汉黄芩素对胶质瘤U251细胞Survivin mRNA及Caspase—3 mRNA表达的影响研究

的 探讨汉黄芩素对胶质瘤u251细胞survivin mrna及caspase-3 mrna表达的影响。 方法 192株人胶质瘤u251细胞株分别用汉黄芩素（96株）、替莫唑胺（tmz）（48株）处理，留取48株作为空白对照组，半定量rt-pcr法检测survivin mrna与caspase-3 mrna表达强度，并在3组之间进行对比分析。 结果 空白对照组survivin mrna表达强度为（0.773±0.176） μm，显著高于汉黄芩素组的（0.382±0.087） μm及tmz组的（0.408±0.092） μm （p < 0.05）；caspase-3 mrna表达强度为（0.097±0.043） μm，显著低于汉黄芩素组的（0.454±0.213） μm及tmz组的（0.432±0.187） μm（p < 0.05），汉黄芩组与tmz组之间比较差异无统计学意义（p > 0.05）。 结论 汉黄芩素可通过下调survivin mrna的表达并上调caspase-3 mrna的表达起到有效诱导人胶质瘤u251细胞凋亡的作用。

[关键词] 汉黄芩素；胶质瘤；u251；survivin mrna；caspase-3 mrna

[中图分类号] r-33 [文献标识码] a [文章编号] 1674-4721（2013）05（c）-0007-02

关于胶质瘤的治疗，目前多采用手术切除及放化疗等综合治疗方法，但因该肿瘤呈浸润性生长，与周围正常组织分解不清，手术切除困难较大，另外因其特殊的生物学特性，对放化疗均不甚敏感，故疗效较差，预后不良，患者病死率较高[1-2]。近年来，随着中医药的发展，传统中草药在抗肿瘤方面的作用逐渐引起关注[3]。笔者采用提取自黄芩的汉黄芩素培养胶质瘤u251细胞，以探讨其对该细胞内survivin mrna及caspase-3 mrna表达的影响，现将结果报道如下：

1 材料与方法

1.1 实验材料

人胶质瘤u251细胞192株均供自中科院上海细胞库，rpmi 1640培养基、新生牛血清（fbs）、pbs缓冲液（1×）、胰酶-edta混合液均购自gibco brl公司，青链霉素混合液（100×）由北京索莱宝科技有限公司生产，β-actin小鼠单克隆抗体购自abcam公司，cck8试剂盒、survivin兔多克隆抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供，pvdf膜购自millipore公司，bca蛋白测定试剂盒由美国pierce公司提供，汉黄芩素（批号：111514-200403）由中国食品药品检定研究院提供，替莫唑胺胶囊（tmz）购自江苏天士力帝益药业有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及药物处理 复苏人胶质瘤u251细胞并接种于含10%新生胎牛血清和1%链霉素与青霉素1∶10混合的rpmi1640完全培养基中，于5%co2、37℃、湿度饱和条件下传代孵育，以0.25%胰蛋白酶消化，至细胞贴壁覆盖80%～90%时开始实验。汉黄芩素及tmz均用dmso溶解为浓度100 mm的母液，置4℃恒温箱备用，用前稀释。u251细胞株分组：汉黄芩素组96株，tmz组48株，空白对照组48株。

1.2.2 survivin mrna与caspase-3 mrna检测 本研究采用半定量rt-pcr法对survivin mrna与caspase-3 mrna进行检测。

1.3 统计学方法

采用spss 13.0统计分析软件对实验数据进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，均数资料比较采用t检验，以p < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

经上述细胞培养、药物处理、半定量rt-pcr法检测及统计分析，空白对照组survivin mrna表达强度显著高于汉黄芩素组及tmz组（p < 0.05），而caspase-3 mrna表达强度则显著低于汉黄芩素组及tmz组（p < 0.05），但survivin mrna及caspase-3 mrna表达强度在汉黄芩组与tmz组之间比较差异无统计学意义（p > 0.05）。详见图1、表1。

3 讨论

人胶质瘤u251细胞株是研究胶质瘤的常用细胞株[4]。通常细胞凋亡或细胞程序性死亡是一个正常的生理过程，维护着组织的动态平衡，该平衡可调节肿瘤生长，故可通过诱导细胞凋亡或程序性死亡的方法对胶质瘤进行治疗[5-6]。survivin具有肿瘤特异性，在多种癌细胞中成过度表达，导致不良预后及低存活率[7]。survivin可通过干扰着丝粒中心蛋白、aurora b酶、细胞凋亡蛋白酶等多种细胞周期相关蛋白来影响细胞凋亡[8-9]。caspase是存在于角质溶胶中的结构上相关的半胱氨酸蛋白酶[10]，在细胞凋亡中起着不可替代的作用。caspase-3只在细胞凋亡早期被激活，激活后可促进多种细胞分化，对胞浆胞核底物进行裂解，最终导致细胞凋亡[11-12]。

汉黄芩素属于中药黄芩的提取物，黄芩为唇形科植物，其干燥根药性苦寒，归属肺、脾、胆、大肠、小肠经

，具有泻火解毒、燥湿清热及止血安胎等功效。黄芩中黄芩素、汉黄芩素及黄芩苷、汉黄芩苷等有效成分含量较高，而汉黄芩素所具有的抗肿瘤活性引起了学术界的广泛关注。目前关于该物质抗胶质瘤的机制并不十分清楚，其细胞毒作用能够对肿瘤细胞的增殖起到一定抑制作用，且该作用随着药物浓度及作用时间的增加而增强；另外可通过影响细胞形态、下调bax/bcl-2、阻遏细胞周期、抑制端粒酶活性、上调活性氧水平等促进或诱导肿瘤细胞的凋亡；还能够抑制肿瘤细胞的黏附、迁移及临近器官组织的侵袭，从而起到抗肿瘤作用[13-14]。目前关于汉黄芩素作用于survivin及caspase-3从而抑制胶质瘤细胞生长、促进胶质瘤细胞凋亡的研究报道较少，笔者采用汉黄芩素、tmz对胶质瘤u251细胞株进行培养，并对比其对survivin mrna及caspase-3 mrna表达的影响，结果显示，空白对照组survivin mrna表达强度显著高于汉黄芩素组及tmz组（p < 0.05），caspase-3 mrna表达强度则显著低于汉黄芩素组及tmz组（p < 0.05），汉黄芩组与tmz组之间比较差异无统计学意义（p > 0.05）。该结果说明，汉黄芩素能够下调survivin mrna表达并上调caspase-3 mrna表达，从而影响survivin和caspase-3的表达，进而通过减少survivin的表达抑制肿瘤增殖，相反通过提高caspase-3的表达促进肿瘤细胞的凋亡，最终起到诱导u251细胞凋亡的作用[15]。 所述，笔者认为汉黄芩素作用于人胶质瘤u251细胞株可通过下调survivin mrna的表达并上调caspase-3 mrna的表达起到有效诱导细胞凋亡的作用。

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