量表达人源α-突触白、导致线虫的神经元和树突损伤模拟帕金森病的[26]，而药物诱导模型是利用神经毒素1-甲基-4-苯基吡啶 （1-methyl-4-phenylpyridine，MPP）选择性诱导多巴胺神经元凋亡，使线虫运动能力下降、死亡数增加。Braungar等[27] 对一些帕金森病治疗药物进行评估，其中多巴胺受体拮抗剂麦角乙脲（lisuride）和阿朴吗啡（apomorphine）以及蛋白激酶C抑制剂卡马拉素在低剂量和高剂量时都对线虫有治疗效果。

2.2.3亨廷顿病模型

已知亨廷顿病的病因是由于亨廷顿（Huntingtin）蛋白末端的多聚谷氨酰胺（polyQ）延伸造成的。线虫模型就是采用转基因技术，将人源亨廷顿蛋白的N末端基因序列注射到线虫体内，转基因动物神经细胞凋亡，出现神经细胞蛋白沉积并随年龄逐步增加的症状[28]。利用此模型，Voisine等[29]评估了9个可能有治疗效果的药物，其中4个能缓解polyQ的毒性，以FDA批准的亨廷顿病治疗药物光辉霉素（mithramycin）和氯化锂表现尤为突出。

2.3抑郁的线虫模型

抑郁线虫模型研究就是利用化学遗传学方法将抗抑郁药物氟西汀作用于线虫，观察药物对线虫表型的影响。氟西汀会阻断5-羟色胺再摄取转运载体（serotonin reuptake transporter，SERT）MOD-5，增加突触间5-羟色胺的浓度。由于5-羟色胺信号增强，从而刺激控制线虫排卵的肌肉神经，增加线虫排卵量[30]。在哺乳动物中，SERT是MOD-5的同系物，也是氟西汀作用的主要靶标，说明利用线虫模型可以发现治疗抑郁的有效药物。

2.4肌肉萎缩症模型

模拟人类遗传疾病的线虫模型包括多囊性肾病、肌肉萎缩症等。研究人员发现线虫的dys-1基因与导致人肌肉萎缩症（DMD）的肌萎缩蛋白基因同源，采用基因敲除技术构建突变体线虫dys-1，此突变体表现出类似人类DMD的肌肉组织逐渐退化、运动能力丧失的病症。当实施强的松治疗后，这种症状可以得到缓解[31]。

2.5高通量筛选和靶点研究的方法

线虫既提供了完整动物实验系统，又避免了小鼠模型的高价费时，是最适合大规模药物筛选的多细胞动物。目前，秀丽隐杆线虫越来越受到生物化学家的青睐，利用线虫高通量筛选活性化合物、研究药物作用靶点正在成为流行趋势[32～36]。Roy等[37]建立了一个24孔板高通量筛选系统，使用秀丽隐杆线虫模型发现具有生物活性的小分子化合物，并用化学遗传学方法鉴定化合物作用靶点。整套系统由两个主要的设备组成：COPAS（Complex Object Parametric Analyzer and Sorter）Biosort和自动图像获取处理系统（见图4[37]）。每周可以筛选化合物达到2 400个。通过观察表型的变化（见图5[37]），推测筛选化合物的生物学活性。为了进一步确证其作用靶蛋白，利用甲磺酸乙酯使线虫突变，筛选对此化合物具有抗性的突变体线虫（见图6[37]），确定突变蛋白，最终确证作用靶标。对于靶点的鉴定大约需要几个月的时间。

采用这套系统，Roy等研究人员对14 100个小分子化合物进行筛选，有308个化合物可诱导野生型线虫产生表型异常，最终发现一个小分子钙离子通道拮抗剂nemadipine-A。其与二氢吡啶类抗高血压药（DHPs）类似，能够引起线虫形态缺陷和排卵、产卵困难，通过遗传学方法确定L型钙离子通道的α1亚基是nemadipine-A的作用靶点，与已知的DHPs作用机制完全一致[38]。

线虫是一种简单的模式宿主，可以被多种人类病原菌感染和杀死，其中包括革兰阳性菌粪肠球菌、金黄色葡萄球菌，革兰阴性菌铜绿假单胞菌、沙门菌以及一些真菌白色假丝酵母等。Moy等首次利用秀丽隐杆线虫这一特性，建立了粪肠球菌感染模型，对6 000个化合物和1 136个天然提取物进行筛选，其中16个化合物和9个天然提取物具有提高线虫存活率的活性[39]。随后，他们对方法进行改进，建立了384孔板自动化分析采集的高通量筛选系统[35]。这套系统采用SYTOX 黄染料将存活线虫和死亡线虫进行区分并用荧光检测，通过对比荧光强弱判断线虫存活率，较之前的人工操作系统工作效率提高5倍以上。将筛选规模扩大到37 200个化合物和天然提取物，发现了28个未经报道的具有提高线虫存活率的活性化合物，其中有6个结构新颖的化合物体外不影响病原菌生长，说明它们与临床上所用的抗生素具有明显不同的作用机制。目前还建立了白色假丝酵母-线虫感染高通量筛选模型[32，34]，对3 228个化合物筛选，发现了19个化合物具有抗真菌感染活性，其中7个是临床上用于抗真菌感染的药物、12个临床上没有用作抗感染药物，还有另外3个药物是免疫抑制剂。这些事实说明线虫感染模型不但可以发现抗感染化合物，还可以寻找到一些作用机制新颖、具有其它生物学活性、辅助抗感染作用的化合物。

