夜热清颗粒中牡丹皮的提取工艺研究

[摘要] 目的：探讨夜热清颗粒中牡丹皮的提取工艺。方法：采用水蒸气蒸馏法提取牡丹皮中挥发性成分，剩余药渣用水煎，分别以丹皮酚的提取量为指标，采用正交试验法筛选牡丹皮的提取工艺；以芍药苷转移率为指标筛选水提工艺。结果：优选的工艺条件为牡丹皮加12倍量水浸泡3 h，水蒸气蒸馏收集9倍量蒸馏液。丹皮酚的平均提取率为87.9%；药渣加入5倍量水煎煮2 h。结论：优选得到的工艺稳定可行。

[关键词] 夜热清颗粒；牡丹皮；丹皮酚；芍药苷；提取

[中图分类号]R284 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）07（c）-038-02

Optimization of extraction process of Cortex Moutan in the Yereqing Granules by orthogonal design

ZHANG Shu, DENG Hong, LIN Hua-qing,YU Chu-qin

(Institute of Medica, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China)

[Abstract] Objective: To obtain the best condition for extracting Cortex Moutan in the Yereqing Granules. Methods: Paeonol was extracted from Cortex Moutan by steam distillation. The extraction technology was optimized using orthogonal design. And the radix was extracted with water while paeoniflorin content was determined to screen the decoction condition. Results: The optimized extraction condition was as follows: Cortex Moutan was extracted instinctively by steam distillation with the extraction rate was 87.9%. The radix was decocted for 2 hours with 5 times amount of water. Conclusion: The optimized extraction process is stable and highly efficient.

[Key words] Yereqing Granules; Cortex Moutan; Paeonol; Paeoniflorin; Extraction

夜热清颗粒剂是六类新药，由牡丹皮、青蒿、葛根、知母、甘草等中药组成，用于感冒后期低热不退或夜热早凉，术后发热等症。其中牡丹皮是一味主要中药，牡丹皮为毛茛科植物芍药属牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮，是临床常用的中药之一，具有镇痛、镇静、解痉、退热等作用；其主要化学成分为酚类及酚苷类（如丹皮酚）、单萜及单萜苷类（如芍药苷），其他成分还有三萜、甾醇及其苷类、黄酮、有机酸、香豆素等，其药理作用主要有抗感染、抗菌，对心血管系统的调节作用，中枢抑制作用，影响免疫功能等。其中丹皮酚(Paeonol) 和芍药苷(Paeoniflorin)是主要活性成分，现代医学研究证明其具有抑菌抗炎、镇痛、解热、解痉、抗过敏、活血化淤、增强免疫功能等作用[1]。

牡丹皮的提取方法较多[2]，一般采用水提工艺与其他药材同时提取，然而丹皮酚熔点低(49.5~50℃)，易升华，因此传统水提工艺得到的丹皮酚含量较低，直接影响了中成药制剂的质量和疗效。在研制中药新药夜热清颗粒时，根据丹皮酚具有挥发性，可随水蒸气蒸馏，在冷水中难溶而易于盐析的特性，我们用水蒸气蒸馏法对牡丹皮单独进行提取，为确保牡丹皮其余有效成分的溶出，我们将药渣继续水提，考察夜热清颗粒剂中牡丹皮合理的提取工艺。

1仪器与材料

Dionex P680高效液相色谱仪；Sartorius BS110S型电子天平。 牡丹皮（购于广州市药材公司，经鉴定为毛茛科植物芍药属牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮）；丹皮酚对照品及芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）。流动相用甲醇为色谱纯，其余均为分析纯。

2 方法与结果

2.1丹皮酚及芍药苷的含量测定[3-5]

2.1.1色谱条件分别参见《中国药典》2005年版一部“牡丹皮”和“白芍”项下条件。

2.1.2 对照品溶液的制备分别精密称取减压干燥48 h的丹皮酚及芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.048 mg的丹皮酚溶液和每1 ml含0.084 mg的芍药苷溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备取0.5 g和1.0 g牡丹皮药材粗粉，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 ml，称重，超声处理30 min，冷后补足损失重量，摇匀，放置。取上清液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，得药材供试品溶液。另精密称取水蒸气蒸馏得到的丹皮酚结晶，加甲醇溶解并稀释至与对照品溶液相近的浓度，过0.45 μm 的滤膜，作为丹皮酚结晶供试品溶液。取相当于2.0 g牡丹皮药材的水提液水浴蒸干，精密加入甲醇50 ml于具塞锥形瓶中，称重，超声10 min，放冷补足损失重量，离心，取上清液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为芍药苷水提液供试品溶液，

