铜针留置血管内对肝脏影响的实验与临床研究

[摘要]目的：探究铜针留置兔体内后肝脏组织及生化指标的改变及铜针留置治疗血管瘤对人肝功能的影响。方法：以兔耳缘静脉模拟静脉畸形，将49只新西兰白兔按留置铜针1、3、5、7天及对照随机分成五组。分别于留针前及留针后1、3、5、7天检测血清铜、肝功能，肝脏组织HE染色切片观察,个别组织标本行组织化学特殊染色、透射电镜检查。对同期进行的85例铜针留置治疗海绵状静脉畸形患者，其中8～11例行治疗前及留置铜针1、4、7天后血清铜含量及肝功能相关指标测定。各组数据行统计学分析。 结果：实验兔铜针留置后血清铜浓度随时间的推移而增加；肝功能ALT与AST变化无显著差异；病理切片肝组织为逐渐消退的无菌性炎症反应，无明显肝小叶结构改变及纤维化。8～11例患者留置铜针1、4、7天后静脉血清铜含量与治疗前无统计学差异（P＞0.05），但7天后局部血清铜显著高于静脉血清铜；留置铜针1、4、7天后血清 ALT、AST变化与治疗前无统计学差异（P＞0.05）。结论：铜针留置兔体内实验及临床铜针局部留置治疗海绵状静脉畸形对肝脏未产生明显的毒副作用。

[关键词]海绵状静脉畸形；铜针；血清铜；肝脏；铜中毒

[中图分类号]Q591.7[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2007）09-1187-05

Experimental and clinical research on the changes of liver after copper needles retained in blood vessels

YIN Guo-qian,YANG Xiao-nan,FU Shi-zhang,SU Cheng-wu,LI Jia-quan,CAI Jie

（Department of Plastic and Aesthetic Surgery,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021,Guangxi,China）

Abstract:ObjectiveTo explore the changes of pathology and biochemical indicators of the liver after copper needles retained in the veins of rabbits' ears; Second, to study the hepatic function of patients after treating hemangioma with retained copper needles.MethodsThe vein in ear of the rabbit was used to imitate vascular malformation.49 rabbits were separated into 5 groups randomly,which are group A(which had been retained copper needles for 1d),group B(for 3d),group C(for 5d),group D(for 7d) and control group(with no copper needles being retained).Each group was arranged respectively to conduct a laboratory analyses preoperative and 1d,3d,5d,7d postoperative.The laboratory analyses contained concentration of Cu2+ in the blood serum, the hepatic function ,and some pathological examinations after staining. At the same time,8 to 11 cases with retained copper needles were selected randomly from 85 patients with venous malformations, the concentration of Cu2+ in the blood serum and hepatic function were analyzed preoperative and 1d,4d,7d postoperative.ResultsTo the rabbits,the level of Cu2+ in the blood serum increased when times went on,but there was no significant change of the ALT and AST; the aseprtic inflammation in liver was extinctive gradually,and there was no significant changes in the structure of hepatic lobules, no fibrous degeneration happening also. To the patients,there was no significant difference of the serum copper level preoperative and postoperative（P＞0.05）, but the local serum copper level was much more than the mean serum copper level 7 days postoperative. （P

Key words: venous malformations;copper needles;Cu2+;liver;copper toxicosis

铜针留置治疗海绵状静脉畸形治疗方法以其疗效好、方法简便易行、可不或少影响外貌和功能、出血少等优点,成为近十余年治疗难治性血管病变的一种重要手段。我科自1993年6月至2006年12月采用铜针留置治疗海绵状静脉畸形85例，取得较好效果。为探讨治疗中铜针所释放的金属铜离子是否会导致体内铜蓄积而引发毒副反应，我们开展了动物实验及临床治疗中的初步探讨，现总结分析如下。

1材料和方法

1.1动物实验部分

1.1.1实验动物及分组：本实验以兔耳缘静脉模拟静脉畸形，健康新西兰白兔 49只，雌雄不分，体重 2.0kg±0.25kg，由广西医科大学动物实验中心提供并统一喂养。将49只白兔随机分为A组(留置铜针1天)、B组(留针3天)、C组(留针5天)和D组(留针7天)五组,每个实验组10只兔子，E组（正常对照组）9只。

1.1.2铜针的制备：选用工业用0.8mm直径漆包铜线（纯度99.9%），制成长约4.5cm相同规格铜针，一端磨成圆锥形、另一端弯成环状,打磨去除外层绝缘漆及氧化层，环氧乙烷消毒备用。

