乌贼墨对小鼠T细胞亚群和T细胞活化的影响

[摘要] 目的：研究乌贼墨对小鼠T细胞亚群和T细胞活化的影响。方法：实验组小鼠每天灌胃5%的乌贼墨0.5 ml，连续7 d。对照组小鼠给予等量生理盐水。流式细胞术检测小鼠外周血CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+比值及IL-2αR（CD25）表达。结果：实验组小鼠外周血CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+比值及IL-2αR（CD25）表达较对照组小鼠均有明显升高，而CD8+T细胞却无显著性变化。结论：乌贼墨通过增高CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+比值及IL-2αR（CD25）表达对小鼠免疫功能进行调节。

[关键词] 乌贼墨；免疫作用；T细胞亚群；T细胞活化

[中图分类号] R285.5 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）07（c）-025-02

Research on the effect of the Squid Ink on T-lymphocyte subsets and the activation of T cell of KM mice

WANG Xin1，2, LI Guo-ming1，2

(1.Department of Clinical Micro-Organism Ecsomatics, Ecsomatics School, Guangdong Medical College,Dongguan 523808,China ; 2.Department of Microbiology and Immunology, Zhanjiang 524023, China)

[Abstract] Objective: To study the effects of the squid ink on T-lymphocyte subsets and the activation of the squid ink in KM mice.Methods: 5% squid ink was given to the experimental group mice ig with 5 ml.Blank control group was set up with NS.After administration of 7 consecutive days, the percentage of CD4+ T cell, CD4+/CD8+ and the quantity of IL-2αR(CD25) in KM mouse blood were measured by flow cytometry(FCM). Results:The percentage of CD4+ T cell, CD4+/CD8+ and the quantity of IL-2αR(CD25) in KM mouse blood of experimental group(EG) was higher than control group(CG) ， but the percentage of CD8+ T cell had no significant change.Conclusion: The squid ink promotes immune function of KM mouse by the rising of the percentage of CD4+ T cell , CD4+/CD8+ and the quantity of IL-2αR(CD25).

[Key words] Squid ink; Immunifaction; T-lymphocyte subsets; Activation of T cell

乌贼墨由乌贼墨囊中的分泌腺合成，在墨囊中储存，是乌贼遇到天敌时喷出来染黑周围水域的黑色物质。我国医药对乌贼的应用历史悠久，对乌贼墨的药用始于止血。现代对乌贼墨的研究是从乌贼墨中黑色素的结构及其生物合成开始的。20世纪90年代初日本研究人员通过动物实验证明乌贼墨可明显抑制甚至消除大鼠的移植纤维恶性肿瘤，同时认为这不是因为乌贼墨直接作用于癌细胞，而是通过提高免疫力而杀死癌细胞[1]。我国的研究人员也证明了乌贼墨可通过刺激小鼠分泌多种细胞因子抗肿瘤[2-4]。本研究主要从乌贼墨对小鼠T细胞亚群和T细胞活化的影响方面，研究乌贼墨对免疫功能的影响，为进一步应用乌贼墨提供实验和理论依据。

1材料与方法

1.1实验试剂及仪器

FITC anti-mouse CD3ε、PE anti-mouse CD4、PE anti-mouse CD8α、FITC anti-mouse CD25（美国BioLegend公司），RBC lysing solution （晶美生物工程有限公司），5%浓度粗提乌贼墨（本实验室自制），PICS-XL型流式细胞仪（美国BECKMAN-COULTER公司）。

1.2实验方法

20只SPF级昆明种小鼠，6~8周龄，18~22 g，雌雄各半，广东医学院实验动物中心提供。随机分2组，每组10只。实验组小鼠每天灌胃5%浓度乌贼墨0.5 ml，连续7 d。对照组小鼠给予等量生理盐水。将给药7 d昆明小鼠用摘除眼球法取血，肝素抗凝，实验组和对照组各取100 μl抗凝全血加入试管中，分别加入各种标记抗体及阴性对照15 μl，轻轻混匀，避光30 min，加入稀释后RBC lysing solution 2 ml，1 000 转/min离心5 min，用洗涤液洗涤2次，每次加洗涤液2 ml左右，1 000转/min离心5 min，弃上清，加1 ml固定液，上流式细胞仪检测。

