厚朴配方颗粒药效学评价方法初探

[摘要] 以传统水煎剂为参照、以厚朴干预溃疡性结肠炎（UC）大鼠为代表，探讨中药配方颗粒药效学评价方法的可行性。首先应用红外光谱法，明确厚朴传统水煎剂、不同厂家配方颗粒药用成分相似度。采用UC大鼠模型，以水煎剂为参照，给予不同剂量、不同厂家厚朴配方颗粒，观察UC大鼠疾病活动指数（DAI）、结肠黏膜损伤指数（CMDI）及组织病理学变化、血清一氧化氮（NO）、血浆内皮素（ET）、结肠P物质（SP）和血管活性肠肽（VIP）的含量。通过比较其对UC大鼠的干预作用，探讨三九、天江2种厚朴配方颗粒药效学有无差异，来求证厚朴配方颗粒药效学评价方法的可行性。结果显示厚朴配方颗粒与传统水煎剂药效作用相近。不同厂家厚朴配方颗粒对UC大鼠药效学比较，无统计学差异。实验表明以中药复方为基础，通过拆方明确各药物作用靶点，选取传统水煎剂为参照，对相应配方颗粒进行药效学等效性比较，此方法可避开有关配方颗粒单煎与共煎的争议，能够对配方颗粒的药效作用给予客观评价，证实该方法具有可行性。

[关键词] 溃疡性结肠炎；厚朴；配方颗粒；药效学

[收稿日期] 2013-10-14

[通信作者] 唐方，教授，博士生导师，研究方向为中医消化疾病临床及药理学研究，Tel：（022）60363599，E-mail：

[作者简介] 马露，硕士研究生，Tel：18222703031，E-mail：

中药配方颗粒是一种有别于传统中药饮片的新型制剂，通过现代制药技术，将传统饮片经过提取、浓缩、分离、干燥、制粒、包装等环节，而制成的单味中药制剂，与饮片相比具有独特的优势，如服用简便，便于携带储存，便于调配，起效快，工艺稳定等，虽然存在价格偏高，质量标准不统一，产品规格不统一的不足，临床已推广并使用，但中药配方颗粒与传统中药饮片在药效学方面是否等效？如何评价配方颗粒临床疗效？至今是临床工作者关注的焦点。目前影响配方颗粒药效学评价的瓶颈在于：①复方汤剂在合煎中可起到增效、解毒，提高生物活性作用，配方颗粒此过程缺如。②缺乏统一评价工艺优劣的成分含量测定方法；质量标准注重成分种类、缺乏含量测定。③提取方法的差异，使配方颗粒与传统饮片的临床等量、等效关系存在较大差异[1]。对于此新生事物给予全面否定？抑或错位应用？是目前争议的焦点。因此客观评价配方颗粒是目前解决争议的关键所在。

大量的研究证实[2]：坚持化学成分研究和药理研究相结合，是科学阐明中药复方疗效的关键；然而由于中药复方药效成分群的复杂性，迄今为止，国内外尚未能对其进行明确阐述。因此通过对药效药理明确的复方进行药味拆分，选择有效成分种类与含量明确的单味水煎剂作为单味配方颗粒的阳性对照，进行药效学评价，可以规避群药共煎环节，从而使配方颗粒药效得到客观评价。

课题组前期实验[3-8]采用UC模型证实，胃肠安丸能够减轻UC大鼠结肠黏膜损伤，缩小溃疡面积；参与UC细胞因子网络调控；抑制炎性递质释放，减轻肠道炎症反应。增强结肠黏蛋白表达及硫酸化程度，促进肠黏膜修复，保护肠道屏障参与调节改善胃肠动力及内脏感觉异常。其中厚朴主要功效为燥湿化痰、下气除满，是胃肠安丸对实验性UC大鼠免疫调节作用的有效物质基础。为分解行气止痛药物中的有效物质，本课题首先选择化学成分明确、药效机制得到公认的单味中药——厚朴作为代表药物。药理实验证实[9]：其主要成分厚朴酚、和厚朴酚均具有抗溃疡、抗氧化、抗炎等作用。

选取三九医药股份有限公司和江阴天江药业有限公司生产的厚朴配方颗粒作为本实验的代表药物。通过红外光谱检测二者与传统水煎剂特征峰的相似度，分别为r=0.749 4，0.798 5，配方颗粒与传统水煎剂（r=1.000 0）成分相似度差别较大，见图1。提示：配方颗粒多成分的保留，与传统水煎煮提取的成分保留存在明显差异，这种差异对药效学是否有影响是急需探讨的。本次实验对前期实验进行深入研究，采用UC模型，通过比较厚朴水煎剂、配方颗粒干预溃疡性结肠炎的作用，客观评价现代中药配方颗粒与传统饮片药效学是否具有等效性，探讨此方法对配方颗粒药效学评价的可行性。

