牡荆子提取物对动物胃肠平滑肌的实验研究

作者:钟喜光，贺竞敏，易华平

【摘要】 目的 探索牡荆子提取物(NCEL)对实验动物胃、肠平滑肌的影响。方法 采用在体肠运动实验观察NCEL对小鼠小肠炭粒推进率和对家兔在体肠肌运动的影响；采用PGE2兴奋大鼠胃底平滑肌，观察NCEL对其影响；采用家兔离体十二指肠及回肠肌标本，观察NCEL对离体肠自发性收缩和对Ach、BaCl2、CaCl2及Hist等4种致痉药所致痉挛性收缩的影响。结果 NCEL能抑制小肠炭粒推进率与阿托品组比较差异无显著性(P＞0.05)；能抑制新斯的明所致肠肌收缩作用，抑制率为64.6%，P＜0.01；能降低PGE2兴奋胃底平滑肌作用；能抑制离体自发性收缩和对抗Ach、BaCl2等4种致痉药的致痉作用。结论 NCEL对动物在体、离体胃肠平滑肌具有明显抑制作用。

【关键词】 牡荆子；提取物；胃肠功能

牡荆子提取物(negundo chastetree extract liquor，NCEL)系马鞭草科牡荆属牡荆子的成熟果实经水提取浓缩制备而成的。民间广泛将其茎、叶、花及果实用于清暑、止渴、祛湿及利气［1］，在我国一些炎热的地区作为夏令常规饮料使用。笔者采用在体和离体胃肠平滑肌实验方法，对NCEL用于“利气”之功效进行实验研究，为其临床应用提供了药理学依据。现将实验情况报道如下。

1 实验材料

1.1 药品及试剂 新斯的明：上海信谊制药厂生产。氯化乙酰胆碱(Ach)、磷酸组胺(Hist)、氯化钡(BaCl2)，均由上海化学试剂总厂提供。氯化钙(CaCl2)；广州化学试剂公司提供。NCEL的制备：取牡荆子成熟果实捣碎，加水10倍，浸泡24h，置控温动态(80℃)提取2h，用絮凝法去除蛋白质、胶质及鞣质后，再经离心处理(6000r/min)分离出杂质，调pH 6.0～6.8，在2～4℃静置24h，上清液经0.25μg孔径滤膜滤过，经浓缩至每毫升含生药1g得橙色透明液体，置冰箱备用。

1.2 器材 二道生理记录仪：河南开封华中电子仪器厂生产。超级恒温水浴箱：重庆机械仪器设备厂生产。注射器、灌胃针头、手术剪、眼科镊、直尺、天平、烧杯及搪瓷盘等。

1.3 动物 Wistar大白鼠，体重220±30g；N2H小白鼠，体重20±2g，雌雄兼用。家兔，体重2.5±0.5kg，。所用动物均由南华大学实验动物中心提供，合格证：湘动(质)95013。

1.4 统计学方法 所用数据用x±s表示，组间差异的显著性意义用t检验。

2 方法

2.1 NCEL对在体肠肌运动的影响

2.1.1 NCEL对小白鼠小肠运动的影响 取禁食24h的小白鼠(不禁水)40只，随机分为4组，即给药组分别给予NCEL(含生药1g/ml)0.1ml/10g，阿托品(0.1mg/ml)0.1ml/10g，新斯的明(0.2mg/1ml)0.1ml/10g和生理盐水组，均为灌胃(ig)给药。给药后10min各鼠ig墨汁(炭粒)0.1ml，给药30min后脱颈椎处死，切开腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门、下端至回盲肠的肠管，轻轻将小肠拉成直线，测量每只小鼠墨汁移动距离，从幽门至墨汁前沿的距离作为墨汁在肠内推进距离，自幽门至回盲部肠管长度作为小肠总全长，用公式计算墨汁推进百分率。墨汁推进率=墨汁在肠内推进距离(cm)÷小肠全长(cm)×100%。

2.1.2 NCEL对家兔在体肠肌运动的影响 取家兔称重，行戊比妥钠麻醉后，固定于手术台，剪去腹部毛，沿腹壁中线剖腹，拉出回肠一段。在肠上以相距5～6cm处各穿一短线，在此二线的中间，再穿一长线，并打一结固定之。将长线经肠固定管的上口拉开口外，二条短线将肠肌固定在肠固定管下口两侧的小孔上，各打结以固定肠肌。引出的肠固定管上口的长线，连接于LZ-6型三笔记录仪记录肠肌的活动。先记录一段药前的肠肌活动曲线，而后由耳缘静脉注射(iv)新斯的明(2mg/kg)，待新斯的明的作用显著时，再iv NCEL，描记肠肌活动曲线。

2.2 NCEL对PGE2兴奋大鼠胃底平滑肌的影响 取Wistar大白鼠，兼用。按Vane氏法制备大鼠胃底条标本［2］。置于装有37℃克-亨液的麦氏浴槽内，一端系在L型通气管上，供给5%CO2的氧气；另一端系在压力换能器上预置负荷1g，稳定1h。用LZ-6型三笔记录仪记录，纸速为0.25cm/min。待收缩平稳时描记正常曲线后，分别给予5×10-9、5×10-8M、5×10-7及1×10-6M等浓度的PGE2。每次给PGE2后，待曲线收缩达最大收缩效应后，换洗浴液3次，待曲线恢复到基线后，加入NCEL(5×10-3g/L)的克-亨液，稳定30min后，描记量效曲线。