3结语

在许多生物途径中，秀丽隐杆线虫与人类之间都具有保守性。因此，从某种程度上讲，秀丽隐杆线虫的研究数据可以预测药物-靶标相互作用和确证靶点。通过对秀丽隐杆线虫的研究可以更好地了解许多人类疾病的病理机制。尽管存在很多优点，但是不可否认，秀丽隐杆线虫体系在新药发现中仍存在缺陷。例如，线虫没有心脏、获得性免疫系统、呼吸系统等，一些分子途径在线虫体系中不存在，这些途径就不能通过线虫进行研究。此外，秀丽隐杆线虫与人类种间距离太远，不能完全模拟或无法模拟人类病理。因此，周密的实验方案设计、模型潜在缺陷的克服、线虫疾病模型和人类病理某一方面具有一致性的确证成为模型成功和新药发现的关键。当这些条件具备时，秀丽隐杆线虫在医药研究领域的价值就会更好地表现出来。秀丽隐杆线虫模型为体外筛选和体内筛选架起了一座桥梁，为新药的发现增加了一个新途径。

参考文献

[1] Brenner S. The genetics of Caenorhabditis elegans［J］．Genetics，1974，77(1)：71-94.

[2] Marx J. Nobel Prize in physiology or medicine. Tiny worm takes a star turn［J］．Science，2002，298(5593)：526.

[3] Sifri CD，Begun J，Ausubel FM. The worm has turned――microbial virulence modeled in Caenorhabditis elegans［J］．Trends Microbiol，2005，13(3)：119-127.

[4] Silverman GA，Luke CJ，Bhatia SR，et al. Modeling molecular and cellular aspects of human disease using the nematode Caenorhabditis elegans［J］．Pediatr Res，2009，65(1)：10-18.

[5] Harris TW，Chen N，Cunningham F，et al. WormBase：A multi-species resource for nematode biology and genomics［J］．Nucleic Acids Res，2004，32(Database issue)：D411-D417.

[6] Blume-Jensen P，Hunter T. Oncogenic kinase signalling［J］．Nature，2001，411(6835)：355-365.

[7] Stylianou S，Clarke RB，Brennan K. Aberrant activation of notch signaling in human breast cancer［J］．Cancer Res，2006，66(3)：1517-1525.

[8] Janssens N，Janicot M，Perera T. The Wnt-dependent signaling pathways as target in oncology drug discovery［J］．Invest New Drugs，2006，24(4)：263-280.

[9] Kurz CL，Ewbank JJ. Caenorhabditis elegans：An emerging genetic model for the study of innate immunity［J］．Nat Rev Genet，2003，4(5)：380-390.

[10] Kurz CL，Tan MW. Regulation of aging and innate immunity in C.elegans［J］．Aging Cell，2004，3(4)：185-193.

[11] Millet AC，Ewbank JJ. Immunity in Caenorhabditis elegans［J］．Curr Opin Immunol，2004，16(1)：4-9.

[12] Nicholas HR，Hodgkin J. Responses to infection and possible recognition strategies in the innate immune system of Caenorhabditis elegans［J］．Mol Immunol，2004，41(5)：479-493.

[13] O’ Brien KP，Westerlund I，Sonnhammer EL. OrthoDisease：A database of human disease orthologs［J］．Hum Mutat，2004，24(2)：112-119.

[14] Kimura KD，Tissenbaum HA，Liu Y，et al. daf-2，an insulin receptor-like gene that regulates longevity and diapause in Caenorhabditis elegans［J］．Science，1997，277(5328)：942-946.

[15] Verwaerde P，Anthonissen C，Deprez B. Lipid uptake assays：WO2001088533［P］．2001-11-22.

[16] Lemieux GA，Liu J，Mayer N，et al. A whole-organism screen identifies new regulators of fat storage［J］．Nat Chem Biol，2011，7(4)：206-213.

[17] Wagner BK. Screening：Low-fat worms on drugs［J］．Nat Chem Biol，2011，7(4)：194-195.

