中草药体外抗氧化研究进展

[摘 要]从所含成分和实验方法两个方面着手，对中草药体外抗氧化研究进展进行综述。

[关键词]中草药 抗氧化

中图分类号：TD353.5 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）24-0139-01

在正常的生理情况下，体内自由基不断产生，不断被清除，维持在一个正常的生理水平上。但随着时间的推移自由基反应会导致一些有害变化的积累，攻击生命大分子产生过氧化变性、交联或断裂，从而造成组织细胞损伤，引起机体衰老和器官退行性变化，导致心脏病、衰老、糖尿病、红斑狼疮、肿瘤、动脉粥样硬化、原发性高血压及老年痴呆等疾病的发生。因此目前国内外大力开发新的抗氧化成分以期望能安全有效地清除人体内多余的自由基，在抗氧化剂研究领域中一个重要的领域就是对中草药的研究。中草药本身的氧化还原作用也是其药理研究的重要问题。

研究中草药的抗氧化作用是个复杂的课题，这与中草药所含成分的多样性以及机体氧化-抗氧化机制的复杂性有关系。体外实验作为判断一种中草药是否具有抗氧化能力的初筛实验，具有快速、简便的优点。近年来，学者们对于中草药的体外抗氧化活性摸索出一些实验方法，对药材中到底是哪些成分具有抗氧化作用也有了一定研究

常用的体外抗氧化实验方法有：

1. 清除DPPH自由基能力的测定

称取一定量的DPPH，用无水乙醇配制成0.04mg/mL的DPPH溶液。分别取2mL不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液，加入2mLDPPH溶液，混合均匀，室温放置30min后，5000r/min离心10min。取上清液于517nm处测吸光值。用Vc作为

DPPH

A0―2mL无水乙醇+2mLDPPH溶液的吸光值;

A1―2mL样品溶液+2mLDPPH溶液的吸光值;

A2―2mL样品溶液+2mL无水乙醇的吸光值。

2. 总还原能力的测定

在10mL离心管中分别加入0.2mol/LpH6.6的磷酸缓冲液2.5mL和不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液1mL，加入2.5mL1%铁氰化钾，混合均匀后于50℃反应20min。取出后加入2.5mL10%三氯乙酸终止反应，5000r/min离心10min。取上清液2.5mL，加入2.5mL蒸馏水和0.5mLFeCl3，混匀后静置10min，在700nm处检测吸光值。Vc作为阳性对照。

3. 对Fe2+离子螯合能力的测定

分别取1mL不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液和3.7mL蒸馏水，加入2mmol/L的FeCl2溶液0.1mL和5mmol/L的菲洛嗪溶液0.2mL，25℃水浴10min，于562nm处测吸光值。EDTA为阳性对照。样品对Fe2+的螯合率计算公式如下：

Fe2+

A0―1mL蒸馏水代替反应体系中样品溶液后的吸光值;

A1―样品溶液反应后的吸光值;

A2―0.1mL的蒸馏水代替反应体系中FeCl2溶液后的吸光值。

4. 超氧自由基（O2-）清除率的测定

采用邻苯三酚自氧化法测定。取50mmol/LTris-HCl缓冲液（pH8.2）4.5mL，置25℃水浴中保温20min，分别加入1mL样品溶液和0.4mL25mmol/L邻苯三酚溶液，混匀后于25℃水浴中反应5min，加入1mL8mmol/LHCl终止反应，于299nm处测定吸光度（Ax），空白对照组以相同体积蒸馏水代替样品。按下式计算O2-清除率：

O2-

A0―空白对照液吸光度;Ax―样品溶液吸光度。

5. 羟自由基（・OH）清除率的测定

利用H2O2与Fe2+混合产生・OH，在体系中加入水杨酸捕捉・OH并产生有色物质，该物质在510nm下有最大吸收。反应体系中含8.8mmol/LH2O21mL、9mmol/LFeSO41mL、9mmol/L水杨酸-乙醇溶液1mL，不同浓度的样品溶液1mL。最后加H2O2启动反应，37℃反应30min，以蒸馏水为参比，在510nm下测定各浓度的吸光度。考虑到样品本身的吸光值，以9mmol/LFeSO41mL、9mmol/L水杨酸-乙醇溶液1mL，不同浓度的样品溶液1mL和1mL蒸馏水作为样品的本底吸收值。按下式计算・OH清除率：

・OH

A0―空白对照液的吸光度;

Ax―加入样品溶液后的吸光度;

Ax0―不加显色剂H2O2样品溶液本底的吸光度。

有研究表明[3-6]，植物的抗氧化活性与其主要抗氧化成分（总黄酮、多酚及多糖）的含量常表现一定的相关性

黄酮类化合物是一大类以苯色酮环为基础的酚类化合物，广泛分布于高等植物中，是一类具有广泛开发前景的天然抗氧化剂。

植物多酚具有抗菌、消炎、抗血栓、抗病毒、抗癌和扩张血管等作用，可能由其抗氧化作用实现，且已被证实强于某些抗氧化维生素。

多糖具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗感染和降血糖等多种生理功能。

刘程程等[7]认为，栀子、龙胆草和板蓝根等6种中药的黄酮和多酚含量与DPPH自由基的清除作用存在量效关系。

体外实验可作为判断一种中草药是否具有抗氧化能力的初筛实验，若受试物在实验条件下表现出了抗氧化作用，则表明其很可能具有抗氧化能力，可通过体内实验进一步验证和筛选。

目前国内已将抗氧化检测实验用于抗衰老保健食品的评价，对促进保健食品的开发具有积极作用。筛选出具有抗氧化作用的中草药及其提取物甚至单一成分意义重大。

参考文献：

[1]潘伟，刘瑞娜，章炉军，俞康莹，尚晓冬，赵国屏，谭琦.猴头茵提取物抗氧化活性研究[J].食用菌学报.2012.19（2）：95-99

[2]郑晶泉.抗氧化剂抗氧化实验研究进展[J].国外医学卫生学分册.2000，27（1）：37-40

[3]黄梅，王学军，杨凯.中药抗氧化成分及抗氧化活性的体外评价方法[J].重庆科技学院学报（自然科学版）.2006，8（3）：109-112

[4]李华彬，将跃，王赤春等.中药提取物的体外抗氧化性能和总酚含量[J].中华文化论坛，2008（8）：256-259.

[5]杨利军，田迪英.11种中草药抗氧化活性与黄酮含量相关性研究[J].食品工业科技.2008，29（1）：119-123.

[6]李健，杨昌鹏，李群梅等.植物多酚的应用研究进展[J].广西轻工业.2008（12）：1-3.

[7]刘程程，韦万丽，廖莉玲，卜卫钢.6种黔产清热类中草药主要抗氧化成分的含量[J].贵州农业科学.2012，40（2）：41-4