吴忠市PCR实验室首次确诊手足口病疫情爆发

【摘要】目的 加强实验室检测，快速确诊手足口病疫情暴发的肠道病毒类型，及时对疫情控制提供科学依据。方法 现场采集20份手足口病患者的粪便标本, 用EV肠道通用型、CoxA16及EV71型RNA的特异性核酸扩增序列进行逆转录聚合酶链反应(Real Time-PCR) 扩增并鉴定,选择19例CoxA16检测结果阳性的标本进行病毒分离。结果 通过Real Time-PCR特异性检测,实验室确诊CoxA16阳性19例，EV71阳性结果0例。 结论 1 此次宁夏吴忠市某村暴发的手足口病疫情，确诊是肠道病毒CoxA16引起，实验室检测及时，结果准确，为暴发疫情控制提供了科学的依据；2 在吴忠市疾控中心实验室具备手足口病检测能力，首次能够在宁夏基层实验室快速准确的对手足口病疫情做出确诊报告。

【关键词】手足口病 暴发 CoxA16型 首次

中图分类号：R725.1文献标识码：B文章编号：1005-0515（2011）12-397-02

手足口病是由肠道病毒引起的传染病，多发生于婴幼儿，可引起手、足、口腔等部位的疱疹，个别患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜炎等病发症该病一般有肠道病毒（EV）71型和（Cox）A4、A5、A8、A10、A16、B3 等病毒引起，其中以EV71和CoxA16型为主[1]。在临床上EV71和CoxA16感染所引起的手足口病难以区别，但由于EV71还能够引起多种与神经系统相关的疾病[2]，因此手足口病更加受到人们的关注和重视。目前手足口病还没有疫苗预防，也没有特效的抗病毒药物治疗方法。肠道病毒传染性强、隐性感染比例大、传播途径复杂、传播速度快，在短时间内可造成较大范围的流行，手足口病传播模式不利于疾病控制，疫情控制难度大。宁夏回族自治区是全国最小的省份，医药卫生事业相对比较落后，由于PCR实验室造价昂贵，在基层医疗卫生单位建设PCR实验室难度大，因此基于核酸检测的PCR检验技术受到了极大的限制，手足口病的检测技术未能普遍开展。2011年前，宁夏省只有自治区疾控中心具备手足口病的检测能力，由于各种原因导致还有部分手足口病暴发以及散发都无法明确病原体[3-4]。因此加强实验室建设，提高实验室检验技术，快速确诊手足口病疫情暴发的肠道病毒类型，及时对疫情控制提供科学依据，就显得尤为重要。2009年，吴忠市疾控中心建立PCR实验室，2011年5月经宁夏自治区疾控中心专家的考核验收在该实验室开展手足口病核酸检测，提高了实验室的检测能力。此次宁夏吴忠市某村暴发的手足口病疫情，是宁夏首次在基层疾控中心实验室确诊，由肠道病毒CoxA16引起，实验室检测及时，结果准确，为暴发疫情控制提供了科学的依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源

2011年5月，宁夏吴忠市某中心小学，发现多名儿童出现不同程度的发热，伴手、足、口等部位出现疱疹到医院就诊，被医生临床诊断为手足口病。当地的疾控中心工作人员对20例患者粪便进行采样，送宁夏吴忠市疾控中心检验科进行手足口病核酸检测，以进一步对疫情做出准确的判断和正确的实施防控措施。20例患者男性13人，女性7人；年龄最小的1岁，最大的7岁，平均年龄2.8岁，其中

1.2 病毒RNA提取

宁夏吴忠市疾控中心检验科，采用TIANGEN BIOTECH(BEIJING)CO.LTD TIANamp RNA Kit for Virus detection 病毒检测用RNA提取试剂盒（离心柱型）,批号J8315，进行RNA提取。本次试验配置20%便悬液，经4000转/分钟离心20分钟，吸取上清液140ul进行肠道病毒核酸RNA提取。

