孕16~28周胎儿脐血β-地中海贫血基因及其血红蛋白电泳\红细胞参数变异分析

[摘要] 目的：探讨红细胞参数和毛细管血红蛋白电泳及β-地中海贫血基因检测在产前诊断β-地中海贫血中的互补作用。方法：210 例孕16～28周胎儿脐血标本根据β-地中海贫血基因型测定结果分为4 组，对4 组血常规结果中的平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）及血红蛋白A（HbA%）、等多参数进行统计分析。结果：对照组MCV、MCH、MCHC与其他各组结果对比差异无统计学意义（P>0.05）；但HbA（%）在其他组间的结果均低于对照组，差异有统计学意义（P

[关键词] β-地中海贫血基因；产前诊断；脐血；血常规；毛细管血红蛋白电泳

[中图分类号] R55 [文献标识码] C[文章编号] 1674-4721（2011）06（a）-086-03

16-28 weeks fetal gestational umbilical cord blood beta Mediterranean anemia genes and their hemoglobin electrophoresis, RBC parameter variation analysis

ZHANG Lijun1, LIU Aiqin1, ZHONG Liruo2

1.Department of Laboratory, Second Clinical College of Jinan University Shenzhen City People′s Hospital, Guangdong Province, Shenzhen 518020, China; 2.Department of Obstetrics, Second Clinical College of Jinan University Shenzhen City People′s Hospital, Guangdong Province, Shenzhen 518020, China

[Abstract] Objective: To study the red blood cell parameters and capillary electrophoresis and β-hemoglobin gene to detect anemia in the prenatal diagnosis of β thalassemia in the complementary role. Methods: 210 pregnant and 16 to 28 weeks of fetal cord blood samples according to determination of β-thalassemia genotypes were divided into 4 groups, 4 groups of blood results mean corpuscular volume (MCV), mean corpuscular hemoglobin (MCH), mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC) and hemoglobin A (HbA%), and other parameters were analyzed. Results: In Group MCV, MCH, MCHC compared with results of other groups no significant difference (P>0.05); but HbA (%) results in the other groups were lower than the control group, the difference was statistically significant (P

[Key words] β-thalassemia gene; Prenatal diagnosis; Cord blood; Blood; Capillary hemoglobin electrophoresis

地中海贫血是我国南方地区常见的遗传病，据统计广东省β-地中海贫血的检出率达到了11.83%～31.36%[1]。当夫妇双方均为β-地中海贫血基因携带者时，其后代就可能出现中、重度β-地中海贫血患儿。因此， 对夫妇双方均为β-地中海贫血基因携带者的孕妇在孕期进行产前诊断，可以控制中、重度β-地中海贫血患儿出生，从而达到优生优育的目的。本文对210例孕16～28周的胎儿脐血标本的β-地中海贫血基因、血常规及血红蛋白电泳结果进行了分析，以期更好的产前诊断β-地中海贫血。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2008 年1 月～2010 年12 月在本院产前诊断门诊确诊的夫妇双方均为β-地中海贫血基因携带者共210例，孕妇年龄23～44岁，平均（32.08±4.65）岁。孕妇在孕16～28周抽取胎儿脐血进行血常规、毛细管血红蛋白电泳及β-地中海贫血基因检测。根据β-地中海贫血基因型将210 例胎儿脐血标本分为4组，其中正常对照组180例、β-地中海贫血基因突变杂合子（轻型）组22例，β-地中海贫血基因突变多点杂合子（中间型）组7例，β-地中海贫血基因突变纯合子（重型）组1例。所有患者均为单胎，无心、肝、肾、糖尿病、原发性高血压等其他内科并发症，各组孕妇年龄、孕周、孕产次、学历、籍贯、家庭收入等各项比较，差异无统计学意义。

1.2 仪器、试剂与方法

1.2.1 血红蛋白电泳EDTA2K-抗凝胎儿脐带血2 ml，用法国sebia全自动毛细管电泳仪配原装试剂定量检测各血红蛋白成分的比例，分析异常血红蛋白区带。

1.2.2 基因诊断EDTA2K-抗凝胎儿脐带血2 ml，用反向斑点杂交法检测β基因的基因型别。基因提取、PCR 扩增反应、膜杂交及基因分析操作程序严格按照试剂盒操作使用说明书进行，诊断试剂盒由深圳益生堂公司提供，扩增仪为美国ABI公司PE7700基因扩增仪。

1.2.3 血常规检测EDTA2K- 抗凝血2 ml，用贝克曼（Beckman Coulter）LH750型全自动血液分析仪配原装试剂进行检测。

1.2.4 数据分析数据均以均数±标准差（x±s）形式表示，用SPSS 13.0统计分析软件进行 t检验，P

2 结果

2.1 脐血β-地贫基因异常型别及其红细胞参数及血红蛋白电泳结果

对210例胎儿脐血标本进行血红蛋白电泳、血常规及β-地中海贫血基因检测，异常基因型有30例。用反向斑点杂交法检测β-地中海贫血患者的基因突变型，共检出10种突变类型，主要以41-42M/N，654 M/N，17M/N，-28M/N等4 种突变为主。其中β-地中海贫血轻型22例，β-地中海贫血中间型7例，β-地中海贫血重型1例，正常对照组180例。另有2例结果特殊，1例反向斑点杂交检测β-地中海贫血正常（N/N）但血红蛋白A[HbA（%）]异常低，另1例反向斑点杂交检测β-地中海贫血为41-42M/N，但MCV（fl）异常高。30例脐血β-地中海贫血基因异常型别及其红细胞参数及血红蛋白电泳结果见表1，以HbA（%）数值由低到高排列。

