马钱子碱脂质体在大鼠体内的药物动力学研究

摘 要:目的:比较马钱子碱脂质体与游离药物溶液的药物动力学。方法:大鼠尾静脉给药,以士的宁为内标,用HPLC法测定大鼠血浆中马钱子碱的浓度,用3p97程序拟合房室模型并计算药物动力学参数。结果:马钱子碱脂质体大鼠尾静脉单次给药血药浓度经时曲线符合三室模型,而游离马钱子碱溶液符合二室模型。与游离药物相比,马钱子碱脂质体的AUC(增加3.75倍)、CL、T1/2(延长了4.78倍)等药动学参数有显著改善。结论: 马钱子碱脂质体具有比马钱子碱溶液更为理想的药物动力学性质。

关键词:马钱子碱;脂质体;药物动力学

中图分类号:R285 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2010)01-0069-03

Pharmacokinetic Study of Brucine Liposomes in Rats

ZHANG Ting1,CHEN Jun1,WANG Wei1,FANG Yun2

(1.Pharmacy School of Nanjing University of Chinese Medicine,

Nanjing 210046,Jiangsu,China; 2.Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University,Nanjing 210008,Jiangsu,China)

Abstract:Objective: To compare pharmacokinetic properties of free brucine and liposomal brucine. Methods:Rats were intravenous injected with brucine solution or brusine liposomes. Strychnine was used as an internal control. Plasma concentrations were detected by HPLC method.The pharmacokinetic parameters were calculated and analyzed by 3p97 pharmacokinetic program. Results:The plasma concentration-time curves of brusine solution liposomes obeyed a three-compartment model, while brucine solution obeyed a two-compartment model. AUC, CL, T1/2 and some other parameters of brucine liposomes were significantly improved. Conclusion:Compared with brucine solution, the brucine liposomes possess more satisfactory pharmacokinetic characteristics.

Key words:Brucine;liposome;pharmacokinetics

脂质体作为一种新型载体,可以明显改善药物的体内动力学特性和组织分布,达到靶向和缓释的效果。马钱子碱(brucine)是中药马钱子的主要有效成分之一,具有镇痛、抗炎、抗肿瘤等药理活性[1],但同时具有比较强烈的中枢神经毒性,严重限制了其临床应用与制剂开发。采用脂质体作为马钱子碱的载体能够实现减毒增效。如马钱子碱脂质体的抗肿瘤药效已经被证明显著高于马钱子碱溶液[2]。

药物动力学可以定量地描述中药有效成分进入机体后的吸收、分布、代谢和排泄等过程的动态变化规律,对于指导临床用药发挥着积极的作用。本实验通过比较马钱子碱溶液与脂质体在大鼠体内的药物动力学性质,初步阐述其体内过程,为马钱子碱脂质体的进一步研究开发打下基础。

1仪器与材料

1.1 仪器

岛津LC-20A高效液相色谱仪,N2000色谱工作站;TDL80-2B型离心机(上海安亭科学仪器厂);TGL-16G型高速离心机(上海安亭科学仪器厂);WH-3微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂);BS124S电子天平(德国赛多利斯公司) 。

1.2 试药

马钱子碱,日本和光纯药工业株式会社,批号:059-17;士的宁,中国药品生物制品检定所,批号:110705-200306;乙腈,色谱纯,美国TEDIA公司。庚烷磺酸钠,山东禹王实业有限公司禹城化工厂,批号:2006092702。

PBS(pH=7.4)的配制,磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠。

1.3 实验动物

雄性SD大鼠,体重230~280g,上海斯莱克实验动物有限公司提供,合格证号SCXK(沪)2007-0005。

2方法与结果

2.1药物的配制

2.1.1马钱子碱溶液的配制以pH7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)作为溶剂,配制1mg/mL马钱子碱溶液。

2.1.2马钱子碱脂质体的制备按重量比6∶1称取卵磷脂和胆固醇,加入无水乙醇,适当超声使其溶解,以5 mL/min的速度注入磁力搅拌的硫酸铵溶液中,减压蒸发除去乙醇,探头超声匀化后,PBS透析除去外水相硫酸铵,制得空白脂质体。取空白脂质体加入马钱子碱,水浴振荡,即得浓度为1.75mg/mL马钱子碱脂质体。凝胶柱层析法[3]测得其包封率为80%。

2.2实验方法

2.2.1色谱条件色谱柱为PhenomenexC18(250mm×4.60mm,5μm)和汉邦C18 预柱;流动相:乙腈-0.01mol/L磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合(用10%磷酸调pH值2.8)(24∶76);检测波长:264nm;流速:1.0mL/min;柱温:35℃;进样量:20μL。

