峨参提取物对肺癌细胞A549和H460增殖的抑制作用初步观察

摘 要：目的：观察峨参石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇部位提取物对肺癌细胞A549和H460增殖的抑制作用。方法：应用MTT比色法检测不同部位、不同浓度峨参提取物对肺癌细胞A549和H460增殖的抑制作用。结果：10～1000μg/mL的4个部位峨参提取物对体外培养的人肺癌细胞A549和H460的增殖具有抑制作用，其中石油醚部位、氯仿部位和乙酸乙酯部位提取物抑制作用更明显。结论：峨参不同部位提取物对肺癌细胞增殖具有明显的抑制作用。

关键词：峨参提取物；肺癌细胞；细胞凋亡

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2012)01-0060-03

Tentative Study of Anthriscus Extracts Repressing the Proliferation of Lung Cancer Cell A549 and H460

TU Xianqin1，MA Chaoying1，XU Yinsheng1，GAO Yarong1，NIU Shunzi2，TANG Jing1，GENG Yun1，JIANG Hezhong1

(1.Southwest Jiaotong University,Chengdu 610031，Sichuan,China；

2.Shijiazhuang Pharmaceutical Group NBP Pharmaceutical Co., Ltd.,Shijiazhuang 100036，Hebei，China)

Abstract:Objective:To observe the inhibition of petroleum ether, chloroform, ethyl acetate and butanol extracts of Anthriscus sylvestris (L.)Hoffm on the proliferation of lung cancer cell A549 and H460.Methods:To detect the inhibition effects of different parts with different concentrations Anthriscus extracts on the proliferation of lung cancer cell A549 and H460 by MTT assay.Result:4 parts of Anthriscus sylvestris extracts have inhibition effect on the proliferation of lung cancer cell A549 and H460 when concentrations are from 10 to 1000μg/mL,moreover,the extracts of petroleum ether, chloroform and ethyl acetate parts have more obvious evident inhibition.Conclusion:The extracts of different parts of Anthriscus have evident inhibition effect on the proliferation of lung cancer cell.

Key words:extracts of Anthriscus;lung cancer cell;Apoptosis

峨参为伞形科植物峨参（Anthriscus sylvestris (L.)Hoffm）的根，是著名的川产道地药材之一，能补中益气，祛瘀消肿，补肺平喘[1]。目前，国内外对该药的研究主要在植物学和化学成分方面，近年来对其药理作用渐有研究，除了其抗炎、抗过敏、抗氧化、活血化瘀等作用外，近期有人从峨参根中提取出去氧鬼臼毒素（即峨参内酯），对人体子宫颈腺癌传代细胞系的作用表明具有显著促进细胞凋亡的作用[2]，但其对肺癌细胞的作用目前尚无文献报道，本文观察了峨参提取物对体外培养肺癌细胞A549和H460增殖的影响。

1实验材料

1.1 细胞 人肺癌细胞株A549和H460购自于四川大学华西国家重点实验室。

1.2 药品与试剂 RPMI-1640和胰蛋白酶均采用Gibco进口分装，MTT购自宝信生物有限公司。峨参饮片购自于四川省峨眉山市仙山中药饮片公司，经本院宋良科副教授鉴定为四川峨眉山产伞形科峨参属植物峨参的干燥块根。其余试剂均采用分析纯。

1.3 主要仪器 CO2恒温孵箱（3110型，美国Thermo公司）、细胞培养板、培养瓶（美国Coster公司）、酶标仪（Elx-800型，美国Bio-Tek公司）、离心机（L420型，长沙湘仪离心机有限公司）、倒置相差显微镜（日本索尼公司）、荧光显微镜（日本奥林巴斯公司）、超净工作台（BSW-880，江苏苏净集团有限公司）、闪式提取器（JHBE-50型，河南金鼎科技有限公司）、旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。

2实验方法

2.1峨参提取物的制备 将峨参切断，粉碎成细小颗粒，过20目筛，烘干，用8倍量80%乙醇浸泡24h，利用闪式提取器，分别间断提取共3min（15000r/min，1800w），抽滤，得到滤液，旋转蒸发仪回收溶剂，得到浸膏。再用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，分别得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇部位提取物，用旋转蒸发仪回收溶剂，得到各个部位浸膏，使用前用RPMI 1640调整至实验所需浓度，DMSO（浓度

2.2细胞株培养将肺癌细胞A549和H460接种于含10%新生牛血清的RPMI 1640培养基的培养瓶中，37℃、5%CO2、饱和湿度条件下常规培养，每2天换液传代培养，取对数生长期细胞用于实验。

2.3峨参提取物对肺癌细胞A549、H460增殖抑制作用的检测取对数生长期细胞接种于24孔培养板内，每孔2×104个细胞/mL。细胞贴壁后加入峨参的4个部位提取物，共设4个药物浓度梯度，分别为0.1%DMSO、10、100和1000μg/mL，每个浓度3个复孔，每孔体积500μL，培养48h后，每孔加入1mg/mL MTT工作液500μL，37℃放置4h，弃上清，每孔加入500μL 0.4%酸化异丙醇，220r/min摇床震荡5min溶解结晶，充分震荡后，吸取200μL至96孔酶标板于全自动酶标仪检测570nm波长处的各孔吸光度(OD值)，0.1%DMSO作为阴性对照，根据0.1%DMSO值绘制曲线，比较不同部位提取物在不同浓度下对2个细胞株的增殖影响。

细胞增殖抑制率(%)=（1-药物组平均OD值/对照组平均OD值）×100%

2.4统计学分析采用SPSS 17.0软件进行数据分析，各组数据以（±s）表示，实验组及对照组比较用单因素方差分析。

3结 果

3．1峨参各部位提取物对肺癌细胞A549生长的抑制作用 采用MTT法检测峨参提取物对肺癌细胞A549增殖的抑制作用，表1～4结果表明，与对照组相比，不同浓度的不同部位峨参提取物对肺癌细胞A5明显49增殖具有抑制作用（P

3.2峨参各部位提取物对肺癌细胞H460生长的抑制作用 采用MTT法检测峨参提取物对肺癌细胞H460增殖的抑制作用，表5～8结果表明，与对照组相比，不同浓度的不同部位峨参提取物对肺癌细胞H460增殖具有明显抑制作用（P

4讨 论

中药治疗肿瘤是我国在肿瘤治疗上的一大特色，由于中药不良反应小而备受关注，本实验中MTT法结果表明，10～1000μg/mL的峨参石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物对人肺癌细胞A549和H460都有明显的抑制增殖作用，其中石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物抑制效果更明显，这为峨参抗肿瘤提供了实验依据，值得进一步深入研究。

参考文献

［1］ 王凤岐，吴大真.峨眉神效验方[M].北京：科学普及出版社，1982：42.

[2] Yeonjoong Yong,Soon Young Shin,Young Han Lee,et al. Antitumor activity of deoxypodophyllotoxin isolated from Anthriscus sylvestris: Induction of G2/M cell cycle arrest and caspase-dependent apoptosis［S］.Bioorg.Med.Chem.Lett，2009(19):4367-4371.