激温提取绞股蓝多糖的初步探索

摘要：以绞股蓝为材料，采用激温的方法对不同的高温温度、低温温度、复水料液比及激温处理时间进行单因素和L9（34）正交试验。结果表明：激温处理绞股蓝多糖的最佳工艺参数为：复水料液比为1g：4mL，高温80℃，低温0℃，循环处理2次，每次处理时间均为15min，其粗多糖的最大得率为0.72%。

关键词：激温 绞股蓝 多糖

0 引言

绞股蓝是一种多年生藤草，常见于山野丛林间，在我国和日本均分布甚广。作为中药，绞股蓝又称七叶胆，有消炎解毒、止咳法痰之功效，对治疗慢性气管炎也有良好的效果。它的藤除可做药外，叶子还可作利尿剂或强壮剂，具有良好的药用和食用价值。由于绞股蓝集滋补、医疗、保健于一体，在国际市场身价百倍。日本视为“福音草”，东南亚地区称为“健美女神”，美国誉其为“超级维生素”，在国内被誉为“南方人参”。国家科委把绞股蓝的开发列入“七・五”星火计划之中，中国植物学界惊叹“北有长白参，南有绞股蓝”[1]。随着人们保健意识的不断增强，对绞股蓝多糖的研究开发越来越重视，利用绞股蓝生产保健食品是一条很好的途径。本文就复水料液比、高温温度、低温温度及激温处理时间等因素进行正交试验对绞股蓝多糖提取率进行初步探索。从而，得出激温提取绞股蓝多糖的最佳工艺条件，为开发绞股蓝资源，探索绞股蓝多糖的食用和药用价值提供研究线索。

1 材料与方法

1.1 材料 绞股蓝（干）。

1.2 主要仪器和设备 UV-754紫外可见分光光度计；数显恒温水浴锅；美菱电冰箱；百灵LP1002型电子天平；粉碎机等。苯酚（AR）、浓硫酸（AR）、葡萄糖（GR）等。

1.3 方法

1.3.1 激温处理。准确称取2.00g已粉碎的绞股蓝粉末于常温下复水（复水料液比）20min，再放入已调好温度（高温）的恒温数显水浴锅中处理一定时间，然后放入冰箱中（低温）处理相同时间，如此循环两次。然后做不同的激温处理时间对绞股蓝多糖提取率的影响。

1.3.2 提取。采用水浸提法。根据前人采用此法提取多糖的经验并结合绞股蓝的特性。选定提取料液比为1：200，提取温度为85℃提取时间为1h，提取时每隔15min搅拌一次，然后再过滤得到清液。

1.3.3 绞股蓝多糖的测定。采用苯酚-硫酸法[2]。将清液经稀释后，经苯酚-硫酸显色后在490nm波长下采用UV-754分光光度计测其吸光度（A490nm），由葡萄糖标准曲线得到的回归方程为：

Y=135.131X-1.776 R2=0.998

式中Y――标准（溶液）葡萄糖含量（ug）。X――在490nm波长处测定溶液多糖的吸收值。

取过滤液加6%苯酚水溶液1.0mL再迅速加入浓硫酸5.0mL显色定容至25mL在冷水中冷却，在490nm波长处测其吸收值（以水代替作空白对照）。试验重复三次，试验结果以三次测定结果的平均值表示[3]。

绞股蓝多糖得率/%=Y×100/W

式中：Y为提取液中多糖的质量（ug）。W为准确称取的

绞股蓝的质量（g）。

1.3.4 激温处理的正交试验设计。在单因素试验的基础上，对高温温度、低温温度、复水料液比、激温处理时间采用L9（34）进行正交试验（表1），通过方差分析和多重比较，选出激温处理的最佳参数。

表1 正交试验因素水平

2 结果与分析

2.1 高温对绞股蓝多糖得率的影响 在复水料液比1g∶4mL、低温0℃、激温处理时间10min循环处理两次的条件下，采用五个不同高温温度（60℃、70℃、80℃、90℃、100℃）对绞股蓝进行激温高温处理，试验结果表明：