2.2 4 组样本中红细胞参数及血红蛋白电泳结果

对4组样本的血常规参数进行比较，对照组MCV、MCH、MCHC 与其他各组结果对比差异无统计学意义（P>0.05）；但HbA（%）在其他组间的结果均低于对照组，差异有统计学意义（P

3 讨论

地中海贫血是一组常染色体不完全显性遗传性慢性溶血性疾病，其主要发病机制是α珠蛋白肽链与β珠蛋白肽链合成速率的不平衡，从而引起溶血性贫血[2]。其中，β-地中海贫血是由于基因组中β珠蛋白基因突变导致β珠蛋白肽链缺如（β0）或合成不足（β+）所致[3]。对孕期夫妇进行轻型地贫筛查，对高危患者进行产前诊断，对减少重型地贫儿的出生率，降低围生儿病死率，提高人口素质具有重要意义[4]。

人类血红蛋白由珠蛋白按四级结构和血红素合成，珠蛋白肽链有6种，分别命名为：α、β、γ、δ、ε、ζ链。α链有141个氨基酸残基，α和ζ珠蛋白基因相互临近，组成“α”基因簇，位于16号染色体短臂上。β、γ、δ、ε珠蛋白基因相互临近，组成“β”基因簇，位于11号染色体短臂上。β链有146个氨基酸残基。从胚胎期开始先有α链和γ链合成并迅速达到高峰，β链孕3～5月开始合成，到妊娠末期合成上升[5]。基因决定了胎儿血红蛋白成分与成人不同。在诊断β-地中海贫血时，胎儿脐血血红蛋白电泳结果要注意分析HbA（α2β2）值，而在成人要特别注意HbA2（α2δ2）值的不同。在产前诊断实施过程中，有多种方法可应用，其中毛细管血红蛋白电泳有非常重要的作用，能够准确定量检测HbA（α2β2）和HbF（α2γ2）等多种血红蛋白含量，精确度高。16～28孕周胎儿脐血血红蛋白成分为HbA（α2β2） 和HbF（α2γ2），毛细管血红蛋白电泳可将地中海贫血进行初步分为α-地中海贫血和β-地中海贫血，可以有效地筛查出高危地中海贫血。毛细管血红蛋白电泳同时还可筛查出各种异常血红蛋白，如HbH、HbE、HbG等，为进一步进行基因诊断和遗传咨询提供基础[6]。

虽然血常规检测对成人检测地中海贫血有很好筛查作用，有报道MCV对地贫的筛查准确率为90.23%[7]，但在胎儿脐血标本中，从本资料实验结果看，MCV在β-地中海贫血各基因型间无明显差异，这和胎儿脐血中HbF（α2γ2）占（94.5±1.3）%的组成成分是相关的。β-地中海贫血以突变为主，缺失少见，目前全世界已发现200多种突变，在中国人群中已发现约30种[8]。本文使用诊断试剂由深圳益生堂公司提供，可检测中国人常见17种突变。本文279 例胎儿脐血标本中检出10种突变类型，其中多为41-42M/N，654 M/N，17M/N，-28M/N4 种突变，突变类型的发生频率与报道相同。

为了更好确诊地中海贫血，笔者建议多种检查联合诊断，胎儿脐血血常规检测虽然在诊断β-地中海贫血无优势，但在α-地中海贫血诊断中作用明显，另文叙述。毛细管血红蛋白电泳及反向斑点杂交法测定脐血β-地中海贫血基因在产前诊断β-地中海贫血方面都能取得较好的效果，且具有良好的相互验证及补充诊断作用。本资料所有确诊的β-地中海贫血基因突变类型中HbA均值为（2.7±0.7）%，明显小于正常胎儿脐血标本均值（5.5±1.3）%。而β-地中海贫血突变纯合子、β-地中海贫血突变多点杂合子HbA均值则为0.4%和（0.8±0.8）%。在笔者实际临床工作中也发现2例特殊患者，1例为反向斑点杂交法检测胎儿脐血β-地中海贫血基因正常而毛细管血红蛋白电泳HbA值为1.5%。其母亲β-地中海贫血基因正常但有明显贫血症状，笔者认为这应是反向斑点杂交法检测的17种以外的型别，因条件所限未作进一步检测。另1例β-地中海贫血基因型为41-42M/N（排除α-地中海贫血），但HbA值高达5.2% MCV值高达145.0 fl，胎儿有严重贫血症状，此结果待进一步研究。

[参考文献]

[1]杜传书.地中海贫血研究的现状与未来[J].中华医学遗传学杂志,1996, 13(5):256-257.

[2]Weatherall DJ,Clegg JB.The Thalassemia Syndrome[M].3 rded.Oxford:Blackwell Scientific Publication,1981:450.

[3]叶任高,陆再英.内科学[M].6版.北京:人民卫生出版社,2004:586-586.

[4]罗玉芳,文红萍.MCV、MCH 筛查妊娠合并轻型地中海贫血的价值[J].右江医学,2006,34(6):607-608.

[5]谭齐贤,张树平.临床血液学和血液检验[M].3版.北京:人民卫生出版社,2003.

[6]领,魏新燕,范美珍,等.血红蛋白电泳在地中海贫血筛查中的应用价值[J].现代预防医学,2007,34(6):1132-1134.

[7]李霞,徐剑锋,杨林,等.产前检查中实施地中海贫血筛查的临床意[J].中国优生与遗传杂志,2005,(13):62.

[8]Weatherall DJ,Clegg JB.The Thalassemia Syndromes[M].4 th ed.Oxford,England:Blackwell Science,2001.

（收稿日期：2011-02-23）

注：“本文中所涉及到的图表、公式、注解等请以PDF格式阅读”