1 材料

1.1 动物 清洁级Wistar雄性大鼠64只，平均体重（200±20） g，许可证号SCXK（军）2009-003，均购于中国人民军事医学科学院卫生学环境医学研究所动物实验中心，实验室为清洁级环境，实验大鼠适应性平衡饲养3 d后用于实验。

1.2 药品与试剂 厚朴饮片购自安徽亳州市中药饮片厂，由天津医科大学总医院中药房提供。厚朴配方颗粒分别由三九医药股份有限公司、江阴天江药业有限公司提供。5% 2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）购自美国Sigma公司；无水乙醇（色谱纯）购自天津市光复科技发展有限公司；便潜血（OB）试剂购自珠海贝索生物技术有限公司；10%水合氯醛购自天津医科大学总医院；10%甲醛购自天津大茂化学试剂厂；一氧化氮试剂盒（硝酸酶还原法）购自南京建成生物工程研究所；大鼠内皮素（ET）酶联免疫分析试剂盒购自天津沃瑞元生科技有限公司；大鼠血管活性肠肽酶联免疫分析试剂盒购自天津楠梓商贸有限公司；大鼠P物质酶联免疫分析试剂盒购自天津楠梓商贸有限公司。

1.3 仪器 全自动酶标仪（美国Beck man公司）；TL-18M台式高速冷冻离心机（上海市离心机械研究所）；SHY-2A水浴恒温振荡器（江苏金坛市金城国胜实验仪器厂）。

2 方法

2.1 分组 将64只清洁级Wistar雄性大鼠随机分成8组，每组8只。分别为空白对照组（N）、模型组（C）、中药饮片（Y）高、低剂量组、三九（S）高、低剂量组、天江（T）高、低剂量组。

2.2 造模 参考文献的造模方法[4]，大鼠造模前禁食24 h自由饮水。模型组腹腔注射10%水合氯醛3 mL·kg-1，麻醉后，倒悬位，将8号导尿管石蜡后自缓慢插入直肠约8 cm，向导尿管中缓慢灌注混合液4 mL·kg-1，继而注入0.5 mL空气后将导尿管缓慢提出肠道，为防止药液外溢，将实验大鼠取头低臀高位仰卧归笼至自然苏醒。

2.3 疾病活动指数（DAI）评分 于造模后第1天，每日观察并记录大鼠体重、大便性状及隐血状况，大便用便潜血（OB）试剂，按照说明书检查便隐血程度。按表1进行评分[10-11]，并观察大鼠的精神状态，活动度，皮毛光泽度，食欲等一般情况。

2.4 结肠黏膜损伤指数（CMDI）评分 模型制备第7天，实验大鼠禁食不禁水24 h，腹腔注射10%水合氯醛3 mL·kg-1，麻醉处死，分离至盲肠末端的结肠段，沿肠系膜纵轴剖开，4 ℃生理盐水冲洗肠内容物，迅速平铺于滤纸上。按照表2进行肉眼大体损伤评分[11-12]。

2.5 给药 模型制备第4天始，各组大鼠分别灌胃给药，空白对照组和模型组大鼠分别灌服生理盐水2 mL/只，实验组分别灌胃给药2 mL/只，每日1次，连续7 d。给药剂量3，1.5 g·kg-1·d-1。相当于人体剂量（0.15 g·kg-1·d-1）20倍（高剂量）、10倍（低剂量）。2组厚朴颗粒依据生药剂量换算，以生理盐水进行配制。

2.6 标本采集 连续给药7 d后，禁食24 h，自由饮水。经腹腔注射10%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，静置，分离血浆及血清待测；摘取自至盲肠末端的结肠组织，沿肠系膜纵轴剖开， 4 ℃生理盐水冲洗， 铝箔包被，-20 ℃冰箱保存待测；截取病变结肠组织100 mg，加入1 mL PBS（pH 7.4），制备10%结肠组织匀浆，4 ℃ 3 000 r·min-1离心，取上清液-20 ℃保存，待测。SP，VIP操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

2.7 组织病理标本制备 截取结肠组织病变明显部位0.5～1.0 cm，10%中尔马林固定，常规脱水，包埋，切片，HE染色，光镜下观察结肠组织病理形态。

2.8 统计学处理 本实验应用SPSS 17.0统计软件包进行数据分析处理，所得结果用±s表示，采用单因素方差分析，比较各组资料间的差异，方差齐组间两两比较采用LSD检验进行，方差不齐组间比较用Tamhane′s T2检验，P

3 结果

3.1 DAI，CMDI评分及结肠大体形态比较 对照组大鼠活动正常，皮毛光泽，饮食自如，颗粒样便，便隐血阴性，体重增加。模型各组24 h后出现体重下降，精神萎靡，倦怠少动，皮毛耸立，拱背，反应迟钝，进食减少。并均出现便溏伴隐血，肛周污染，部分出现肉眼血便。厚朴干预后，用药各组大鼠腹泻及便血状态较前减轻，体重有所增加，精神倦怠、毛耸等症状得到改善。对照组结肠黏膜光滑完整，黏膜皱襞纹理清晰，肠壁厚度均匀适中，与周围组织容易分离，未见充血水肿及溃疡点。模型组结肠黏膜糜烂坏死，有不同程度肠腔扩张、结肠明显缩短，肠壁增厚、充血水肿、散在溃疡及出血点，并发肠粘连，评分结果见表3。