随着处理高温温度的升高，绞股蓝多糖得率逐渐增大，85℃时绞股蓝多糖得率达到最高（0.67%）。由于激温高温处理后绞股蓝细胞膜破裂，其破坏程度在小于85℃随高温温度的升高而不断加剧，这样有利于绞股蓝多糖溶出。85℃后得率有所下降可能是由于过高的高温温度对绞股蓝多糖分子的过度破坏或者绞股蓝其它物质的溶出阻碍了多糖的溶出。因此，选取85℃作为绞股蓝多糖激温处理正交试验的温度。

2.2 低温对绞股蓝多糖得率的影响[4] 复水料液比1g∶

4mL、高温温度85℃、激温处理时间10min循环处理两次的条件下，采用五个不同低温温度（-10℃、-5℃、0℃、5℃、10℃）对绞股蓝进行激温低温处理，试验结果表明：0℃是激温低温处理的最佳参数。低于或高于0℃，绞股蓝多糖得率都有不同程度的下降，且其下降斜率相差不大。这是因为温度为0℃时水结成冰，绞股蓝细胞体积发生膨胀将绞股蓝细胞膜胀裂，将有利于水溶性多糖的提取。

2.3 复水料液比对绞股蓝多糖得率的影响 在0℃和85℃，激温处理时间10min循环处理两次的条件下，采用四个不同的复水料液比（1∶1、1∶2、1∶4、1∶6）对绞股蓝进行激温处理，试验结果显示：随着加水量的增加绞股蓝多糖得率不断升高，呈现先快后慢趋势，复水料液比为1∶4，得率达到最大值（0.57%）。复水是激温处理的关键环节，复水使得绞股蓝分子充分吸水膨胀，在进行激温处理时绞股蓝的细胞膜就更容易破裂。随着加水量的增加复水效果更好，就越有利于水溶性多糖的提取。

2.4 激温处理时间对绞股蓝多糖得率的影响 在0℃和85℃，复水料液比为1∶4的条件下，采用五个不同的处理时间（5min、10min、15min、20min、25min）对绞股蓝进行激温处理，试验结果显示：随着激温处理时间的延长，绞股蓝多糖得率逐渐增大。在15min时绞股蓝多糖提取率达到最大值。这是由于激温循环处理的时间越长，对绞股蓝细胞膜的破坏越激烈，而经过一定处理时间后其破坏性趋于稳定。

2.5 激温处理绞股蓝多糖正交试验 根据单因素试验的结果，综合各个因素相互作用对股蓝多糖激温处理的影响，采用L9（34）正交设计对激温处理绞股蓝多糖的工艺参数进行了优化。正交试验的结果作极差分析、方差分析结果见表2和表3。

表2 绞股蓝多糖得率的正交试验结果及极差分析

从表2极差分析的结果看，激温处理绞股蓝多糖各因素的主次关系为：D（激温处理时间）>A（高温温度）>C（复水料液比）>B（低温温度）。A、B、D因素均以第二水平为最佳，而C因素以第三水平为最佳。从R值再结合各因素K值，可得出较好的因素水平是A2B2C3D2，与正交试验设计的工艺参数一致。综合各方面的因素，选择激温处理的工艺参数：复水料液比为1g∶4mL、高温高温80℃、低温温度0℃、激温处理时间为15min循环两次，提取料液比为1∶200，提取温度为85℃提取时间为1h时绞股蓝多糖得率可达0.72%。

表3 多糖得率方差分析

表3方差分析的结果：以绞股蓝多糖得率为指标时，各因素均无显著性影响（P>0.05）。

3 结论

激温处理提取绞股蓝多糖得率的4个因素均不存在显著性差异（P>0.05）。激温提取绞股蓝多糖的最优工艺参数为：复水料液比为1g∶4mL、高温温度80℃、低温温度0℃、激温处理时间为15min，（水浸提取料液比为1：200，水浸提取温度为85℃提取时间为1h）绞股蓝多糖得率可达0.72%。

参考文献：

[1]刘敏华.药用动植物种养加工技术・绞股蓝[M].北京：中国中医药出版社，2000.

[2]郑宝东.福建余甘可溶性多糖研究[J].中国食品学报，2003，3（1）.

[3]娄振岭，马丽萍.绞股蓝多糖生物学作用的研究[J].河南：河南肿瘤学杂志，1996，9（3）.

[4]任茜.绞股蓝多糖成分的初步分析[J].陕西：西北药学杂志，1989，4（3）.