[18] Hihi AK，Beauchamp MC，Branicky R，et al. Evolutionary conservation of drug action on lipoprotein metabolism-related targets［J］．J Lipid Res，2008，49(1)：74-83.

[19] Evason K，Huang C，Yamben I，et al. Anticonvulsant medications extend worm life-span［J］．Science，2005，307(5707)：258-262.

[20] Petrascheck M，Ye X，Buck LB. An antidepressant that extends lifespan inCaenorhabditis elegans［J］．Nature，2007，450(7169)：553-556.

[21] Gerisch B，Rottiers V，Li D，et al. A bile acid-like steroid modulates Caenorhabditis elegans lifespan through nuclear receptor signaling［J］．Proc Natl Acad Sci USA，2007，104(12)：5014-5019.

[22] Viswanathan M，Kim SK，Berdichevsky A，et al. A role for SIR-2.1 regulation of ER stress response genes in determining C. elegans life span［J］．Dev Cell，2005，9(5)：605-615.

[23] Collins JJ，Evason K，Kornfeld K. Pharmacology of delayed aging and extended lifespan of Caenorhabditis elegans［J］．Exp Gerontol，2006，41(10)：1032-1039.

[24] Link CD. C. elegans models of age-associated neurodegenerative diseases：Lessons from transgenic worm models of Alzheimer’ s disease［J］．Exp Gerontol，2006，41(10)：1007-1013.

[25] Ellerbrock BR，Coscarelli EM，Gurney ME，et al. Screening for presenilin inhibitors using the free-living nematode，Caenorhabditis elegans［J］．J Biomol Screen，2004，9(2)：147-152.

[26] Lakso M，Vartiainen S，Moilanen AM，et al. Dopaminergic neuronal loss and motor deficits in Caenorhabditis elegans overexpressing human alpha-synuclein［J］．J Neurochem，2003，86(1)：165-172.

[27] Braungart E，Gerlach M，Riederer P，et al. Caenorhabditis elegans MPP+ model of Parkinson’ s disease for high-throughput drug screenings［J］．Neurodegener Dis，2004，1(4-5)：175-183.

[28] Faber PW，Alter JR，MacDonald ME，et al. Polyglutamine-mediated dysfunction and apoptotic death of a Caenorhabditis elegans sensory neuron［J］．Proc Natl Acad Sci USA，1999，96(1)：179-184.

[29] Voisine C，Varma H，Walker N，et al. Identification of potential therapeutic drugs for huntington’ s disease using Caenorhabditis elegans［J］．PLoS One，2007，2(6)：e504.

[30] Ranganathan R，Sawin ER，Trent C，et al. Mutations in the Caenorhabditis elegans serotonin reuptake transporter MOD-5 reveal serotonin-dependent and -independent activities of fluoxetine［J］．J Neurosci，2001，21(16)：5871-5884.

[31] Gaud A，Simon JM，Witzel T，et al. Prednisone reduces muscle degeneration in dystrophin-deficient Caenorhabditis elegans［J］．Neuromuscul Disord，2004，14(6)：365-370.

[32] Pukkila-Worley R，Holson E，Wagner F，et al. Antifungal drug discovery through the study of invertebrate model hosts［J］．Curr Med Chem，2009，16(13)：1588-1595.

[33] Petrascheck M，Ye X，Buck LB. A high-throughput screen for chemicals that increase the lifespan of Caenorhabditis elegans［J］．Ann NY Acad Sci，2009，1170：698-701.

[34] Okoli I，Coleman JJ，Tampakakis E，et al. Identification of antifungal compounds active against Candida albicans using an improved high-throughput Caenorhabditis elegans assay［J］．PLoS One，2009，4(9)：e7025.

[35] Moy TI，Conery AL，Larkins-Ford J，et al. High-throughput screen for novel antimicrobials using a whole animal infection model［J］．ACS Chem Biol，2009，4(7)：527-533.

[36] Garvis S，Munder A，Ball G，et al. Caenorhabditis elegans semi-automated liquid screen reveals a specialized role for the chemotaxis gene cheB2 in Pseudomonas aeruginosa virulence［J］．PLoS Pathog，2009，5(8)：e1000540.

[37] Burns AR，Kwok TC，Howard A，et al. High-throughput screening of small molecules for bioactivity and target identification in Caenorhabditis elegans［J］．Nat Protoc，2006，1(4)：1906-1914.

[38] Kwok TC，Ricker N，Fraser R，et al. A small-molecule screen in C. elegans yields a new calcium channel antagonist［J］．Nature，2006，441(7089)：91-95.

[39] Moy TI，Ball AR，Anklesaria Z，et al. Identification of novel antimicrobials using a live-animal infection model［J］．Proc Natl Acad Sci USA，2006，103(27)：10414-10419.

（收稿日期：2011-08-05）