2.1.4 样品测定分别吸取上述两种对照品溶液、四种供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定。

2.1.5 测定结果按外标法以峰面积计算，药材中含丹皮酚、芍药苷分别为1.69%和0.42%（n=3）；结晶的丹皮酚含量及水提物中的芍药苷含量在工艺筛选中计算。

2.2 丹皮酚提取工艺的筛选

2.2.1蒸馏倍数的确定取150 g药材进行水蒸气蒸馏，收取蒸馏液至9倍药材量时，得丹皮酚2.19 g，转移率达86.4%，蒸馏至10倍量时，得丹皮酚2.21 g，转移率为87.2%，可认为已收集完全。为降低能耗，故收取至药材蒸馏液9倍量即可。

2.2.2 正交设计试验以丹皮酚的提取量为考察指标，选定加水量、加氯化钠量和温浸时间三因素进行L9(34)正交试验。称取同一批号的牡丹皮9组，每组100 g，加水浸泡，蒸馏，收集9倍量蒸馏液，加氯化钠，冷藏过夜，滤过，结晶物晾干称重，按照“2.1”项下方法测定，并分析结果。因素水平见表1。

2.2.3 结果按照公式计算丹皮酚提取量：提取量(g)＝结晶重量(g)×丹皮酚含量(%)。实验数据及方差分析结果见表2和表3。

结果表明，因素B和C对丹皮酚提取率具有显著性影响。蒸馏液中加一定量的氯化钠和药材经过浸泡均可提高丹皮酚的提取效果。根据表2直观分析结果，选定提取牡丹皮中丹皮酚的最佳工艺条件为A1B3C3，即取牡丹皮饮片，加12倍量的水，浸泡3 h，用水蒸气蒸馏，收集9倍量蒸馏液，蒸馏液加7%药材量的氯化钠，冷藏过夜，滤过，得结晶物，晾干，即得。

2.3 牡丹皮水提工艺的筛选

为确保牡丹皮其余有效成分的溶出，我们将药渣继续水提，以芍药苷转移率为指标筛选出夜热清颗粒剂中牡丹皮合理的提取工艺为：经水蒸气蒸馏后，牡丹皮药渣加入5倍水量，煎煮2 h。

2.4 验证试验

依据筛选的牡丹皮提取工艺进行3批验证实验，计算丹皮酚提取率：提取率（%）=丹皮酚提取量(g)/ 药材中丹皮酚含量(g) ×100%。结果三批丹皮酚的平均提取率为87.9%（RSD＝0.91%），该优选的工艺条件稳定可行。

3 讨论

丹皮酚的提取方法主要有醇提法、水蒸气蒸馏法、CO2超临界流体萃取法等。三种方法中操作最简单、成本最低的是水蒸气蒸馏法。文献报道在水蒸气蒸馏法中，加入一定量的NaCl[6]、Na2SO4[7]等无机盐浸泡药材或加至蒸馏液中使丹皮酚析晶均可提高丹皮酚的提取率。本文选择将NaCl加入蒸馏液中冷藏过夜使析晶的方法，结果令人满意。

牡丹皮含有丹皮酚和芍药苷等多种有效成分，提取时要确保这些有效成分的充分提取，故本文采取先用水蒸气蒸馏法提取丹皮酚，药渣再水提的方法对牡丹皮药材进行提取，其中丹皮酚的平均提取率为87.9%，说明本研究工艺适用于丹皮酚的生产提取，具有提取效率高、简便、实用的特点。

[参考文献]

[1]王祝举，唐力英，赫炎.牡丹皮的化学成分和药理作用[J].国外医药植物药分册，2006， 21(4):155-159.

[2]王立，侯世祥，，等.牡丹皮药材的最适提取工艺研究[J].中国中药杂志，2005，30(8): 569-571.

[3]赵平鸽，宋俊英.HPLC测定风湿（Ⅱ号）颗粒中丹皮酚的含量[J].中国中药杂志，2004，29(5):471.

[4]朱山寅.反相高效液相色谱法测定牡丹皮药材及其制剂中芍药苷的含量[J].医药导报，2005，24（11）：1055.

[5]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：化学工业出版社，2005.69，119.

[6]狄留庆，谢辉，范碧亭，等.牡丹皮中丹皮酚提取方法及工艺参数的优化[J].中药材，1998，21(1):34.

[7]李利红，梁月丽，杜晓丽，等.水蒸气蒸馏法提取丹皮酚的研究[J].郑州牧业工程高等专科学校学报，2004，24(1):1-2.

（收稿日期：2008-04-01）

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