电针“三阴穴”对慢性非细菌性前列腺炎大鼠免疫功能的影响

摘要：目的 观察电针“三阴穴”对慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型免疫功能的影响，并探讨其作用机制。方法 将48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、药物组、电针组。皮内注射同种异体雄性SD大鼠前列腺蛋白提纯液，辅以双重免疫佐剂复制自身免疫性慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型。造模后电针组、药物组分别给予电针“三阴穴”、舍尼通灌胃治疗15 d。观察各组动物前列腺组织湿重及指数、形态结构，用放免法检测前列腺组织中抗体IgG含量，局部组织细胞因子白细胞介素（IL）-2、IL-8的变化。结果 造模后模型组前列腺组织湿重及指数与空白组比较显著增高（P

关键词：慢性非细菌性前列腺炎；电针；“三阴穴”；免疫球蛋白；白细胞介素-2；白细胞介素-8

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.09.015

中图分类号：R245 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）09-0044-03

慢性非细菌性前列腺炎（CAP）是临床男科的常见病、多发病，好发于20～40岁的青壮年，患病率达2.2%～9.7%[1]。CAP的病因目前尚不明确，关于发病机制的假说众多，其中自身免疫反应因素在其发病机制中的作用日益受到重视。近年来，国内报道显示针灸治疗CAP具有明显的优势[2]。本课题组在临床中总结出的“三阴穴”治疗本病具有特殊疗效，总有效率达85%[3]。本研究进一步通过动物实验探讨其作用机理，为临床应用提供依据。

1 实验材料

1.1 动物

雄性SD大鼠（SPF级）48只，3月龄，体质量（240±20）g，另取20只体质量为240～300 g的SD大鼠，用于取前列腺组织匀浆制作前列腺蛋白。均甘肃中医学院动物实验中心提供，合格证号：SCXK（甘）2004-0006。动物饲养在甘肃中医学院SPF级动物实验室，设施使用合格证号：SYXK（甘）2004-0006。

1.2 主要药物与试剂

福氏完全佐剂（美国Sigma公司提供，批号F-5506）；蛋白定量测试盒（双缩脲法），南京建成生物制品研究所提供，批号20070125；舍尼通（普适泰），南京美瑞制药有限公司，批号H20000486；白百破疫苗，甘肃省卫生防疫站；白细胞介素（IL）-2放免试剂盒，中国人民总医院安宁分院核检验科提供，批号S20063090；IL-8放免试剂盒，中国人民总医院安宁分院核检验科提供，批号S20063089；IgG放免试剂盒，中国原子能科学研究所提供，批号S10940082。

1.3 主要仪器

Biofuge Fresco低温高速离心机，德国贺力氏（Heraeus）公司；Uv-2401 PC型紫外分光光度计，日本岛津（SHIMADZU）公司；MDF-71超低温冰箱，日本三洋（SANYO）公司；G6805型电针治疗仪，上海医疗器械高技术公司；华佗牌针灸针（0.32×15 mm），苏州医疗用品厂有限公司。

2 实验方法

2.1 分组

48只动物依体质量编号，按随机数字表法依次分为空白组、模型组、药物组、电针组，每组12只。

2.2 造模

CAP大鼠模型复制步骤参照文献[4]。①大鼠前列腺蛋白提纯液的制作：取240～300 g雄性大鼠10只，脱颈椎处死，在无菌条件下剥取前列腺组织，用冷生理盐水洗净，加入含0.5%Triton100的生理盐水溶液，在冰水浴上用玻璃匀浆器制成匀浆，10 000×g离心30 min，取上清液，用721分光光度计，以牛血清白蛋白溶液为标准蛋白溶液，采用双缩脲法进行蛋白含量测定，最后用0.1 mol/L、pH 7.2的PBS缓冲液稀释为15 mg/mL。②免疫注射：除空白组外，其他各组大鼠以乙醚麻醉，腹腔注射白百破疫苗0.5 mL，多点皮内注射大鼠前列腺蛋白提纯液和福氏完全佐剂（比例为1∶1的混悬液）1.0 mL，空白组分别行腹腔及皮内多点注射生理盐水注射液0.5、1.0 mL，各组均分别于第0、30日2次注射。

2.3 取穴

主要参照《实验针灸学》[5]中的大鼠腧穴定位法，并结合拟人法进行穴位定位[6]。夹阴1：平耻骨联合上缘，位于左侧腹股沟处；夹阴2：平耻骨联合上缘，位于右侧腹股沟处；重阴：在会阴穴与阴囊根部之间取穴。

2.4 处理方法

造模完成后第1日开始，电针组给予电针“三阴穴”处理。大鼠以仰卧位捆绑于鼠板上，以棉签蘸碘伏擦拭“三阴穴”，消毒局部皮肤，“夹阴1”、“夹阴2”，进针1 cm；“重阴”进针1.5 cm。接通电针仪，统一刺激标准为：“重阴”（左正，右正），“夹阴1”（左负），“夹阴2”（右负），疏密波，频率10 Hz，强度以针柄或肌肉微颤，动物保持安静为度。留针20 min，每日1次，共15次。药物组大鼠予舍尼通片，研末，蒸馏水溶解，灌胃喂饲，给药剂量按动物体表面积比率换算等效剂量为13 mg/kg，给药体积为1 mL/100 g，每日1次，连续15 d。空白组和模型组同样抓取，但不予任何治疗。

