HPLC-ESI-MS法分析山茱萸炮制前后的化学成分

摘 要：目的：建立高效液相色谱-电喷雾-质谱（HPLC-ESI-MS）方法，分析比较山茱萸炮制前后化学成分的变化。方法：采用Agilent Extend-C18色谱柱，乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱；Agilent1200高效液相色谱仪―6410 三重四级杆质谱仪联用；正、负离子检测模式。结果：通过质谱中的主要碎片，在正离子检测模式下，山茱萸生品中检测出了莫诺苷、马钱苷、山茱萸裂苷，制品中检测出了5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷和山茱萸裂苷；在负离子检测模式下，山茱萸生、制品中均检测出了没食子酸、7-O-没食子酰基景天庚酮糖、莫诺苷、山茱萸裂苷。结论：在质谱正、负离子检出模式下，主要化学成分响应均较好，这为分析山茱萸炮制前后化学成分变化，以及控制饮片质量提供了一种新的方法。

关键词：HPLC-ESI-MS；山茱萸；炮制；化学成分

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2012)01-0062-04

Analysis on Active Components in Crude And Processed Cornus Officinals by HPLC-ESI-MS

DU Weifeng1, ZHANG Yun1,CONG Xiaodong1, CAI Baochang1,2

(1.Research Center of TCM Processing Technology,Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 311401,Zhejiang,China;

2.Jiangsu Key Laboratory of Chinese Medicine Processing, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210029,Jiangsu,China)

Abstract:Objective：To establish an analytical method for comparing the components in crude and processed Cornus officinalis by HPLC-ESI-MS. Methods: These components were analyzed with a Agilent Extend-C18 by gradient elution using 0.1% (V/V) methanoic acid water-solution-acetonitrile as the mobile phase,using Agilent 1200 HPLC-6410 QQQ MS, and detected in positive and negative ion mode. Results: Through fragments mass information in positive ion mode, three compounds(morroniside, lognain and cornuside)were detected in crude drug and four ones(5-HMF, morroniside, lognain and cornuside) in processed product; in negative ion mode, four compounds(gallic acid, 7-O-galloyl-D-sedohep-tulose, morroniside and cornuside) were detected in all crude drug and processed product. Conclusion: In positive and negative ion mode, the main active components all could be detected well. The analytical method could be applied to the intrinsic quality control of crude and processed Cornus officinalis.

Key words:HPLC-ESI-MS; Cornus officinalis; processed; active components

山茱萸为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb. et Zucc.的干燥成熟果肉。临床上多用山萸肉、酒山萸肉。山萸肉长于敛汗固脱，用于自汗或大汗不止，阴虚盗汗；经酒蒸制后，补益肝肾作用增强，多入滋补方剂，常用于眩晕耳鸣，阳痿遗精，遗尿，尿频，月经过多或崩漏，腰部酸痛等[1]。山茱萸中主要含有多糖类、环烯醚萜苷类、鞣质类、有机酸类等。本课题组前期研究，主要采用紫外光谱法或高效液相色谱法分析比较了山茱萸炮制前后主要有效成分的含量变化，如：多糖、黄酮、没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、獐牙菜苷、马钱苷和山茱萸裂苷[2-9]，液质联用分析方法鲜有报道[10-11]。本实验利用HPLC-ESI-MS方法对山茱萸炮制前后几种化学成分进行了质谱解析。分别在质谱正负离子检出模式下，检测出多个化学成分，与传统的仅检测某一化学成分相比，更能比较炮制前后的差别，为山茱萸饮片质量控制提供了一种新的方法。

1仪器与试药

液质联用采用Agilent 1200高效液相色谱-6410三重四极杆质谱联用仪（美国Agilent仪器公司）；AG285电子天平（0.01 mg，METTLER，Switzerland）；KQ-500E型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

山茱萸（批号：Y080507，产地：河南），酒萸肉（批号：080625，为山茱萸经酒蒸而得的炮制品），两者均由浙江中医药大学中药饮片厂提供，为《中国药典》2010版中药饮片标准研究起草用样品，并经浙江中医药大学中药饮片厂主管中药师郑建宝老师鉴定。

甲醇、甲酸为分析纯；乙腈为色谱纯；水为娃哈哈纯净水。

2实验方法

2.1液相色谱条件 Agilent 1200型高效液相色谱仪，色谱柱：Agilent Extend-C18 (2.1mm×100 mm，3.5μm )；流动相：溶剂A (0.1%的甲酸水溶液)，溶剂B (乙腈)，梯度洗脱：0～5 min，2% B；5～10 min，2%～15% B；10～20 min，15% B；20～25 min，15%～45% B；25～35 min，45%～90% B；35～40 min，90% B。柱温：25℃；流速：0.2 mL/min；检测波长：240nm；进样量为10μL。

2.2质谱条件 Agilent 6410三重四极杆质谱仪，离子源：电喷雾源( ESI)；扫描范围：100～1000 (m/z)；干燥气为N2，体积流量：10 L/min；雾化气压力：45psi;干燥气温度：350 ℃；毛细管电压: 4000 V；Fragmentor：135V；CE：40V。

2.3 样品处理 精密称取过40目的山茱萸生、制品粉末1.00g，置25mL锥形瓶中，加80%甲醇溶液定容至刻度，

称重，超声提取45 min，取出，再称重，用80%甲醇溶液补足减失的重量，取上清液过0.45μm微孔滤膜作滤液作为LC-MS分析样品。

3结果和分析

3.1山茱萸提取物的总离子流色谱图 在高效液相色谱与电喷雾质谱(HPLC-ESI-MS)联用实验中，首先通过在正离子模式（Positive）和负离子（Negative）模式下的全扫描（Scan），检测到各峰在不同模式下的分子离子峰，确定可能分子量。为进一步验证这些色谱峰对应化合物的结构，在相同的条件下做了质谱的子离子扫描（Product ion），以获取峰对应化合物的结构信息。

山茱萸提取物的总离子流色谱图中，正、负离子模式下的质谱响应均较好。在正离子检测模式下，山茱萸生品中检测出了莫诺苷、马钱苷、山茱萸裂苷，制品中检测出了

5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷和山茱萸裂苷；在负离子检测模式下，山茱萸生、制品中均检测出了没食子酸、7-O-没食子酰基景天庚酮糖、莫诺苷和山茱萸裂苷。 总离子色谱图见图1~4。

3.2 山茱萸化学成分的分析

样品同时采用紫外检测，得到液相色谱图。色谱峰通过与标准品的保留时间和紫外光谱比对，再结合质谱扫描的分子量，根据此3点，综合前期研究成果[3-8]，我们推测1、2、3、4、5、6号峰依次为没食子酸、7-O-没食子酰基-景天庚酮糖、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷和山茱萸裂苷。质谱数据见表1和表2，质谱图见图5和图6。

4小 结

本实验初步用HPLC-ESI-MS方法分析了山茱萸生品和制品，并指认出了6个化合物，为进一步深入研究打下基础。

山茱萸生品中无5-羟甲基糠醛，而制品中有，再次验证了山茱萸经蒸制以后产生了新化合物――5-羟甲基糠醛。

参考文献

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