合欢花挥发油化学成分及提取液抑菌作用研究

摘要：采用水蒸气蒸馏法提取合欢（Ａｌｂｉｚｚｉａ ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ Ｄｕｒａｚｚ.）花挥发油，并用气相色谱－质谱（ＧＣ－ＭＳ）法进行分析，利用滤纸片法进行抑菌试验。结果表明，合欢花挥发油中共鉴定出１６种成分，包括二十一烷（２４．７６２％）、植酮（２２．９６８％）、二十八烷（１６．１１８％）、二十四烷（８．４３８％）和棕榈酸甲酯（６．６８９％）。合欢花提取液对鳗弧菌、哈维氏弧菌、灿烂弧菌、高卢弧菌、巨大芽孢杆菌均有抑制作用，其作用随浓度升高而增强。

关键词：合欢（Ａｌｂｉｚｚｉａ ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ Ｄｕｒａｚｚ.）；挥发油；气相色谱－质谱联用；提取液；抑菌作用

中图分类号：ＴＳ２２４．４ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）06－1245-03

Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ in Ｖｏｌａｔｉｌｅ Ｏｉｌ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ Ｆｌｏｗｅｒ ｏｆ Ａｌｂｉｚｚｉａ ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ

ＷＡＮＧ Ｙｉ－ｚｈｕｏ，ＬＵＯ Ｈｕｉ，ＺＨＡＯ Ｓｈｉ－ｘｉａｎ

（Ｍａｒｉｎｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｔ Ｗｅｉｈａｉ， Ｗｅｉｈａｉ ２６４２０９， Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ ｆｒｏｍ ｆｌｏｗｅｒ ｏｆ Ａｌｂｉｚｚｉａ ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ Ｄｕｒａｚｚ. ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｓｔｅａｍ ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｆｉｌｔｅｒ ｐａｐｅｒ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ １６ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｈｅｎｅｉｃｏｓａｎｅ（２４．７６２％）， ２－ｐｅｎｔａｄｅｃａｎｏｎｅ， ６，１０，１４－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ （２２．９６８％）， ｏｃｔａｃｏｓａｎｅ （１６．１１８％）， ｔｅｔｒａｃｏｓａｎｅ （８．４３８％） ａｎｄ ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｉｃ ａｃｉｄ， ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ （６．６８９％）； ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ Ｖｉｂｒｉｏ ａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍ， Ｖ. ｈａｒｖｅｙｉ， Ｖ. ｓｐｌｅｎｄｉｄｕｓ， Ｖ. ｇａｌｌｉｃｕｓ ａｎｄ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ． Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ａｌｂｉｚｚｉａ ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ Ｄｕｒａｚｚ.； ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ； ＧＣ－ＭＳ； ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ； ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ

合欢花为豆科合欢属植物合欢（Ａｌｂｉｚｚｉａ ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ Ｄｕｒａｚｚ.）的干燥花序，是一种较为常见的中药，具有宁神作用，主要用于治疗心神不安、忧郁失眠［１］、郁结胸闷、活血消肿。药理研究证明，合欢花水提液具有明显的镇静、催眠［２］和抗抑郁［３］作用。本试验通过ＧＣ－ＭＳ法分析了水蒸气蒸馏法获得的合欢花挥发油挥发成分，并采用滤纸片法分析了提取液的体外抑菌效果，以期为合欢花在化工、食品添加剂以及抗菌药物等方面的开发应用提供参考。

１ 材料与方法

１．１ 主要试剂与材料

合欢花，产自江苏某地，鲜样自然阴干后，粉碎待用；牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏３ ｇ，蛋白胨１０ ｇ，氯化钠５ ｇ，琼脂１８ ｇ，水１ ０００ ｍＬ，ｐＨ ７．０～７．２），２２１６Ｅ培养基（蛋白胨５ ｇ，酵母膏１ ｇ，硫酸亚铁０．０１ ｇ，琼脂１８ ｇ，陈海水１ ０００ ｍＬ，ｐＨ ７．６～７．８）；９５％（体积分数，下同）分析纯乙醇。

