不同产地百合药材中8种活性成分的分析与评价

[摘要]研究采用UPLCTQMS联用技术，对百合中8种成分进行分析测定。35个批次百合药材中王百合苷E、王百合苷F、王百合苷C及王百合苷B的质量分数分别在0604 0×10-1～1862×10-1，0680 0×10-2～4475×10-2，0700 0×10-3～2965×10-1，0170 0×10-1～4724 mg・g-1；绿原酸、咖啡酸、原儿茶醛及阿魏酸的质量分数分别在6827×10-3～1607×10-3，0111 0×104～7971×10-3，0593 7×10-3～2962×10-3，2606×10-2～4589×10-2 mg・g-1。进行主成分分析，绘制PCA（principal components analysis）得分图及VIP图，35批百合药材被分成以产地为区分的2组，2个主产地百合样品中，阿魏酸和咖啡酸在2个产地的百合中含量差异较大，其他6种成分含量在两产地间相差较小。通过主成分分析的F综合评分，可将样品进行排序，结果发现，在综合排名的前10位，有8种百合为安徽霍山百合。建立基于的UPLCTQMS用于百合多指标的质量评价方法，具有准确、高效、便捷等优点，为百合药材质量控制提供依据。

[关键词]百合； 含量测定； UPLCTQMS； 主成分分析； 相关性分析

Analysis and evaluation of eight active ingredients in

Lilium lancifolium from different regions

ZHANG Huangqin1， YAN Hui1， QIAN Dawei1*， ZHU Zhenhua1， GUO Sheng1，

GUO Lanping2， TANG Zhishu3， DUAN Jinao1

（1Jiangsu Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization， National and Local Collaborative

Engineering Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization and Formulae Innovative Medicine， Nanjing University of

Chinese Medicine， Nanjing 210023， China；

2State Key Laboratory Breeding Base of Daodi Herbs， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China；

3Shanxi Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization， Shanxi University of Chinese Medicine，

Xianyang 712083， China）

[Abstract]This study established a rapid UPLCTQMS/MS method for determination of eight active ingredients in Lilium lancifolium The contents range of regaloside E， F， C and B are as follows： 0604 0×10-11862×10-1， 0680 0×10-24475×10-2， 0700 0×10-32965×10-1， 0170 0×10-14724 mg・g-1； the contents of chlorogenic acid， caffeic acid， protocatechualdehyde and ferulic acid， within the range of 6827×10-31607×10-3， 0011 1×10-37971×10-3， 0593 7×10-32962×10-3， 2606×10-24589×10-2 mg・g-1， respectively According to PCA （principal components analysis） plotting， 35 batches can be divided into two categories， namely Anhui Huoshan and Hunan Longshan The main different elements between these two categories are caffeic acid and ferulic acid according to the VIP （variable importance in the projection） points figure Based on comprehensive principal component values， there are eight batches of L lancifolium from Huoshan among the comprehensive ranking of ten The UPLCTQMS method for simultaneous analysis of eight active ingredients is accurate， efficient and convenient. This result can provide scientific basis for quality control of L lancifolium

[Key Words]Lilium lancifolium； determination； UPLCTQMS； principal components analysis； correlation analysis

百合药材为百合科植物卷丹Lilium lancifolium Thunb、百合L brownii F E Brown var viridulum Baker或细叶百合L pumilum DC的干燥肉质鳞叶[1]。其味甘，性寒，有养阴润肺、清心安神、止咳祛痰之功。用于治疗阴虚燥咳、劳嗽咳血、肺痈、老年人慢性支气管炎、神经衰弱、失眠心悸、精神恍惚等症[23]。现代研究表明，百合含酚性甘油酯类、有机酸类、生物碱类、甾体皂苷类和黄酮类等活性成分，其中酚性甘油酯类化合物，包括王百合苷E、王百合苷F、王百合苷C、王百合苷B、1O阿魏酰甘油等，具有抗氧化、抗肿瘤、抗增殖、免疫调节等作用[46]。目前有关百合中有效成分的分析方法主要是采用HPLCUV测定薯蓣皂苷元等皂苷类成分；总多糖及总黄酮的含量测定多运用紫外可见分光光度法；其元素含量采用ICPAES，ICPMS测定；亦有应用LCMS测定百合中酚性甘油酯的含量的报道[714]，但所报道的测定方法中，每一种方法只针对单一结构类型的成分进行测定，并且其中单黄酮成分及另一类活性成分有机酸的含量测定方法尚未见报道。本文建立了应用UPLCTQ/MS同时测定百合征性成分酚性甘油酯、黄酮及有机酸类成分的分析方法，通过一次测定即能完成百合中3类活性成分的含量分析，是一个较全面快速的百合质量评价方法。并用于目前我国百合药材的主产地湖南龙山、安徽霍山[1517]栽培品种卷丹的分析评价。为百合药材的质量控制与临床用药提供依据。

