黄连中盐酸小檗碱的水提工艺研究

（浙江中医药大学药学院，浙江 杭州 310053）

摘 要：目的：优选黄连中盐酸小檗碱的最佳提取工艺条件。方法：采用正交试验设计，以盐酸小檗碱的含量为考察指标，考察加水倍量、提取次数和提取时间3因素对提取结果的影响。结果：盐酸小檗碱的最佳提取工艺为加药材12倍量的水回流提取1次，提取时间为1h。结论：该优化提取工艺稳定可行，重现性好，可用于黄连中小檗碱的提取。

关键词：黄连；盐酸小檗碱；提取工艺

中图分类号：R284.2文献标识码：A文章编号：1673-7717（2011）03-0528-03

Study on Aqueous Extraction of Berberine From Coptis Chinensis Franch

HUANG Jia-wei, SHENG Zhen-hua

（College of Pharmacy, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, Zhejiang,China）

Abstract:Objective: To study the optimal process of the extraction of berberine from Coptis chinensis Franch. Methods: Orthogonal design was used for studying the effect of water volume,times of extraction, extraction time.Result:The optimum condition for the extraction of Coptis chinensis Franch was extracted 1 times by 12 fold of water, refluxing 1h.Conclusion: This extraction process is steady, feasible and reproducible,and can be used for extraction of berberine from Coptis chinensis Franch.

Key words:Coptis chinensis Franch; Berberine;Extractio

收稿日期：2010-09-20

基金项目：浙江省教育厅资助项目（20071129）

作者简介：黄家卫 （1961-），男，浙江杭州人，副教授，研究方向：中药及天然有效成分的研究与开发。

黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch、三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云连Coptis teeta Wall.的干燥根茎，具有清热燥湿，泻火解毒等功效［1］，其中主要有效成分是以小檗碱为代表的季铵型生物碱［2］，具有抗病毒、抗炎、抗菌、降血糖及免疫调节等作用［3］。有关黄连及其制剂中盐酸小檗碱的提取和测定已有报道［4-5］，提取时一般采用甲醇、氯仿、乙醇等有机溶剂，但存在溶剂用量大，成本高，安全方面等问题。对于盐酸小檗碱含量的测定时，则一般采用薄层扫描法［6］、荧光分光光度法等方法［7］，但上述两种方法操作繁琐，影响因素多，准确性较差。故本文根据盐酸小檗碱为季铵碱，易溶于水，设计以水溶剂的提取方法，采用正交实验设计，以HPLC法测定盐酸小檗碱的含量，筛选黄连中盐酸小檗碱的水提工艺，为其进一步的研究提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Lumtech K-501高效液相色谱仪（绿绵安特分析系统装备有限公司），Lumtech K2501紫外检测器，EastChrom 色谱工作站；Sartorius BS110s分析天平（北京赛多利天平有限公司）；

1.2 试药

盐酸小檗碱对照品（由中国药品生物制品检定所提供，批号为0713-9906），乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。黄连购于浙江中医药大学中药饮片厂并经中药资源教研室俞冰副教授鉴定为毛莨科植物黄连Coptis chinensis Franch。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验

色谱柱：Hypersil BDS C18 （ 250mm×4.6mm，5μm） ；流动相:乙腈∶0.02moL・L-1KH2PO4 30∶70，pH＝3.0；流速：1.0mL・min-1；检测波长：350nm柱温： 30℃； 进样量为10μL ，理论塔板数以盐酸小檗碱计算大于3000，此条件下，样品中盐酸小檗碱的与相邻峰的分离度大于1.5，色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品1.45mg，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得浓度为0.145mg・mL-1的对照品溶液，摇匀，用0.45μm的滤膜过滤，即得。

2.3 供试品溶液的制备［8］

精密称取黄连药材5g，分别根据表1、2试验条件进行加水回流提取，趁热过滤，转移至250mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。从250mL量瓶，取滤液0.5mL，置25mL量瓶中，加盐酸-甲醇1∶100混合溶液稀释，60℃水浴温浸15min，冷却至室温，加盐酸-甲醇1:100混合溶液稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.4 线性关系的考察

精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液1 mL，稀释成浓度为145.000、72.500、36.250、18.125、9.0625、4.531μg・mL-1的系列梯度对照品溶液，按照上述“2.1”色谱条件，各精密吸取10μL注入液相色谱仪，记录峰面积。对峰面积Y和进样量X（μg）进行线性回归，得到盐酸小檗碱的回归方程为：Y3705.100X+65.515，r0.9996，结果表明盐酸小檗碱在0.0453～1.450μg浓度范围内与峰面积具有良好线性关系。