2.5 标本采集及检测方法

在末次给药、针刺后，称量各组大鼠体质量，各组动物禁食禁水24 h，脱颈处死。取出前列腺组织，剥离被膜及周围脂肪组织，生理盐水涮洗，滤纸吸干，电子天平称重，计算各组大鼠前列腺指数[前列腺湿重（g）÷大鼠体质量（g）×100%]。将各组大鼠前列腺以中轴均分2份，右侧部分保存于4%多聚甲醛/0.1 mol/L PBS（pH 7.2）固定液中，室温下经水洗、梯度酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋等处理后，切片备用。HE染色制作病理切片，镜下观察前列腺局部病理变化。左半侧组织匀浆，将匀浆液以3000 r/min离心15 min，上清液分装3个试管，按照试剂盒说明书采用放免法检测IgG、IL-2、IL-8。

3 统计学方法

采用SPSS13.0统计软件进行分析。所有数据用―x±s表示，各组间比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t法。P

4 结果

4.1 一般状态观察

造模期间，空白组动物毛色光泽，食欲良好，活动自如，垫料干湿适中；造模动物逐渐显现食欲减少，毛色略显枯槁，自主活动减少，垫料明显偏湿，气味腥臊。治疗开始后药物组及电针组动物状态逐渐恢复。实验期间各组动物均无死亡。见表1。

4.2 电针“三阴穴”对前列腺湿重及指数的影响（见表2）

4.3 电针“三阴穴”对慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺组织学的影响

空白组：大鼠前列腺被膜、纵隔均正常，腺上皮为单层柱状上皮，位于基底部，腺泡腔内有少量淡红色分泌物，腺泡之间排列紧密。模型组：大鼠前列腺组织表现为血管扩张，腺上皮增生，可见立方、柱状、高柱状、假复层等表现，腺上皮细胞核染色深浅不一，胞浆嗜碱性，腺腔扩张，腔内有分泌物，间质疏松，有大量慢性炎症细胞浸润。药物组：可见部分腺上皮细胞增生，排列紊乱，腺腔增大，部分含有分泌颗粒和慢性炎症细胞，间质可散见有血管充血及纤维组织增生。电针组：腺上皮细胞增生改善，排列整齐， 间质水肿、充血及炎细胞浸润较模型组明显减轻，腺泡中央未见炎细胞充盈。

4.4 电针“三阴穴”对慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺组织匀浆中免疫球蛋白G、白细胞介素-2、白细胞介素-8的影响（见表3）

5 讨论

本实验结果表明，造模后前列腺组织以慢性炎症的病理变化为主，以上皮细胞和腺体的增生与间质部分的纤维化增生为主要特点，炎性细胞多以淋巴细胞和巨噬细胞的浸润为主；电针“三阴穴”可以改善血管的通透功能，影响组织的渗出、增生、变质过程，使前列腺湿重及系数下降，从而改善前列腺组织的病理变化。

IgG是血清中含量最高的抗体，为机体抗感染的主要抗体，当机体罹患某些疾病或机体内外环境发生了某些特定的变化，可以导致前列腺局部抗原（PSA）的暴露，刺激血液、组织中的淋巴细胞通过释放细胞因子而调节抗体的生成，发挥免疫调理及抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（ADCC），也可通过经典途径活化补体。本实验结果显示，模型组IgG含量明显高于空白组（P

IL-2主要由活化T淋巴细胞产生。CAP患者前列腺液中含有较高水平IL-2，CAP的发病与IL-2介导参与的细胞免疫有一定的相关性。IL-8是一种强效相对低分子质量炎症趋化因子。造模后，大鼠前列腺组织匀浆中IL-2、IL-8的含量明显高于空白组（P

综上所述，电针“三阴穴”可明显改善自身免疫性CAP大鼠前列腺组织的炎症状态及病理损伤，降低前列腺局部IgG水平，降低相关细胞因子IL-2、IL-8的表达。即电针“三阴穴”通过调节CAP大鼠的免疫功能，改善炎症对前列腺组织的病理损伤，起到防治前列腺炎的作用。

参考文献：

[1]Krieger JN， Lee SW， Jeon J， et al. Epidemiology of prostatitis[J]. International Journal of Antimicrobial Agents， 2008，31（Suppl.1）：S85-S90.

[2]严兴科，崔海福，陈程，等.针灸治疗慢性前列腺炎临床随机对照文献的Meta分析[J].时珍国医国药，2012，23（10）：2592-2593.

[3]何天有，赵耀东，雒成林.针刺三阴穴治疗慢性前列腺炎临床观察[J].中国针灸，2004，24（10）：697-698.

[4]叶伟成，薛慈民，徐兆东，等.免疫佐剂法制作慢性非细菌性前列腺炎小鼠模型的方法[J].中国男科学杂志，2001，l5（1）：29-32.

[5]林文注.实验针灸学[M].上海：上海科学技术出版社，1994：287.

[6]何天有，韩林，李海.针刺“三阴穴”对慢性非细菌性前列腺炎大鼠局部免疫功能的影响[J].甘肃中医学院学报，2007，24（5）：9-11.