１．２ 仪器

安捷伦７８９０－５９７５气相色谱－质谱联用仪（美国安捷伦科技公司）；挥发油提取器；旋转蒸发仪；恒温培养箱等。

１．３ 菌种

巨大芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、鳗弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍ）、哈维氏弧菌（Ｖ. ｈａｒｖｅｙｉ）、灿烂弧菌（Ｖ. ｓｐｌｅｎｄｉｄｕｓ）、高卢弧菌（Ｖ. ｇａｌｌｉｃｕｓ），由山东大学威海分校海洋学院微生物实验室提供。

１．４ 方法

１．４．１ 挥发油的提取［４，５］ 称取合欢花１００．０ ｇ于挥发油提取器中，加入９００ ｍＬ水，５０ ℃下回流５ ｈ，所得挥发油于低温下保存，待测。

１．４．２ 气相色谱条件 色谱柱为ＨＰ－５ＭＳ ５％ Ｐｈｅｎｙｌ Ｍｅｔｈｙｌ Ｓｉｌｏｘａｎｅ（３０ ｍ×０．２５ ｍｍ×０．２５ μｍ） 弹性石英毛细管柱，升温程序为：初温８０ ℃，保持１ ｍｉｎ，以２０ ℃／ｍｉｎ升至１８０℃，保持５ ｍｉｎ，再以５℃／ｍｉｎ升至２６０ ℃，保持５ ｍｉｎ，进样口温度为２５０ ℃，载气为氦气，柱前压为７２ ｋＰａ， 进样量为１ μＬ ，流速为１．２ ｍＬ／ｍｉｎ。

１．４．３ 质谱条件 离子源为ＥＩ源，离子源温度为２３０ ℃，电子能量７０ ｅＶ，接口温度２７０ ℃，溶剂延迟时间５ ｍｉｎ，扫描质量范围为６０～５５０ ａｍｕ。

１．４．４ 提取液的制备 称取２０ ｇ合欢花，置于圆底烧瓶中，加入２００ ｍＬ ９５％乙醇，５０ ℃回流３ ｈ，过滤，收集滤液；滤渣加入１５０ ｍＬ ９５％乙醇同条件提取２ ｈ，过滤，合并提取液，减压蒸发，获得提取液［６］。

１．４．５ 抑菌试验 活化菌种后，用灭菌棉棒蘸取少量菌落在固体培养基上密集划线。用打孔器将滤纸打成直径为５ ｍｍ的滤纸片，湿热灭菌后备用。然后用体积分数为95%的乙醇将合欢花提取液原液配成系列浓度，用镊子夹取滤纸片放入溶液中，浸泡２ ｈ后置于固体培养基上。每个培养皿中等距离摆放３个滤纸片，每个供试菌种作３组平行，用９５％乙醇作空白对照，放入培养箱中。巨大芽孢杆菌于３７ ℃下倒置培养２４ ｈ，鳗弧菌、哈维氏弧菌、灿烂弧菌和高卢弧菌于２８ ℃下倒置培养２４ ｈ，测量抑菌圈直径，取平均值。

２ 结果与分析

２．１ 挥发油成分

对合欢花挥发油进行ＧＣ－ＭＳ分析，其总离子流见图１，共检测出１８个峰，所得质谱经ＮＩＳＴ标准谱库数据系统分析处理，确定１６种组分，按照面积归一法确定各组分的相对百分含量，结果见表１。

２．２ 抑菌试验

抑菌试验结果如图２所示，由图可知，合欢花乙醇提取液对５种供试菌均有抑制作用，且随着提取液浓度增加抑菌圈直径增大。当提取液浓度小于０．１ ｍｇ／ｍＬ时，对灿烂弧菌和高卢弧菌的抑制作用较巨大芽孢杆菌、鳗弧菌和哈维氏弧菌明显；当提取液浓度大于０．１0 ｍｇ／ｍＬ时，对鳗弧菌和哈维氏弧菌的作用有所提高；当提取液浓度大于０．２５ ｍｇ／ｍＬ时，对几种供试菌的抑制作用均明显增强。合欢花乙醇提取液对５种菌的抑制作用有所不同，对４种海洋弧菌的抑制作用明显强于巨大芽孢杆菌。