2.5 提取工艺研究

2.5.1 因素水平表 以盐酸小檗碱的含量为考察指标，采用正交试验对盐酸小檗碱提取的加水倍量，提取次数，提取时间等因素进行探讨，因素水平见表1。

表1 因素水平表

2.5.2 试验方法及数据 将制备得各供试品液，按照上述“2.1”项下色谱条件，各进样10μL，记录色谱图，测定盐酸小檗碱的含量，结果见表2。

表2 正交试验表及结果

2.5.3 方差分析 将正交实验结果进行方差分析，结果见表3。

表3 方差分析表

F0.05（2，2）19；F0.01（2，2）99。

由表2中极差R值大小显示，各因素作用主次为A＞B＞C，即加水倍量>提取次数>提取时间，最佳工艺应为A3B2C3。经方差分析（表3）可知：A因素具有显著性意义（P＜0.05），以A3为佳，B、C两因素的影响无显著性意义（P＞0.05），故在实验范围内，考虑实际生产成本，最佳优选组合条件为A3B1C1，即药材加12倍量水，提取1次，提取1h。

2.6 验证性实验

按照上述最佳提取工艺进行验证试验，平行提取3次，测得盐酸小碱的平均得率为4.16%（高于正交表中9次试验的结果），RSD为1.51%。表明该提取工艺能较好地反映黄连中盐酸小檗碱的提取条件。

2.7 精密度试验

精密吸取对照品溶液10μL，连续进样6次，测定盐酸小檗碱的峰面积的RSD为0.34%，表明精密度良好。

2.8 稳定性试验

取供试品溶液在0、2、4、6、8、12h分别进样10μL，记录峰面积，结果盐酸小檗碱面积值的RSD为2.49%，可见供试品溶液在12h内基本稳定。

2.9 加样回收实验

称取6份已知含量的黄连药材，精密加入适量盐酸小檗碱对照品溶液。按“2.3”项下方法制备溶液，按上述色谱分析条件进样，测定，计算回收率，结果平均回收率为100.05%，RSD为1.78%。

3 小结与讨论

（1）黄连中的小檗碱一般以季铵型生物碱的状态存在，可以离子化呈强碱性，能溶于水。本实验中黄连的小檗碱的含量以盐酸小檗碱计，将小檗碱转化为盐酸小檗碱进行水为溶剂的提取工艺研究。

（2）实验中考察了多种流动相条件［9-10］：（1）乙腈-磷酸缓冲盐（20∶80）；（2）乙腈-0.4%磷酸（18∶82）；（3）甲醇-水-三乙胺（40∶60∶0.1），但结果发现盐酸小檗碱峰未能达到较好的分离效果，后采用乙腈-0.02moL・L-1KH2PO4流动相后盐酸小檗碱的分离度有所改善，改变流动相的比例，最后发现乙腈-0.02moL・L-1KH2PO4的比例为30∶70时，盐酸小檗碱的分离度及理论塔板数达到了分析及含量测定要求。

参考文献

［1］ 国家药典委员会,中华人民共和国药典・1部［S］.北京:化学工业出版社,2005: 213.

［2］ 匡海学.新世纪全国高等中医药规划教材中药化学［M］.北京:中国中医药出版社,2003.

［3］ 崔学军.小檗碱的药理学研究进展及临床新用途［J］.时珍国医国药,2006,17（7）:1311-1312.

［4］ 王杰,任仲皎,伍明.从黄连中提取小檗碱的新方法研究［J］.中国药学杂志,1994,29（8）:491-492.

［5］ 宋霄宏,昝日增.HPLC 法测定胃炎平颗粒剂中盐酸小檗碱的含量［J］.中国实验方剂学杂志,2003,9（1）:14-15.

［6］ 方阵,吴健,王康才.正交实验筛选黄连水提工艺［J］.时珍国医国药,2001,12（11）:982-983.

［7］ 文欣欣,刘丹华,余陈欢，等.薄层色谱一荧光分光光度法测定黄连及香连丸中盐酸小檗碱的含量［J］.中国中医药信息杂志,2008,15（10）:53-54.

［8］ 尹清.HPLC测定黄连中盐酸小檗碱含量［J］.上海中医药杂志,2003,37（7）:53-55.

［9］ 吴树春，译.日本药典（第12版）中收载天然药物的高效液相色谱分析［J］.西北药学杂志,1992,7（3）:27.

［10］ 姚国新,张晓燕,朱美艳，等.高效液相色谱法测定黄连解毒汤中小檗碱的含量［J］.时珍国医国药,2002,13（5）:276.