独活对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力的影响

摘 要：目的：研究独活颗粒剂对Aβ1–40蛋白所诱发的AD模型大鼠学习记忆能力的影响。方法：采用Aβ1–40灌注法建立AD大鼠模型，分别用中药独活颗粒剂、西药吲哚美辛、0.9%的氯化钠溶液灌胃，4周后，通过水迷宫实验观察药物对AD模型大鼠学习记忆能力的影响。结果与结论：独活颗粒剂能够改善AD模型大鼠的学习记忆能力。

关键词：独活；痴呆；AD模型大鼠；学习记忆能力

中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-7717(2011)12-2641-02

Effect of Duhuo on Abilities to Study and

Memorize of Model Rats Suffering from Alzheimer

ZHU Mandi1，QU Jing2，CUI Jiapeng2,advisor: WANG Caixia2

(1.Liaoning Health Vocational and Technical College, Shenyang 110101, Liaoning, China；

2.Liaoning University of TCM, Shenyang 110847,Liaoning,China)

Abstract:Objective：To investigate the mechanisms of Duhuo to affect the ability of learning and memory in AD model of Wister rats.Method：Aβ-amyloid protein injection method of Wister rats and Hippocampus was used to shape AD model, traditional Chinese medicine Duhuo, Western medicine indomethacin and saline were administered. After four weeks, effects of drugs on learning and memory in rats are observed through the water maze experiment. Result: And Conclusion：Duhuo water granula could regulate immune function so as to prevent and treat immune injury.

Key words:Duhuo；AD；AD model Wister Rats；abilities of learning and memory

老年性痴呆(Alzheimer’s Disease,简称AD) 是指老年期发生的以慢性进行性智力衰退为主要表现的神经精神疾病，是老年人的常见病和多发病，也是严重危害老年人身心健康的重大疾病之一，目前对此缺乏有效的治疗方法。我国人口老龄化的进程，随着社会的发展将日益加剧，本病将带来严重的医疗和社会问题\[１\]。

此项研究是以祛风除湿药物独活来延缓衰老和防治AD，根据中医传统理论并结合现代流行病学的研究成果，研究独活颗粒剂对AD模型大鼠学习记忆能力的影响，为中药治疗AD开创新的思路，具有重要的理论及应用价值。

1 实验材料

1.1 实验药品 江阴制药厂生产的独活颗粒剂，批号0702119，购于辽宁中医药大学附属医院药局；上海常虹制药厂生产的盐酸吲哚美辛片，批号20070709，购于辽宁省中医院药局；β-淀粉样蛋白（1-40），批号为0710120，购于瑞士巴亨公司；10%水合氯醛，0.9%的氯化钠溶液，购于辽宁省中医院药局。

1.2 实验动物 Wistar大鼠36只，均为雄性、健康，且都为15周龄（合格证书SCXK辽2003-0009号），体重为（350±20）g。

1.3 主要仪器及设备 Morris（包括电脑自动摄象装备系统）水迷宫系统；江湾Ⅰ型C大鼠脑立体定位仪，微量注射器、牙科钻及手术器械等；DS-88型高精度数学电子天平；M飞鸽牌离心机\[TDL-5-A\]；JEM-1200EX型透射电子显微镜；AX70OLYMPUS光学显微镜；RM2245型石蜡切片机；LKB-LTI型超薄切片机；电热恒温水浴锅。

2 实验方法

2.1 实验动物的分组 实验大鼠36只按完全随机化原则分为4组：模型组、独活组、西药组、假手术组，每组9只。

2.2 造模 将Aβ1-40用无菌生理盐水稀释成2g/L溶液，置37℃温箱内七天成为凝聚态的Aβ1-40备用。以10%的水合氯醛溶液腹腔注射麻醉动物。麻醉成功后，将独活组、西药组、模型组大鼠固定于大鼠脑立体定位仪上，经备皮消毒后，沿颅中缝做2～3cm的切口，经剥离而暴露前囟，用牙科钻在左右侧海马区钻开颅骨，用微量注射器自颅骨表面垂直进针4.5cm，缓慢注入凝聚态1μL Aβ1-40，留针5min后缓慢出针，缝合切口。假手术组以同样方法注射等量0.9%的氯化钠溶液，术后各组连续肌注3天青霉素以抗感染，剂量均为20万单位/天。

2.3 大鼠水迷宫实验 将大鼠放入水中，利用其生存本能，造模前、后各记录1次其学习找到平台的时间。训练大鼠于实验前学会水迷宫。将每只大鼠在相同入水点放进2次。记录大鼠的游泳轨迹、逃避潜伏期、游泳总路程等。允许大鼠在120s内找到平台，并于找到平台后在其上面保持30～60s以加强记忆。如果在此时间内找不到平台，就把大鼠引导到平台上，同样保持30～60s，再进行下一次训练。独活组每日以0.365g/mL浓度溶液灌胃，每天2mL/只，实验至第28天开始，进行药后空间学习记忆能力训练测试3天。