1.3 EV71和CoxA16的逆转录

吴忠市疾控中心检验科手足口病荧光定量PCR反应体系，采用江苏硕世生物科技有限公司生产的手足口病毒RNA荧光PCR检测试剂盒，货号JC20302，批号20110202。采用一步法RT-PCR技术，检测样品中是否有肠道通用型、CoxA16及EV71型病毒感染。反应在Applied BiosystemsStepOne TMReal-Time PCR System荧光定量PCR仪上进行，其中CoxA16/EV71采用双通道Real-Time PCR反应，荧光检测模式为EV-U检测通道Fam， CoxA16检测通道Fam，EV71检测通道Vic。实现了利用双通道双重荧光PCR反应体系，实现一次性处理样本即可检出肠道病毒EV71和CoxA16病原体的目的

1.4 病毒分离与鉴定

所有阳性样本全部送宁夏疾病预防控制中心病毒科进行病毒分离。

2 结果

2.1 对20份手足口病患者的粪便标本进行EV71和CoxA16的特异性Real-time PCR检测，检测到可以导致人手足口病的肠道病毒CoxA16的特异性核酸，CoxA16阳性结果为19例；没有检测到可以导致人手足口病的肠道病毒EV71的特异性核酸，EV71阳性结果为0例；送检样本阳性率95%。

2.2 19例CoxA16阳性样本全部送宁夏自治区疾控中心病毒科进行病毒分离与培养，结果全部标本中分离到可以导致人手足口病CoxA16的肠道病毒。

3 结论

3.1 此次宁夏吴忠市某村暴发的手足口病疫情，经过实验室的确诊是肠道病毒CoxA16引起，实验室检测及时，结果准确，为暴发疫情控制提供了科学的依据。此次疫情属于传染病突发公共卫生事件，按照传染病突发公共卫生事件进行处置，这是2011年，宁夏首次发生的手足口病传染病突发公共卫生事件。

3.2 在吴忠市疾控中心实验室具备手足口病检测能力，首次能够在宁夏基层实验室快速准确的对手足口病疫情做出确诊报告。在2011年5月以前，本辖区采集到的手足口病样本都是运送到宁夏自治区疾控中心实验室完成样本的核酸检测，病毒分离，对患者个人或者是疫情做出分析判断。2011年5月，经上级部门考核验收，手足口病核酸检测工作在宁夏吴忠市疾控中心实验室正式开展。本次突发手足口病事件，及时检验了吴忠市疾控中心手足口病检测技术的能力，及时准确的完成了实验室确诊工作，为暴发疫情控制提供了科学的依据；为了解宁夏手足口病病原谱的构成变化，及时发现和处置手足口病暴发疫情，提高手足口病疫情现场调查处置能力，都提供了可靠的资料。

近年来，手足口病已经成为严重危害儿童生命健康的重要疾病之一。其致病因子主要是EV71和CoxA16尤其以EV71危害严重，严重者甚至可以引起死亡。由于肠道病毒的变迁和毒力的变化，加强实验室检测，提高手足口病实验室检测水平，提高病例的实验室诊断，是很重要的一项工作。了解了手足口病的发生类型，可以充分发挥大众新闻媒体宣传作用，提高居民对手足口病CoxA16型的知晓水平，减少恐慌，维护社会稳。肠道病毒适合在湿、热的环境下生存与传播，宁夏的手足口病高峰期集中在每年的5-7月份，尤其在此期间，要加大手足口病防治知识的宣传，控制手足口病暴发和降低病死率，保护人民群众的健康。

参考文献

[1]Chang L Y ,Huang L M ,GauSS,et al.Neurdevelopment and cognition in children after enterovirus 71 infection[J].N Engl JMed,2007 ,356(12):1226-1234.

[2]Chen S P .Huang Y C,Li W C, et parison of clinical features between coxsackievirus A2 and enterovirus 71 during the enterovirus outbreak in Taiwan,2008：a children,s hospital experience[J].N Engl JMed,2007 ,356(12):1226-1234.

[3]刘士俊，栾玉明，赵丽庆，等.一起幼儿园手足口病暴发的调查分析[J].职业与健康，2008，24（7）：675-676.

[4]于雪静，闫静，王皓.93例手足口流行病学调查与临床分析[J].中国热带医学，2007，7（3）：367.