2.2.2血浆样品的处理吸取血浆置10mL尖底离心管中,加内标(10μg/mL士的宁甲醇液)20μL,加氨水50μL,涡旋30s,再加氯仿2.5 mL,涡旋3 min,超声20min,静置1h,4000r/min离心5min,收集下层液,上层液再加氯仿1mL,重复以上操作,合并两次下层液,于50℃水浴上用氮气吹干,100μL甲醇溶解,12000r/min离心10min,取上清液进样。

2.2.3药动学实验取12只SD大鼠,随机分成两组,每组6只。分别给予马钱子碱溶液、马钱子碱大豆磷脂脂质体。按2.5mg/kg剂量经大鼠尾静脉推注,给药前和给药后5,10,20,40,60,90,120,180,240,360,480min分别经眼眶采血,4000rpm分离血浆,-20℃冷冻保存。按照“血浆样品处理项下”处理后,用HPLC分析求算血浆药物浓度。

2.2.4 数据分析实验所得大鼠血药浓度数据用3P97药物动力学程序处理拟合房室模型并计算药物动力学参数,参数之间进行t检验比较统计学差异。

2.3 结果

2.3.1 方法的专属性图1 A、B、C分别为大鼠空白血浆、空白血浆加入马钱子碱和士的宁的标准血样、大鼠静脉注射给药后的血浆样品色谱图。结果表明,大鼠血浆中内源性物质不产生干扰。

2.3.2 精密度配制成高、中、低4个浓度(9.6,1.92,0.48,0.096μg/mL)的马钱子碱血浆样品,各浓度样品处理后日内重复测定5次,并连续测定5天,每天1次,计算日内、日间精密度,结果见表1。

2.3.3 回收率配制9.6,1.92,0.48,0.096μg/mL质控血浆各3份,处理后进行分析,其马钱子碱峰高与未经提取的相同量对照品(甲醇液)的峰高比较,得马钱子碱的绝对回收率;另将马钱子碱与士的宁峰高比带入标准曲线,计算测得药物浓度,与实际加入量比较,考察样品的方法回收率,结果见表2。

2.3.4 稳定性经过反复冻融,结果绝对回收率分别为95.91%～90.45%,表明血浆经过冻融后的稳定性良好。

2.3.5 药物动力学研究 (1)血药浓度经时曲线:马钱子碱脂质体以及马钱子碱溶液经大鼠尾静脉注射给药后的血药浓度经时曲线见图2。

(2)房室模型拟合:将血药浓度数据用3p97药物动力学软件进行拟合,结果表明,经大鼠尾静脉注射(2.5mg/kg)马钱子碱脂质体及马钱子碱溶液后,脂质体在大鼠体内均符合三室模型,而溶液符合二室模型。

(3)药物动力学参数:3p97药物动力学软件采用统计矩方法计算药物动力学参数,如表3。可见与马钱子碱溶液相比,马钱子碱脂质体的AUC增加3.75倍(P

3讨 论

王琳等[4]比较了马钱子碱溶液和马钱子碱脂质体在家兔体内药代动力学,结果表明,马钱子碱脂质体家兔耳静脉单次给药符合三室模型,而游离马钱子碱溶液符合二室模型。马钱子碱脂质体AUC较游离马钱子碱溶液增长了2.5倍。本文的研究结果发现,马钱子碱脂质体在大鼠体内也符合三室模型,游离溶液符合二室模型;而将其制成脂质体后,AUC为游离溶液的3.75倍,T1/2延长了4.78倍;CL、MRT等其他药物动力学参数也有显著改善。也就是说本文有关房室模型拟合的结果重现了前文报道的结果,且本文制备的马钱子碱脂质体改善体内药物动力学性质的结果更加显著。

参考文献

[1] 徐金华,陈军,蔡宝昌.马钱子碱的研究进展[J].中国新药杂志,2009,18(3):213-216.

[2] 邓旭坤,蔡宝昌,吕晓宇,等.马钱子碱及其脂质体对移植性荷瘤小鼠抗肿瘤作用的对比研究[J].中草药,2006,27(3):389-394.

[3] 陈军,蔡宝昌,胡敏敏,等.马钱子碱脂质体包封率测定方法的考察[J].南京中医药大学学报,2007,23(6):371-373.

[4] 王琳,蔡宝昌,杨欢,等.马钱子碱溶液和马钱子碱脂质体在家兔体内药代动力学比较[J].南京中医药大学学报,2006,22(3):165-167.