大鼠海马组织形态观察：大鼠在水迷宫测试以后，经戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔麻醉，分离出海马组织，用10%福尔马林固定后，采取石蜡包埋。

统计方法：采用SPSS 13.0软件包进行统计学分析，采用配对t检验，用±s表示。

3 结 果

3.1 AD模型大鼠水迷宫学习记忆能力的测定 见表1，插页Ⅲ图1。

注：与假手术组比较,*P

结果显示，术前各组比较均无差异；模型组、西药组、独活组各组给药前与手术前比较均有显著性差异（P

3.2 AD模型大鼠形态学方面的改变 光镜下观察：除淀粉样物质呈现红色以外，其他组织均呈现浅红色，细胞核呈现蓝色。见插页Ⅲ图2。

HE染色观察大鼠海马组织形态：光镜下，大鼠经海马注射Aβ后，海马区细胞根据形态上判断为小胶质细胞，因其聚集、增生、核小、深染，呈三角形或扁圆形，胞质少；稍向外周为反应性星形胶质细胞，表现为核稍大，染色较浅，呈卵圆形；CA1区锥体神经细胞被胶质细胞所取代，因其细胞带不完整，神经元丧失。周围细胞胞质嗜酸性增强，胞核固缩、溶解、消失，出现较多变形坏死的神经细胞，多数神经细胞形状不规则，部分神经核呈三角形或多角形等固缩状，核内结构模糊，浅染，大量胶质细胞增生见图1。

4 讨 论

4.1 AD模型的建立方法 AD动物模型主要有以下几种：与中枢胆碱能相关的AD动物模型、铝造成的AD动物模型、与β淀粉样蛋白(Aβ)相关的AD动物模型、自然衰老的动物模型、自身免疫性痴呆模型等。本研究所选用的是脑内注射Aβ模型，将Aβ注入动物脑内，造成神经元变性，其病理改变是脑内Aβ沉积，而脑注射部位有局灶性坏死。AD主要的病理学特征是脑神经细胞外形成SP、细胞内有NFT以及神经元丢失，其临床表现主要是中枢性认知障碍。

4.2 学习记忆的生理生化基础 AD的病因主要有以下几种学说：胆碱能学说、自由基学说、炎症和免疫学说、遗传学说、激素因素、免疫系统机能障碍、病毒学说、铝中毒学说、钙超载学说等。AD的主要临床表现是学习记忆能力障碍、智力减退以及行为与人格的改变。学习记忆能力的下降可能是和神经细胞突触的变化有关。大量研究证实，海马与学习记忆的关系极其密切\[2\]，因海马直接参与信息的存储和记忆。

4.3 中药预防AD 本实验通过给大鼠脑内注射Aβ造模，使其脑内出现β淀粉样蛋白沉积，学习记忆能力明显减退，独活颗粒剂能明显改善其学习记忆能力，因此，证实独活通过对免疫损伤的抑制作用，以达到延缓脑老化的目的。

独活，味苦辛而甘，微温。入肝、肾、膀胱经，具有祛风除湿、散寒止痛的作用。临床主要利用药典中对独活功效的记载来治疗风湿性疾病，同时独活还具有行气活血、温养营卫、通补兼得的抗衰老作用。

独活中的主要活性成份蛇床子素具有明显延缓细胞膜老化，阻止自由基对脑组织不饱和脂肪酸的氧化损伤作用，保护细胞膜结构,发挥抗衰老的机制。

祛风胜湿药通过调节机体免疫功能和抗炎作用治疗风湿系统疾病的疗效确切，与非类固醇类抗炎药物有类似的作用靶点\[3\]。中医祛风胜湿理论对减轻机体的炎性损伤不仅在风湿病治疗领域已得到充分证实，而且在临床中也得到广泛应用。因AD脑中存在炎症因子，祛风胜湿药同非类固醇类抗炎药物对免疫炎性损伤均具有很好的疗效，因此，提出独活可能对AD的治疗有效。

5 结 论

独活颗粒剂能够改善AD模型大鼠的学习记忆能力。

参考文献

\[1\] 范小兰，王玮，赵小贞．年龄、性别因素对大鼠水迷宫测试成绩的影响［J］．福建医科大学学报，2003，3(37)：53-54.

\[2\] 李琳．非遗传性老年痴呆的动物模型及行为学病理学改变［J］．生理科学进展，1997，28 (4)：325-327

\[3\] 韩红伟，李渡华，张德英．中医药治疗老年痴呆的研究进展［J］．浙江中医杂志，2004，11（3）：498-499.