乌腺金丝桃叶斑病生物学特性研究

摘要:为探讨乌腺金丝桃Hypericumattenuatum叶斑病发生规律进行病原菌Alternariasp．生物学特性研究。结果表明:适宜病原菌菌丝生长的碳源为葡萄糖和蔗糖，氮源为硝酸钾;适宜孢子萌发的碳源为麦芽糖，氮源为硝酸钙;菌丝和孢子萌发的适宜温度为20～25℃;pH7中性以及光照条件下更利于孢子萌发及菌丝的生长。

关键词:乌腺金丝桃;叶斑病;生物学特性

中图分类号:S763.15 文献标志码:A 文章编号:1671－0886(2016)01－0001－03

乌腺金丝桃Hypericumattenuatum是多年生木本植物，是重要的夏季观花树种，具有一定的药用价值。分布于我国东北、华北、华东、中南;朝鲜、日本、蒙古、俄罗斯远东地区也有分布。2013年在吉林农业科技学院中药材种植基地发现乌腺金丝桃链格孢菌叶斑病，经查为吉林省发生的新病害。乌腺金丝桃链格孢菌叶斑病主要危害叶片［1］，初期病斑表现为点状斑，浅红褐色，约2周扩展为圆形或近椭圆形病斑，病斑中间颜色浅为暗红色，边缘颜色略深为砖红色，病斑比较明显，类似眼状斑。典型病斑1～3mm，为近圆形，多分散发生于叶面，严重时病斑布满整个叶片，但不聚合，可以造成落叶等，病原为链格孢属真菌Alternariasp．。

1材料与方法

1.1供试材料

乌腺金丝桃链格孢菌叶斑病病原菌由吉林农业科技学院植物病理实验室提供;试验仪器包括恒温培养箱、无菌操作台、高压灭菌锅等。试剂:碳源有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖;氮源有硝酸钙、硝酸铵、氯化铵、尿素、硝酸钾。以上试剂均为化学分析纯，由植物病理实验室提供。助剂有0.1%NaOH溶液、0.1%HCl溶液、75%酒精等。

1.2试验方法

在无菌条件下将乌腺金丝桃链格孢菌叶斑病病原菌接种在PDA培养基上，恒温25℃暗培养，取纯化的菌丝及孢子待用。1.2.1不同碳源与氮源对病原菌菌丝生长和孢子萌发的影响1.2.1.1不同碳源与氮源对菌丝生长的影响［2－6］碳源:分别以含碳量相等的葡萄糖、麦芽糖、乳糖、果糖和蔗糖做基础成分取代PDA培养基中的葡萄糖来配制培养基并分别标记好。用无菌打孔器打取6mm直径的菌饼接种后置于25℃恒温箱内暗培养。每种处理4个重复。每24h观察1次，4d结束。用十字交叉法定期测量菌落直径并记录。氮源:分别以含氮量相等的硝酸铵、硝酸钙、氯化铵、尿素、硝酸钾添加到查氏培养基(磷酸氢二钾1g、硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、蔗糖30g、琼脂20g和蒸馏水1L)为基础培养基的平板上置换氮源并标记好，其它方法同上。1.2.1.2不同碳源与氮源对孢子萌发的影响［7－10］经过预备试验后进行如下操作。当菌种在培养基内长到产孢时期做不同碳源与氮源对孢子萌发的影响试验。碳源:分别用含碳量相同的葡萄糖、麦芽糖、乳糖、果糖、蔗糖溶液作为碳源的液体培养基，将等量孢子悬浮液分别放入其中，25℃恒温暗培养。共5个处理，4个重复。每4h观察1次，连续观察，记录并统计孢子萌发率，当有1个处理孢子萌发率接近或达到90%时结束。氮源:以葡萄糖为基础培养基，用含氮量相同的硝酸铵、硝酸钙、氯化铵、尿素、硝酸钾溶液作为氮源加入制成液体培养基，将等量孢子悬浮液放入其中，25℃恒温暗培养。共5个处理，4个重复。观察统计方法同碳源。1.2.2不同温度对病原菌菌丝及孢子的影响用高温灭菌的打孔器打取直径6mm的菌饼接种至PDA培养基并分别置于5，10，15，20，25，30，35℃的恒温箱中培养。共7个处理，重复3次。4d后用十字交叉法测量菌落直径并记录。以葡糖糖(0.3%～0.5%)制成液体培养基，将带有菌丝的孢子接入后分别放入5，10，15，20，25，30，35℃的恒温箱内培养。共7个处理，重复3次。每4h观察1次，连续观察，记录并统计孢子萌发率。1.2.3不同酸碱度(pH)对病原菌菌丝及孢子的影响先用盐酸和氢氧化钠调制成pH值为3，5，7，9，11，13的溶液，分别倒入PDA培养基中，然后再倒入各个培养皿中并标记好，接入用打孔器打取直径6mm的菌饼。每组3次重复。4d后用十字交叉法测量不同pH值下的菌落直径并记录。用盐酸、氢氧化钠和无菌水配制出pH值为3，5，7，9，11，13的液体培养基，将带有菌丝的孢子分别挑入液体培养基中放入25℃恒温箱中培养。共6个处理，重复3次。每4h观察1次，连续观察。1.2.4不同光照对病原菌菌丝及孢子的影响用无菌打孔器打取6mm直径的菌饼接种至PDA培养基上，分别置于全光照、全黑暗、光暗交替的恒温箱内，25℃培养。4d后用十字交叉法测量菌落直径并记录。以葡萄糖溶液制成液体培养基，将孢子悬浮液接入后分别放在全光照、全黑暗、光暗交替的恒温箱内，25℃培养。共3个处理，重复3次。每4h观察1次，记录并统计孢子萌发率。温度、pH值、光照对菌丝和孢子的影响试验，当有1个处理孢子萌发率不再增加或稳定时结束。1.2.5数据处理全部试验使用DPSv7.05软件，采用新复极差法进行统计分析。