1.1.3 检测指标及实验方法：购入实验动物饲养1周后，将各实验组兔耳缘去除毛发，75%医用乙醇消毒，局麻后在无菌操作下，将两枚预先消毒好的铜针分别穿入兔耳左右耳缘静脉，铜针进入长度为3.5～4.0cm，铜针带环状一头外露,用无菌手术皮肤贴膜将外露部分与局部皮肤一起粘帖密封固定,防止伤口污染及铜针脱落。

分别在A、B、C、D组兔耳留置铜针1天、3天、5天、7天后，抽取各组兔子耳中央静脉血3～4ml，测血清铜浓度、血清谷丙转氨酶(ALT)、血清谷草转氨酶（AST）。同期抽取对照组检测对比。同期切取部分肝脏组织行常规石蜡切片苏木精-伊红（HE）染色法检查，抽取出现阳性结果的组织标本行组织化学特殊染色（Masson三色染色法及Ag染色法）检查；对B、C组部分有阳性结果的肝脏组织标本行透射电镜检查。

1.1.4 统计学分析：采用SPSS13.0统计软件包对实验数据做单因素方差分析（LSD法对各组行两两比较），个别数据做相关分析。P

1.2临床部分

1.2.1 一般资料:本组85例，男51例，女34例。年龄6～55岁，平均21岁。病变部位：头面部8例；上肢26例；下肢37例；躯干8例；会3例；全身多发3例。治疗方法：单纯铜针留置23例；畸形静脉缝扎加铜针留置54例；铜针留置加直流电通电8例。

1.2.2 对治疗病例中11例畸形静脉缝扎加铜针留置患者在治疗前、留置铜针1、4、7天后分别取静脉血，采用美国A7100全自动生化分析仪检测患者血清铜及肝功能，拔针时测留针局部血清铜。结果数据采用方差分析（方差齐）或秩和检验（Kruskal-Wallis法）（方差不齐）。

2结果

2.1 动物实验部分

2.1.1 各实验组、对照组兔血铜浓度及肝脏酶学指标检测结果见表1。

铜针留置前后血清铜离子浓度经统计学分析有显著差异(P0.05,表1)。

2.1.2 肝脏病理组织学检查

2.1.2.1 HE染色光镜观察：各组肝脏标本观察结果见图1～5（光镜×100），变化规律见表2。

2.1.2.2 透射电镜观察：对照组电镜下可见：细胞膜完整，核结构正常，其内染色质均匀，细胞内线粒体、内质网及高尔基体等细胞器结构正常。对B、C组里HE染色出现阳性结果的个别标本行透射电镜检查，可见细胞核固缩，核基质浓缩，线粒体空泡化，滑面内质网扩张，粗面内质网脱粒、囊泡化；局部细胞内细胞器溶解消失（图6）。

2.1.2.3组织化学特殊染色观察：对照组肝脏组织标本中纤维结缔组织分布于汇管区及肝小叶间。实验中，在每组中各选取HE染色出现阳性结果的标本3份，每个标本留取不同层次的组织切片2～3份，行Masson三色染色法及Ag染色分别检测组织内网状纤维和弹力纤维异常，结果为阴性，即未出现纤维结缔组织的异常增多（图7～8）。

2.2 临床部分

2.2.1 治疗效果： 疗效标准分3类：①治愈：局部肿块消散，充盈消失，术后半年无复发，本组44例，占51.76%；②有效：肿块范围缩小，变硬，术后3个月有部分区域复发，本组37例，占43.53%；③无效：即治疗后血管畸形无明显变化，本组4例，占4.71%。

2.2.2 9例患者铜针留置前、后血清铜变化见表3。

2.2.2 铜针留置前、后肝功能指标变化见表4～5。

3讨论

3.1血管瘤（血管畸形）为一种涉及临床多个学科的常见病，发病率约为3‰～1％，目前研究内容广泛,治疗方法较多但疗效不尽人意[1-4]。铜针留置术主要适用于海绵状静脉畸形及其他方法治疗后复发的血管瘤，也可用于深部弥漫性血管瘤的术前准备[5-7]。尽管铜针留置术十余年来良好的治疗效果得到广大学者的认可，但铜针治疗是否会导致血清铜升高或铜在体内蓄积而导致机体铜中毒仍是备受关注的问题。本研究通过以兔耳缘静脉模拟静脉畸形,动物实验及临床中系统检测铜针留置后血清铜离子浓度、肝脏生化指标及病理组织学变化，探讨铜离子对肝脏所产生的影响。

