红颜草莓茎尖组培快繁技术研究

摘要 以红颜草莓为试材，对草莓匍匐茎茎尖进行组培脱毒壮苗快繁技术与应用研究。结果表明：适宜红颜草莓诱导分化增殖培养基配方以 MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L最好；继代增殖培养基配方以MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L较适宜；诱导生根培养基配方以1/2MS+IBA 1.0 mg/L或1/2MS+NAA 0.1 mg/L较理想，最佳移栽基质为营养土∶珍珠岩∶蛭石=1∶1∶1，移植成活率可达95%以上。

关键词 草莓；茎尖；组织培养；快繁

中图分类号 S668.4 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）07-0071-01

草莓是蔷薇科，草莓属，多年生草本植物，属于当今世界七大水果之一，在我国栽培面积仅次于葡萄。草莓品种过去主要用传统匍匐茎分株繁殖，繁殖速度慢，亲本的优良性状无法保持，植株容易积累多种疾病，导致种苗退化，草莓品质下降[1-2]。采用草莓组培脱毒进行无性繁殖，可以大量生产优质的无毒苗，提高草莓的品质。因此，组织培养作为植物优良品种大量繁殖的最有效方式。

1 材料与方法

1.1 供试材料

供试草莓品种为红颜，选取生长健壮、无病的植株，在新长的匍匐茎顶端剪去5 cm左右作试验材料。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体处理。采集健壮的草莓匍匐茎尖，将匍匐茎用水冲洗茎尖，再把茎尖放入3%双氧水消毒瓶中消毒10 min，倒出双氧水，再用无菌水冲洗3遍，然后转放到超净工作台上进行灭菌处理。具体灭菌流程：先用75%酒精消毒10 s，倒出酒精，用o菌水冲洗3次，然后加入0.1%升汞消毒8 min，最后用无菌水冲洗4～5次。在显微镜下用解剖刀剥去幼叶，切取0.5～1.0 mm的茎尖接种到培养基上。培养室温度为22～26 ℃，光照强度为1 500～2 000 lx，光照12 h/d[3]。

1.2.2 培养基选择。试验以MS为基本培养基，其中附加奈乙酸（NAA）、6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）。葡萄糖30 g/L，琼脂6 g/L。诱导培养基：MS培养基+6-BA（0.2、0.5、1.0 mg/L）+NAA（0.1、0.2、0.3 mg/L）；继代培养基：MS培养基+6-BA（0.5、1.0、1.5 mg/L）+IAA（0.1、0.3、0.5 mg/L）；生根培养基：MS培养基+IBA（0.5、1.0、1.5 mg/L）或NAA（0.5、1.0、1.5 mg/L）。培养基pH值为5.8。使用前需要高压灭菌，在101.325 kPa下，高压灭菌20 min。

2 结果与分析

2.1 不同激素水平对草莓诱导的影响

外植体经过2周左右的培养后，可慢慢分化出丛生芽。由表1可知，4号和5号培养基的萌发数最高，4号培养基的褐化数最少。随着NAA的比例增大，褐化数也逐渐增多，6-BA和NAA有一定的比例，才能促使芽增长。因此，最佳诱导培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L。

2.2 不同激素水平对草莓继代培养的影响

经过初代培养后产生小芽丛苗，在超净工作台上用镊子、剪刀、培养皿，分隔成3～4株在一起的小芽丛，再将诱导分化出的丛生芽接种于不同激素配比的继代增殖培养基中进行培养，每瓶3～4株芽丛。由表2可知，当IAA浓度为0.1 mg/L时，增殖芽数最多，且随IAA浓度的增加增殖芽数减少，增殖芽数最多的是4号培养基。因此，草莓最佳继代培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L[4-5]。

2.3 不同草莓组培苗生根培养基对草莓生根的影响

将生长良好的无根草莓苗接种于生根培养基30 d后，由表3可知，培养基中加入一定比例的生长激素可以促进生根。当1/2MS培养基上添加IBA和NAA可以增加平均根数，当IBA浓度为1.0 mg/L时，生根率为90%，平均根长为5 cm；当NAA浓度为0.1 mg/L时，生根率为95%，平均根长为6 cm。因此，草莓最佳生根培养基为1/2MS+IBA 1.0 mg/L或1/2MS+NAA 0.1 mg/L。

2.4 试管苗的移栽

当试管苗长有5～6条根时，可慢慢开瓶炼苗，使试管苗逐渐适应移栽环境。经过1周左右的时间炼苗，从瓶中取出试管苗，冲洗掉琼脂，用多菌灵浸泡后移栽到营养土∶蛭石∶珍珠岩=1∶1∶1的基质中，并且盖上塑料薄膜来维持湿度。每周可喷洒营养液1次[6]。移栽结束后，幼苗所生长的环境需要保持高湿度，湿度应在85%～95%之间，且移植后的环境温度应稍高于移植前幼苗生长的环境温度。白天可控制在25～26 ℃，夜间不低于14～18 ℃。

3 结论与讨论

该试验结果表明，红颜草莓诱导分化增殖最适宜培养基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L，继代增殖最适宜培养基是MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L，最佳生根培养基是1/2MS+IBA 1.0 mg/L或1/2MS+NAA 0.1 mg/L。营养土∶珍珠岩∶蛭石=1∶1∶1的基质适宜进行驯化炼苗[7-8]。本试验发现的不同激素种类和配比，直接影响红颜草莓生根的发生，能较好地诱导出愈伤组织，这将为红颜草莓的快速繁殖、规模化生产提供技术支持。

4 参考文献

[1] 张志宏，肖敏，杨洪一，等.草莓病毒病脱除方法的比较与评价[J].果树学报，2006，23（5）：720-723.

[2] 何欢乐，阳静，蔡润，等.草莓茎尖培养脱毒效果研究[J].北方园艺，2005（5）：79-81.

[3] 刘健，刘向蕾，胡繁荣，等.草莓热处理结合茎尖培养脱毒效果研究[J].浙江农业科学，2009（6）：1088-1090.

[4] 陈德海，潘文兰，杨涛，等.草莓组织培养细胞发育过程德电镜观察[J].厦门大学学报（自然科学版），1999，36（6）：918-920.

[5] 王常芸，李晓亮，王建玲，等.草莓脱毒技术与开发应用[J].山东农业科学，2007（4）：118-120.

[6] 胡淑明，张学英，李青云，等.草莓脱毒技术研究进展[J].河北果树，2007（4）：1-2.

[7] 张志恒，王强.草莓安全生产技术手册[M].北京：中国农业出版社，2008.

[8] 陈爱萍，叶祖云，缪雄平.草莓茎尖组织培养研究[J].中国南方果树，2002，31（2）：42-43.