2结果与分析

2.1不同碳、氮源对菌丝生长和孢子萌发的影响

2.1.1对菌丝生长的影响不同碳源处理，葡萄糖、蔗糖处理之间无差异，葡萄糖、蔗糖与乳糖、麦芽糖、果糖处理之间差异极显著，说明，葡萄糖和蔗糖为更适合菌丝生长的碳源;不同氮源处理，硝酸钾与硝酸铵、硝酸钙处理之间差异显著，但未达到极显著，硝酸钾与氯化铵、尿素处理之间差异极显著，说明最适合菌丝生长的氮源是硝酸钾(表1)。2.1.2对孢子萌发的影响不同碳源处理，麦芽糖与乳糖处理间差异显著，但未达到极显著，麦芽糖与葡萄糖、蔗糖、果糖处理间差异极显著，说明更适合孢子萌发的碳源是麦芽糖;不同氮源处理，硝酸钙与硝酸钾、尿素、硝酸铵、氯化铵处理间差异极显著(表2)，说明最适合孢子萌发的氮源是硝酸钙。

2.2不同温度对菌丝及孢子的影响

对孢子萌发的影响，20℃与25℃处理无差异，25℃与30℃处理差异显著，20℃与30℃处理无差异，20，25，30℃与其它处理差异极显著，由此可见，最适孢子萌发的温度为20～25℃。对菌丝生长的影响，20℃与25℃处理间差异显著，但未达到极显著水平;20℃，25℃与其它处理间差异极显著;说明20～25℃条件适宜菌丝的生长(表3)。2.2.3不同酸碱度(pH)对菌丝及孢子的影响不同酸碱度对菌丝生长的影响，pH7与pH5处理间差异不显著，但pH7菌落直径大于pH5，更适合菌丝生长;不同酸碱度对孢子萌发的影响，pH7处理与其它处理间差异极显著，说明pH7中性条件下更适合孢子的萌发(表4)。2.2.4不同光照对菌丝及孢子的影响全光照与光暗交替处理对菌丝生长、孢子萌发的影响无差异;全光照与全黑暗处理差异极显著;光暗交替与全黑暗处理差异显著(表5)。所以有光条件适宜菌丝及孢子萌发。

3小结

研究不同碳、氮源对乌腺金丝桃叶斑病病原菌生长的影响，结果表明:适宜病原菌菌丝生长的碳源为葡萄糖和蔗糖，氮源为硝酸钾;适宜孢子萌发的碳源为麦芽糖，氮源为硝酸钙;适宜孢子萌发和菌丝生长的温度为20～25℃;光照以及pH7中性条件下更适合孢子的萌发和菌丝的生长。本试验研究了乌腺金丝桃叶斑病病原菌的生物学特性;对于该病原菌的DNA序列及其是否能够侵染其它木本植物，以及与当地的其它链格孢属真菌间的相互关系，还需要进一步研究。

参考文献:

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作者：范文忠 陈妍 张克勤 单位：吉林农业科技学院 长白山动植物资源利用与保护吉林省高校重点实验室 江苏龙灯化学有限公司