2.3 NCEL对家兔离体肠肌的影响

2.3.1 NCEL对家兔离体十二指肠及回肠肌的影响 按离体标本实验法制备家兔离体十二指肠及回肠标本［2］。分别取十二指肠及回肠一段，悬挂于盛有50ml台氏液的麦氏浴槽内，一端固定在L型通气管上，另一端固定于压力换能器上预置负荷1g，平衡30min后，描记正常肠肌收缩曲线后，分别加入NCEL 0.1、0.2、0.4ml与等容积生理盐水(NS)作对照，观察5min。用台氏液冲洗3次，待其恢复正常收缩幅度后，再进行下一步操作。按下列公式算出最大抑制率。最大抑制率(%)=(NS组最终收缩幅度-给药组最终幅度)÷NS组最终收缩幅度。

2.3.2 NCEL对Ach、BaCl2、CaCl2及Hist等4种致痉药所致离体肠肌收缩的影响 取制备好的回肠标本，分别用Ach20μg、BaCl2 10mg、CaCl2 5mg、Hist 50μg，引起离体回肠肌收缩，待平稳后，分别加入NCEL 0.5ml(0.5g生药)，并与NS对照，描记肠肌收缩曲线，记录给药后收缩幅度增减的克数，计算对肠肌收缩的抑制率。

NCEL对致痉药所致回肠收缩抑制率=(致痉药收缩力-NCEL的收缩力)÷致痉药收缩力×100%。

3 结果

3.1 NCEL对小白鼠小肠运动的影响 结果NS组、新斯的明、阿托品组及NCEL组的炭粒移动百分率分别为68.8%、86.0%、48.4%和50.1%。NCEL组分别与新斯的明组及NS组比较差异有非常显著性(P<0.01)，但与阿托品组比较差异无显著性(P＞0.05)，见表1。 表1 NCEL对小白鼠小肠炭粒推进运动的影响 (x±s)

注：与阿托品组比较*P＞0.05

3.2 NCEL对家兔在体肠肌运动的影响 结果表明NCEL对家兔在体肠肌及新斯的明所致肠肌收缩均有松弛作用，抑制率分别为：＞100%及(64.4±9.6)%(P＜0.01)，见表2。

3.3 NCEL对PGE2兴奋大鼠胃底平滑肌的影响 结果显示NCEL能使PGE2量效曲线右移，最大效应下降至(58.8±18.4)%，见表3。

表2 NCEL对家兔在体肠肌运动影响 (x±s)

3.4 NCEL对家兔离体十二指肠及回肠的影响 结果显示当NCEL给药量达0.4ml时，曲线呈最大舒张，平均为90.16%以上，表明NCEL对离体肠自发性收缩有明显抑制作用，并呈剂量依赖性，见表4。

表3 NCEL对PGE2所致大鼠胃底平滑肌的影响 (n=10，x±s)

注：NCEL给药前与给药后比较，*P＜0.01

表4 NCEL对离体肠肌自发性收缩的抑制作用 (%，n=6，x±s)

注：*50ml台氏液中加入NCEL的毫升数

3.5 NCEL对4种致痉药所致家兔离体肠肌收缩的影响 结果显示0.5ml NCEL加入到50ml台氏液中可使4种致痉药引起的痉挛收缩均有明显对抗作用，见表5。

表5 NCEL对4种致痉药所致痉挛收缩的抑制作用 (%，n=6，x±s)

注：*50ml台氏液中加入NCEL的毫升数

4 讨论

NCEL系马鞭草科牡荆属植物牡荆子成熟果实经提取而成的。民间用于清暑、止渴及利气。本文在体肠实验结果显示：NCEL在10g/kg时明显抑制小鼠小肠炭粒推进率；在5g/kg时，明显抑制家兔肠肌蠕动及新斯的明所致肠收缩；表明NCEL对在体肠为抑制作用。在对PGE2兴奋大鼠胃底平滑肌的实验结果表明，NCEL能降低PGE2对大鼠胃底平滑肌的兴奋作用。

离体肠实验结果显示，在50ml台氏液中加入0.4ml NCEL时，家兔十二指肠及回肠肌呈最大舒张状态，表明NCEL对离体肠肌自发性蠕动有明显抑制作用，而且呈剂量依赖性。NCEL对Ach、BaCl2、CaCl2和Hist等4种致痉药有明显的对抗作用。

本实验研究证明NCEL对动物在体、离体胃肠平滑肌收缩有明显抑制作用，从而显示出NCEL的清暑、止渴及利气功效，与临床疗效观察结果相一致。NCEL对动物胃肠平滑肌的抑制作用，提示可能与M受体、组胺受体阻断或与直接影响离子平衡有关，但其确切机制有待进一步证实。

【参考文献】

1 湖南中医研究所.湖南药物志.长沙：湖南科技出版社，1962，671-675.

2 李仪奎.中药药理实验方法学.上海：上海科技出版社，1991，241-245.