３ 讨论

从合欢花挥发油中共鉴定出１６种成分，其中含量较高的是二十一烷（２４．７26％）、植酮（２２．９６８％）、二十八烷（１６．１１８％）、二十四烷（８．４３８％）和棕榈酸甲酯（６．６８９％）。在这１６种组分中，２，６－二叔丁基对甲苯酚具有抗氧化性，可作为食品中的抗氧化剂［７］，邻苯二甲酸二异丁酯是常用增塑剂［８］，２，２′－亚甲基－双（４－甲基－６－叔丁基苯酚）简称２２４６，是合成橡胶和石油产品中的常见抗氧添加剂［９，１０］。

抑菌试验选取的菌株包括鳗弧菌、哈维氏弧菌、灿烂弧菌、高卢弧菌和巨大芽孢杆菌，既有革兰氏阴性菌又有革兰氏阳性菌，因此通过抑菌试验，可较为全面地评价合欢花提取物的抑菌作用。此外，鳗弧菌、哈维氏弧菌和灿烂弧菌是3种常见的海洋致病菌。鳗弧菌是一种对鱼类危害较大的病原菌，其流行范围广，在水产养殖中引起的危害也最大［１１］。哈维氏弧菌和灿烂弧菌会导致鱼、虾、贝、刺参等染病，给水产养殖业造成损失［１２－１４］。长期以来，国内外均以化学农药或者兽药作为渔药药源，而多数药物不仅难以降解，还会在水产动物体内富集，因此对生态环境具有较大的负面影响。中草药的天然成分副作用小，且多数有较好的杀菌效果，可以作为新鱼药的药源进行开发。本结果表明，合欢花提取液对常见海洋致病菌均有较好的抑菌作用，将为合理开发和利用合欢花资源提供了科学依据和参考。

参考文献：

［１］ 吕金顺，左国防，王缠定． 合欢属植物的化学成分及药用价值研究［Ｊ］． 天水师范学院学报，２００３，２３（５）：２３－２５．

［２］ 单国存，石磊虹． 合欢花与南蛇藤果实水煎剂镇静、催眠作用的比较［Ｊ］． 中药材，１９８９，１２（５）：３６－３７．

［３］ 李作平，赵 丁，任雷鸣，等． 合欢花抗抑郁作用的药理实验研究初探［Ｊ］． 河北医科大学学报，２００３，２４（４）：２１４－２１６．

［４］ 项昭保，陈海生，夏晨燕，等． 木姜子挥发油的化学成分及抑菌活性研究［Ｊ］． 中成药，２００８，３０（１０）：１５１４－１５１６．

［５］ 徐 琅，贾元超，龚祝南． 一年蓬挥发油的气相色谱－质谱分析及体外抑菌活性研究［Ｊ］． 时珍国医国药，２００９，２０（５）：１１７１－１１７２．

［６］ 古丽扎尔・阿布都克依木，萨代提古丽・马合木提，拉孜古丽・买买提，等． 红果龙葵茎和叶的抑菌作用研究［Ｊ］． 生物技术通讯，２０１０，２１（４）：５５５－５５７

［７］ 袁履冰，周宁章． 叔丁酚类的性质、用途及合成［Ｊ］． 辽宁化工，１９９４，（６）：８－１４．

［８］ 袁海婷． 邻苯二甲酸二异丁酯及马来酸二异丁酯合成的研究［Ｊ］． 北京化工，１９９１，２１（３）： １３－１７．

［９］ 张 萍，杨清华，史翠花，等． 抗氧剂２２４６在ＢＲ生产中的应用［Ｊ］． 合成橡胶工业，１９９４，１７（４）：２０７－２１１．

［１０］ 张天永，池立峰，夏文娟，等． 抗氧剂２２４６的合成研究［Ｊ］． 化学工业与工程，２００９，２６（１）：１９－２２．

［１１］ 莫照兰． 养殖牙鲆细菌性疾病调查及鳗弧菌致病性研究［Ｒ］． 青岛：中国科学院海洋研究所，２００１．

［１２］ 覃映雪，池信才，苏永全，等．网箱养殖青石斑鱼的溃疡病病原［Ｊ］． 水产学报，２００４，２８（３）：２９７－３０２．

［１３］ 王国良，金 珊，薛良义． 海水网箱鲈鱼皮肤溃烂病及其病原菌的研究［Ｊ］． 黄渤海海洋， ２０００，１８（３）：８５－８９．

［１４］ 张春云，王印庚，荣小军． 养殖刺参腐皮综合征病原菌的分离与鉴定［Ｊ］． 水产学报，２００６，３０（１）：１１８－１２３．