1材料

11仪器

ACQUITY UPLC系统（二元高压泵，自动进样器，柱温箱，二极管阵列检测器，Waters公司）；Xevo TQ/MS质谱系统（Waters公司）；MassLynxTM质谱工作站（Waters公司）；ML204电子分析天平（1/10万）、MS105电子分析天平（1/1万）（梅特勒托尼多仪器有限公司）；Millipore Q纯水系统（美国Millipore公司）；KQ250E型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；Anke GL16G Ⅱ型离心机（上海安亭科学仪器厂）。

12试药与试剂

王百合苷E、王百合苷F、王百合苷C、王百合苷B均为本实验室从百合药材中分离自制，其化学结构经1HNMR，13CNMR及ESIMS分析确认，纯度经HPLCUV检测均大于98%。乙腈、甲醇、甲酸（TEDIA）、绿原酸、咖啡酸、原儿茶醛、阿魏酸（成都普菲德生物科技有限公司）。

百合样品为实地采集，经南京中医药大学段金廒教授鉴定为百合科植物卷丹L lancifolium的干燥肉质鳞叶，共采集了35批百合样品，其中S1～S18为湖南龙山百合，S19～S35为安徽霍山百合，凭证标本存放于江苏省中药资源产业化过程协同创新中心。

2方法

21供试品溶液的制备

取各批次百合药材供试品（40目）约05 g，精密称定，置于具塞锥形瓶，加50%甲醇20 mL，称重，静置2 h，室温超声30 min，称重，以50%甲醇补足失重，摇匀，离心10 min（13 000 r・min-1）。取上清液适量，经022 μm的微孔滤膜滤过后，取续滤液作为供试品溶液。以干燥品计算供试品各类成分的含量。

22对照品溶液的制备

分别取绿原酸、咖啡酸、原儿茶醛、阿魏酸、王百合苷E、王百合苷F、王百合苷C、王百合苷B对照品适量，精密称定，用甲醇溶解配制成对照品储备液；取适量各成分储备液，加甲醇稀释定容，配制成混合对照品溶液，其中各成分质量浓度分别为0484 0，0436 0，0420 0，0620 0，0638 0，0717 0，1064，2010 g・L-1的混合对照品储备液。取上述混合对照品溶液用甲醇稀成6份不同浓度的混标工作液。

23UPLCTQMS分析条件

色谱分析条件：Waters ACQUITY UPLC BEH C18（21 mm ×100 mm，17 μm）色谱柱；柱温35 ℃。流动相乙腈（A），01%甲酸水溶液（B），梯度洗脱（0 ～ 2 min，3% A；2 ～ 6 min，3%～ 10% A；6 ～ 9 min，10%～15% A。流速04 mL・min-1；进样量 2 μL。

质谱检测条件ESI源；扫描方式ESI+，ESI-模式；多反应检测（MRM）；毛细管电压30 kV；锥孔电压30 V；萃取电压30 V；离子源温度150 ℃；脱溶剂气温度500 ℃；锥孔气流量50 L・h-1；脱溶剂气流量1 000 L・h-1，辅助气流015 mL・min-1。各类成分的质谱参数见表1，色谱图见图1。

张黄琴等：不同产地百合药材中8种活性成分的分析与评价

24线性试验及方法学考察

241标准曲线与定量限

精密量取22项下混标工作液按23项下的分析条件进行测定。以被测化合物的峰面积（Y）对浓度（X）进行线性回归，并按信噪比（S/N）为10和3分别计算被测组分的定量限（LOQ）和检测限（LOD）。结果见表2，各成分线性良好，r均在0995 8以上。

242精密度试验

取中浓度混合对照品溶液，在上述色谱条件下分别在1日内重复进样6次和在连续3日内重复进样3次以测定所分析的化学成分的峰面积，以各指标成分含量的RSD来评价日内及日间精密度。

结果见表3，各成分日内精密度RSD≤28%，日间精密度RSD≤30%。

243重复性试验