通脉软胶囊的制备工艺和含量测定分析

摘 要：本实验以阿魏酸为指标对通脉软胶囊提取工艺进行研究并对通脉软胶囊的含量测定方法进行研究。通脉软胶囊最佳提取工艺为连续提取3次，第一次提取加入8倍量水，浸泡10分钟，煎煮30分钟，第二次提取加入8倍量水，煎煮30分钟，第三次提取加入8倍量水，煎煮30分钟。本工艺稳定、可行、收率高，测定方法准确。

关键词：通脉软胶囊；阿魏酸；提取

通脉软胶囊是由丹参、川芎和葛根等组成，临床上主要用于治疗动脉硬化、脑血栓、等心脑血管疾病。川芎具有活血行气，祛风止痛等功效。川芎用于安抚神经，正头风头痛，症瘕腹痛，胸胁刺痛，跌扑肿痛，头痛，月经不调，经闭痛经，风湿痹痛等。《日华子本草》记载“：治一切风，一切气，一切劳损，一切血，补五劳，壮筋骨，调众脉，破症结宿血，养新血，长肉，鼻洪，吐血及溺血，痔瘘，脑痈发背，瘰疬瘿赘，疮疥，及排脓消瘀血。”川芎主成分为藁本内酯（ligustilide）、3-丁K内酯（3-butylphthalide）、香桧烯（sabinene）、川芎内酯（sankyunolide）、川芎酚（chuanxingol）、盐酸三甲胺、盐酸胆碱、L-异亮氨酰-L-缬氨酸酐等。本实验以阿魏酸为指标对通脉软胶囊提取工艺进行研究并对通脉软胶囊的含量测定方法进行研究。

1 仪器与试药

Synergy 超纯水系统（默克化工技术（上海）有限公司）；XB220A电子分析天平（上海天美天平仪器有限公司）；CPX8800-C必能信超声波清洗器（必能信超声（上海）有限公司）；平轩科仪DC0515低温恒温槽（上海平轩科学仪器有限公司）；AKTAmicro system 液相色谱系统（通用电气医疗集团生命科学部）；日立UH5300双光束紫外可见分光光度计（日立高新技术公司）。阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所提供）。乙腈（上海杰星生物科技有限公司）；甲醇（上海杰星生物科技有限公司）；乙醇（武汉唐氏丰禾化工有限公司）；磷酸二氢铵溶液（上海思域化工科技有限公司）；三乙胺（武汉唐氏丰禾化工有限公司）；冰醋酸（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）；磷酸（武汉唐氏丰禾化工有限公司）。

2 正交试验设计

选择提取次数、加水倍数和提取时间作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。

3 含量测定

3.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um）；流动相以甲醇-乙腈-水-磷酸-三乙胺（2：18∶80：0.05：0.05）为流动相；检测波长为316nm；流速1.0mL・min-1；柱温：30℃。理论板数按阿魏酸铵峰计算应不得低于2000。

3.2 供试品溶液的制备

取通脉软胶囊内容物适量，精密称定，加甲酸∶甲醇（5∶95）15毫升，超声处理十分钟，过滤，滤液转移至25毫升容量瓶内并用甲酸∶甲醇（5∶95）定容，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

3.3 对照品溶液的制备

分别精密称取阿魏酸对照品0.5mg，置25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

3.4 标准曲线的制备

将浓度为5μg/ml，10μg/ml，20μg/ml，40μg/ml，80μg/ml，160μg/ml的对照品溶液分别吸取20μL注入HPLC，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值A为纵坐标，绘制标准曲线。试验表明，阿魏酸对照品在5～160μg/ml范围内线性关系良好。

3.5 精密度试验

依照3.3项下制备对照品溶液，精密吸取阿魏酸对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.66%。结果表明，本实验精密度良好。

3.6 重现性试验

分别称取样品6份，分别依照3.2项下供试品制备方法制备供试品，按含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值为0.71%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

3.7 稳定性试验

依照3.2项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，0.5，1.0，1.5，2.0小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品阿魏酸峰面积积分值的RSD为0.65%。结果表明阿魏酸至少在2小时内稳定。

3.8 回收率试验

取已知含量的同一批供试品各6份，分别精密添加一定量的阿魏酸对照品，测定含量，计算回收率。平均回收率为99.5%，RSD为0.81%。

3.9 专属性试验

依照处方取除川芎，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照3.2项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在阿魏酸出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

4 讨论

实验分别考察甲醇-乙腈-水-磷酸-三乙胺（2：18∶80：0.05：0.05）；0.05moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.02）；乙腈-水-冰醋酸（9：92：0.5）；水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01）；乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80）不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-水-磷酸-三乙胺（2：18∶80：0.05：0.05）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-水-磷酸-三乙胺（2：18∶80：0.05：0.05）为流动相。通脉软胶囊以阿魏酸为指标，最佳提取工艺为连续提取3次，第一次提取加入8倍量水，浸泡10分钟，煎煮30分钟，第二次提取加入8倍量水，煎煮30分钟，第三次提取加入8倍量水，煎煮30分钟。本工艺稳定、可行、收率高，测定方法准确。

参考文献

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