3.2 Zhou[5]对52例患者行铜针治疗，检测留针72h后静脉血铜浓度与术前比较变化无统计学意义。由于临床上通常在病灶区域选择留置铜针5～7天，所以本实验中将7天设计为最长留针时间点，最大程度地使实验研究符合临床实践。本组实验铜针留置后1、3天组与对照组比较血铜浓度变化无差异(P>0.05)，而5、7天组与对照组比较则存在差异（P

3.3 肝脏是储存铜的主要器官，铜过量时肝细胞损害尤为显著，当肝细胞螯合了大量的铜时，其细胞周期延长并逐渐丧失复制功能，同时，随着铜浓度的增加及持续时间延长，细胞生存下降并最终导致肝细胞坏死、DNA损伤及细胞死亡率上升[8]。急性铜中毒开始表现为恶心、呕吐、服泻等胃肠道症状，溶血作用明显，继而出现黄疸及心率失常，严重时可出现肾功能衰竭及尿毒症、休克；铜过量还可加重病毒性肝炎损害，导致爆发性肝功能衰竭；加速肝癌形成[9-10]。

3.3.1 HE染色组织学观察：本实验显示肝内肝细胞水肿坏死为局部性，1天时细胞反应相对最重，其后逐渐缓解减轻；浸润的炎细胞在反应初期以中性粒细胞为主，后渐转归为淋巴细胞；肝内血窦以小叶中央部扩张开始逐渐蔓延至周边，直至7天时持续扩张。上述反应可能是由于铜离子代谢性地积聚刺激使肝脏产生了一个急性发作、逐渐减弱的无菌性炎症，但由于程度较轻未引发肝细胞的坏死及纤维化。随着7天后铜针的取出机体内铜离子浓度不断下降，肝脏的无菌性炎症发应逐渐缓解消退。铜针留置7天内引起的无菌性炎症是局部可逆的，对肝脏未造成明显损害。

3.3.2 透射电镜观察：对3天、5天组个别出现阳性结果的肝脏标本行电镜观察发现局部肝细胞出现细胞核固缩、核基质浓缩、线粒体空泡化、滑面内质网扩张、粗面内质网脱粒、囊泡化等改变。5天组标本比3天组细胞内微观结构的破坏有所缓解。该结果从细胞水平上证实了光镜下所见。

3.3.3 组织化学特殊染色观察：肝纤维化不是一个独立的疾病，而是许多肝脏疾病的共同病理过程。本实验通过Masson三色染色及Ag染色法着重检测5组实验动物中15份肝脏标本的约40份组织切片，观察是否存在因铜针留针后刺激而出现弹性纤维和网状纤维的异常增多。所有组织切片检查结果显示肝脏内未出现异常纤维增多,说明在留针期间肝脏未表现出纤维化的迹象。随着铜针的拔除，影响因素的逐渐消失，肝细胞水肿坏死程度进一步减轻，不会再出现纤维化的改变。

3.3.4 肝脏内酶学指标改变：当肝细胞受损至一定程度时血清中的ALT和AST做为非特异性的细胞内功能酶其活性会增加。本组动物实验铜针留置前后肝内重要酶学指标的变化无统计学意义(P>0.05)。结合病理可认为铜离子使肝脏出现一过性逐渐消退的无菌性炎症反应，由于程度较轻，对肝细胞的损害仍在肝脏的代偿范围内，故仅造成部分肝细胞的水肿坏死，肝血窦扩张、炎细胞浸润而未引起肝小叶结构重建、肝脏纤维化、转氨酶的上升等改变。本组患者铜针留置后肝脏转氨酶变化亦无统计学意义。由于我们研究数量及时间有限，临床中采用铜针留置治疗血管畸形是否会导致患者肝铜含量升高从而对肝脏产生潜在损害还有待进一步研究。

3.4 自铜针留置治疗血管病变以来，留置铜针数目的多少一直持有争议，机体是否存在一个铜离子相对安全的极限浓度，如何有效地量化铜针留置的数目、时间、部位与体内铜离子浓度之间的关系，“动态”地监测并调控该金属离子，使其在合理的浓度范围内，最大限度地发挥作用，还有待于进一步研究探讨。尽管本组实验显示了血清铜的变化及肝脏的部分改变，但临床上如能严格掌握适应证，治疗中注意控制留针数量及时间使铜针释放铜离子有限，铜针留置治疗海绵状静脉畸形不失为简便、有效、安全的方法之一。

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[收稿日期]2007-06-05[修回日期]2007-08-22

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