鸡新城疫灭活疫苗乳化工艺优化

摘要：目的：探索出应用国产矿物油佐剂配制鸡新城疫疫苗的最优方案。方法：将新城疫病毒与国产的矿物油佐剂配制鸡新城疫疫苗，通过调节乳化因素（水相和油相的比例、乳化剂搅拌转数、乳化时间）进行单因素试验制备疫苗，并确定最佳乳化条件，从而制备出稳定性更高的油乳剂灭活疫苗。结果：鸡新城疫油乳剂灭活疫苗稳定性，受乳化制备中乳化时间、搅拌转数、水相和油相比例的影响。结论：试验结果表明，最佳的乳化时间是45分钟，最佳的搅拌转数是6000转/分，最佳油相和水相比例为7∶3。

关键词：鸡新城疫；疫苗；乳化因素；稳定性

基金目：大学生科技创新科研项目，吉农院合字[2016]第053号

中图分类号： S852.5 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/ki.jlny.2017.11.020

我国于1935年发现鸡新城疫，目前在全国范围内仍普遍存在，并且是我国养鸡业危害最大、经济损失最严重的禽病之一。该病是由新城疫病毒引起的一种主要侵害鸡的急性高度接触传染性疾病。鸡新城疫疫苗现今应用广泛的是油乳剂灭活疫苗。而佐剂是一种非特异性免疫增强剂，可增强机体的免疫应答能力或改变免疫应答的类型。为提高疫苗免疫效果，增强动物机体对疾病的抵抗能力，选择合适的佐剂尤为重要，通过对生物制品企业的调研了解到，目前一些生物制品企业大部分选择进口疫苗，虽然免疫效果相对与国产佐剂疫苗要好，但成本相对较高，影响企业产品在市场上的竞争力。

鸡新城疫疫苗的研究主要集中在不同类型的佐剂疫苗和不同厂家的佐剂疫苗对鸡新城疫疫苗抗体水平的影响，而对国产矿物油佐剂乳化条件优化方面的文章近几年未见报道。结合实际生产中成本问题和实验室的条件，本研究将新城疫病毒与国产的矿物油佐剂配制鸡新城疫疫苗，并通过调节乳化因素（水相和油相的比例、乳化剂搅拌转数、乳化时间）进行单因素试验，通过理化相关试验确定最佳乳化条件，从而制备出稳定性更高的油乳剂灭活疫苗，从而为生物制品企业提供成本相对较低、免疫效果好、副反应小的油佐剂乳化方案。

1材料与方法

1.1 材料与设备

1.1.1主要材料国产矿物油佐剂司本 80（法国梅里亚公司）、 吐温 80（法国梅里亚公司）、注射用水（南京梅里亚公司）含有病毒的鸡胚尿囊液（已灭活）、硫柳汞。

1.1.2生产设备 TDL-5离心机、高速匀浆机、普通冰箱、恒温箱、高压蒸汽灭菌锅。

1.2方法

1.2.1油相的配制

将国产矿物油佐剂加入乳化剂司本80中，体积比为94∶6，加入硫柳汞，在116℃、40分钟条件下高压蒸汽灭菌，制备出油相。

1.2.2水相的配制 将含有病毒的鸡胚尿囊液（已灭活）加入乳化剂吐温80中，体积比为94∶6，加入硫柳汞，在116℃、40分钟条件下高压蒸汽灭菌，制备出水相。

1.2.3国产矿物油佐剂乳化时间条件优化

将水相加入油相，油水比例为7∶3；乳化50分钟（匀浆机转速6000转/分钟，乳化温度25℃以下）；分别在40分钟、45分钟、50分钟进行取样并标注（40分钟样品为A01，45分钟样品为A02，50分钟样品为A03）；乳化后静置；取样对样品进行相关稳定性检验和理化检验。

1.2.4国产矿物油佐剂油水相比例条件优化

分别按油相：水相比例为3∶2，7∶3，2∶1，将油相和水相混合，并分别标记为A04，A05，A06；乳化45分钟（匀浆机转速6000转/分钟，乳化温度25℃以下）；乳化后取样，对样品进行相关稳定性检验和理化检验。

1.2.5国产矿物油佐剂搅拌转数条件优化

将水相加入油相，油水比例为7∶3；将匀浆机转数分别设置为5000转/分钟，6000转/分钟，7000转/分钟进行乳化，并分别标记A07，A08，A09；乳化45分钟（乳化温度25℃以下）；乳化后取样，对样品进行相关稳定性检验和理化检验。

1.2.6稳定性检验

将上述A01，A02，A03，A04，A05，A06，A07，A08，A09每组样品分别抽取一瓶，用破坏方法（离心15分钟，3000转/分钟或400转/分钟）来检验疫苗稳定性。将每组样品放入37℃恒温箱内，每日观察，持续21天，记录结果。判定标准：疫苗经离心或高温放置后，若在容器底部出现水滴或分层，则表明疫苗破乳，判定疫苗不稳定。

2 结果与讨论

从表1和表2看出，在乳化时间、油水相比例、乳化剂搅拌转速中，A02、A05和A09分别为最佳条件，从观察日开始到观察结束，一直没有破乳且没有分层。而在其他条件下疫苗均出现了破乳的现象。

3 结论

最佳的乳化时间，不但可保证产品质量，也能提高生产效率，降低能源消耗。乳化时间过短则无法乳化完全，时间过长则会破坏已经形态完好的油包水颗粒。研究结果显示，最接乳化时间为45分钟。

乳化过程中的搅拌速度也会影响乳剂的性质。乳化速度太小无法形成稳定的油包水颗粒，速度太大则会破坏抗原的免疫原性，影响乳剂质量，并且搅袢速率过高容易导致破乳，影响其稳定性。研究结果显示，乳化速度为6000转/分钟时乳化效果最好。

油水相比例对疫苗的黏度有较大影响，随着油相比例不断增加，水相比例减少，油乳剂疫苗的黏度会越来越小。因此，合适的油水比例才能保证生产出最佳黏度的油乳剂疫苗，产出高质量的油乳剂灭活疫苗。研究结果显示，最佳的油水相比例为7∶3。

参考文献

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作者简介：刘欣愿，在读本科生，研究方向：生物技术。

通讯作者：杨祥波，硕士，讲师，研究方向：生物技术在植物中的应用。