3.2 组织病理学观察 光镜下，对照组腺体排列整齐，黏膜上皮完整，杯状细胞可见，细胞形态正常，未见炎性渗出；模型组黏膜上皮坏死脱落，溃疡形成，溃疡周边腺体扩张，黏膜层、黏膜下层充血水肿，肠壁各层均可见大量炎性细胞浸润。厚朴干预后，3个高剂量组结肠组织黏膜层可见杯状细胞， 溃疡面积缩小，腺体排列较为整齐，结构基本完整，黏膜下层轻度充血水肿， 少量炎性细胞浸润。而3个低剂量组肠壁各层则见大量炎性细胞浸润，散在溃疡点，肠绒毛缺失，黏膜层明显充血水肿，见图2。

3.3 各组UC大鼠血清NO、血浆ET比较 与对照组相比，模型组大鼠血清NO、血浆ET含量明显升高，2组间差异具有统计学意义（P

3.4 各组UC大鼠结肠组织匀浆SP，VIP含量比较 与对照组相比，模型组结肠组织匀浆SP，VIP含量显著性升高，差异具有统计学意义（P

4 结论

与对照组比较，UC模型组大鼠血清NO、血浆ET水平明显升高，且组间差异显著（P

红外图谱的比较显示：配方颗粒与传统水煎剂成分种类相似度

不同厂家配方颗粒成分特征峰具有明显区别，提示：伴随药物组合实验的进一步展开，药效差异必将显现。成分是药效的物质基础。单味成分的差异，预示复方组合后的差异会进一步扩大。这可能是导致共煎与单煎药效学不同的重要因素。以传统水煎剂药效学为依据，建立符合中药作用规律的成分提取方法，即建立有效成分种类与含量明确的配方颗粒质量标准，是缩小单煎与共煎药效差异的关键，因此建立统一规范的制备工艺见势在必行。

通过拆方，逐一明确各单味药物作用靶点；选取传统水煎剂型为参照，对主成分明确的对应中药配方颗粒进行药效学等效性比较的方法，可有效避开有关配方颗粒单煎与共煎药效学争议焦点之瓶颈，并可以对配方颗粒的药效作用给予客观评价。提示该方法具有可行性。

本实验初步建立了客观评价单味配方颗粒药效学的方法。由于配方颗粒多成分转移制备工艺与质量标准不一，在今后配伍及复方药效学研究中如何客观评价可能存在的更大差别。结合进一步定量分析、生物利用度研究，通过扩大实验案例，可以使目前对单味配方颗粒的药效评价，逐渐过渡为多方面综合评价体系。

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Preliminary study on pharmacodynamic evaluation method of

Houpo formula particles

MA Lu， SHAO Li-jie， TANG Fang

（1.General Hospital of Tianjin Medical University， Tianjin 300052， China；

2.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine， Tianjin 300193， China）

[Abstract] To discuss the feasibility of the pharmacodynamic evaluation method for traditional Chinese medicine（TCM） formula particles， with traditional decoction for reference and the intervention of Magnoliae Officinalis Cortex in rats with ulcerative colitis （UC）. First of all， the similarity of traditional Magnoliae Officinalis Cortex decoction and formula particles of different manufacturers was defined by using the IR fingerprint. The UC rat model was established and given Houpo formula particles of different doses and manufacturers， with the decoction for reference， in order to observe disease activity index （DAI）， colon mucosa damage index （CMDI）， pathologic changes， nitric oxide （NO）， endothdin（ET）， substance P， vasoactive intestinal peptide（VIP）. Their intervention effects on UC rats were compared to study the difference between Sanjiu and Tianjiang Houpo formula particles， in order to demonstrate the feasibility of the pharmacodynamic evaluation method for Houpo formula particles. According to the results， Houpo formula particles showed similar pharmacodynamic actions with the traditional decoction. The pharmacodynamic comparison of Houpo formula particles of different manufacturers showed no statistical significance. The experiment showed that on the basis of the TCM compounds， a prescription dismantlement study was conducted to define target points of various drugs. The traditional decoction was selected for reference in the comparison of corresponding formula particles for their pharmacodynamic equivalence. This method could avoid controversies about single or combined boiling of formula particles， and give objective comments on the pharmacodynamic effect of the formula particles. The method is proved to be feasible.

[Key words] ulcerative colitis； Magnoliae Officinalis Cortex （Houpo）； formula particles； pharmacodynamics

doi：10.4268/cjcmm20140825