1.3统计学方法

所有的测定指标均采用（x±s）表示，用SPSS13.0统计软件包进行分析，计算相应的统计参数，组间比较采用t检验。

2结果

2.1乌贼墨对小鼠外周血T细胞CD4+、CD8+亚群的影响

实验组小鼠外周血CD4+T细胞百分比及CD4+/CD8+比值均有明显升高，且P＜0.05；而CD8+T细胞却无显著性变化。见表1。

2.2 乌贼墨对小鼠T细胞活化，即IL-2αR (CD25)表达的影响

实验组小鼠外周血CD25表达明显升高，且P＜0.05。见表2。

3 讨论

中医整体观强调人与自然界及人体内各部分的协调与平衡。现代免疫学认为，免疫作用是通过识别和排除抗原异物，以维持机体的平衡。可见中医理论与免疫学二者都强调维持机体平衡，以保持人体的健康。一些传统的中医学观点也认为“正气”意指机体的免疫力；“邪气”即各种致病因子，其中包括瘀血、痰浊、水湿、虫毒等[5]。可见祖国医药学与免疫学密切相关。近年来，随着对虚证本质和扶正固本研究已取得的许多成果，祛邪理论也日渐深入，活血化瘀和清热解毒药则是其中的代表[6]。乌贼墨作为一种活血化瘀中药，也具有增强巨噬细胞活性的作用，能提高小鼠血清IL-1、IL-2、TNF、IFN-γ等细胞因子的产生水平，增强NK细胞、LAK细胞的肿瘤杀伤活性，从而起到抗肿瘤的作用[2-4]。为进一步阐明乌贼墨对免疫功能的调节，我们对小鼠T细胞亚群进行了研究。

正常的免疫应答有赖于各免疫细胞，尤其是T细胞亚群之间的相互制约，以形成适度的免疫应答，使机体在此过程既能清除抗原性物质，又不损伤自身组织[7]。免疫功能的紊乱，常常是由于各T细胞亚群之间的不平衡造成的。现代免疫学观点认为，外周血中T细胞亚群的数目和CD4+/CD8+比值是判断机体免疫调节平衡状态最有意义的参数之一，也是疾病严重程度和预后的重要标志 [8-9]。本实验结果显示，乌贼墨可使实验组小鼠外周血CD4+T细胞百分比及CD4+/CD8+比值明显升高，而CD8+T细胞无显著性变化。提示乌贼墨通过CD4+T细胞促进免疫细胞的增殖与分化，协调免疫细胞间的相互作用[2]。T细胞表面分子IL-2受体α链CD25对IL-2的亲和性较高，因而它的功能主要是调节结合IL-2的浓度，活化T细胞，并刺激其他细胞因子的合成与释放。所以，细胞表达CD25增多后，可使更多的T细胞级联活化，从而增强淋巴细胞的免疫功能[10]。本实验结果显示，乌贼墨可增强CD25分子的表达，即可促进T细胞增殖激活，从另一方面反映了乌贼墨能刺激淋巴细胞，使免疫功能增强。关于T细胞激活的过程，目前认为需要一个附加信号，称共刺激信号或称共刺激分子，而介导共刺激信号的主要是B7分子，B7分子可被CD4细胞表面的CD28分子识别，当T细胞的TCR/CD3复合物与抗原MHC复合物结合后，如有B7存在，则B7与CD28相互作用，因此产生共刺激信号，使T细胞激活。乌贼墨激活T细胞，使细胞膜表达IL-2R即CD25增多的机制是否是通过细胞表达B7分子，或通过改变其他淋巴细胞受体，有待进一步研究。

[参考文献]

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[10]Kook H, Zeng W, Guibin C，et al．Increased cytotoxic T cells with effection phenotype in aplastic anemia and myelodysplasia[J].Exp Hematol，2001，29(11)：1270-1279.

（收稿日期：2008-05-07）

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