肠易激综合征患者肠道菌群定量分析与意义

[摘要] 目的：了解不同类型肠易激综合征（IBS）患者和健康状况正常的人粪便中总厌氧菌群和需氧菌群及常见的4种厌氧菌和2种需氧菌的含量情况。方法：对临床上确诊的各类型IBS患者共52例和18例健康状况正常的志愿者，采集粪便标本进行总厌氧菌群和需氧菌群及常见的4种厌氧菌和2种需氧菌定量检测。结果：三种类型的IBS患者粪便中总厌氧菌群和需氧菌群数目与健康人差异明显，特别是双歧杆菌属和乳酸杆菌属明显减少（P

[关键词] 肠易激综合征；粪便；细菌；定量分析

[中图分类号] R574[文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2008）07（a）-094-03

Significance of intestinal tract normal bacteria flora quantitative analysis of IBS sufferers

ZHANG Li

(Department of Laboratory, Shenzhen Pingshan People's Hospital,Shenzhen 518118,China)

[Abstract] Objective:To study the level of total anaerobic population, total aerobic population, four kinds of anaerobes and two kinds of aerobes in excrement of sufferers of varies kinds of irritable bowel syndrome(IBS) and that of normal persons.Methods:Excrement specimens from 52 IBS sufferers of different kinds and that of 18 normal volunteers were collected, and the level of four kinds of anaerobes and two kinds of aerobes were quantified.Results:The level of total anaerobic population and total aerobic population of excrement specimens of three kinds of IBS sufferers were different significantly, particularly the level of bifidobacterium and cillobacterium(P

[Key words] Irritable bowel syndrome;Stool;Bacteria;Quantitative analysis

肠易激综合征(irritable bowel syndrome，IBS)是一种常见的以结肠症状为主要表现的功能性肠病，临床上以不能用结构或生化异常来解释的腹部不适和(或)腹痛伴排便习惯改变为特征[1]，根据排便习惯不同将IBS分为便秘型、腹泻型和混合型。近些年，其发病率快速增加，其原因除了与消化道运动异常、内脏感觉神经障碍、个体免疫、肠道感染及家族史可能有关。目前认为生活工作压力大、高强度工作、不良生活习惯等也是其发病的可能原因。由于病因和发病机制不清，临床上缺乏非常有效的治疗药物[2-5]。近年来，随着研究的深入，对IBS病因和病理生理有了新的认识，针对某一病理生理特征的治疗成了IBS治疗药物开发的方向[3-5]。流行病学相关研究显示，部分IBS患者的发病与肠道菌群紊乱有关[6-9]，且不同类型的IBS肠道菌群紊乱的表现也不相同。目前，国内细化至不同亚型IBS肠道菌群分析的研究尚少，本研究通过分析和比较不同类型的IBS肠道菌群与正常菌群的不同，以期获得对IBS有治疗作用的一种或几种特异性益生菌，为IBS治疗提供新的研究方向。

1材料与方法

1.1病例分组

便秘型IBS组 17例，其中，男性10例，女性7例，年龄16～51岁；腹泻型IBS组20例，其中，男性8例，女性12例，年龄18～45岁；混合型IBS组15例，其中，男性6例，女性9例，年龄20～45岁，三组病例临床诊断均符合罗马Ⅲ诊断标准；健康对照组18例，其中，男性9例，女性9例，年龄18～40岁，经临床体检证实身体健康，未见有肠道疾病，3个月内未服用过任何抗生素药物。

1.2罗马Ⅲ诊断标准

在最近3个月内，每个月至少有3 d出现反复发作的腹痛或不适症状。并具有下列中的2项或2项以上：①排便后症状改善；②伴随排便频率的改变；③伴随粪便性状的改变。诊断标准建立于患者至少在诊断前的6个月内出现症状，并在最近3个月持续存在，在观察期间疼痛(不适)症状的频率至少2 d/周。

下列症状可支持IBS诊断。①异常的排便频率：每周≤3次排便或每天排便>3次；②异常粪便性状：块状便（硬便）或松散便（稀水便）；③排便费力；④排便急迫感或排便不尽感；⑤排出黏液；⑥腹胀。

1.3材料

1.3.1培养基营养琼脂（计数需氧菌）， CDC（计数厌氧菌），TPY(选择性分离双歧杆菌)、KVLB（选择性分离拟杆菌）、TTC（选择性分离肠球菌）、LAMVAB（选择性分离乳酸杆菌）、伊红美蓝（选择性分离大肠杆菌）、甘露醇高盐（选择性分离金黄色葡萄球菌）。

1.3.2粪便稀释液KH2PO4 4.5 g，NaHPO4 6.0 g，L-半胱氨酸0.5 g，Tween-80 0.5 g，蒸馏水1 000 ml，8 Pa/15 min 高压消毒。

1.4粪便菌群分析方法

称取新鲜标本0.5 g，置内含几粒玻璃珠20 ml无菌带盖容器中，加入4.5 ml稀释液，充分振荡5~10 min，然后按10倍稀释法连续稀释，把稀释标本接种在各选择性培养基和非选择性培养基上，进行需氧或厌氧培养48 h，分别计数每个培养皿中菌落数，再换算为cfu/g粪便。菌落计数经涂片、革兰染色、生化鉴定确认为该菌。

1.5实验菌群

4种厌氧菌群和2种需氧菌群代表株：拟杆菌属、双歧杆菌属、肠球菌属、乳酸杆菌属和肠杆菌科、葡萄球菌属。

1.6统计学分析处理

采用t检验对实验资料进行显著性差异分析。

2结果

2.1细菌的菌落形态

2.1.1各厌氧菌菌落形态分离到4种厌氧菌的菌落形态见图1。

2.1.2各需氧菌菌落形态分离到2种需氧菌的菌落形态见图2 。

2.2各病例组菌落计数结果分析

实验结果可见，患者组粪便中需氧菌与厌氧菌菌群数，与健康组比较均有明显改变（P

3讨论

健康人的肠道中存有大量的细菌，其中厌氧菌占99％，需氧菌仅占1％，这些细菌称为正常菌群，其参与了机体对食物消化和吸收过程，增强机体的免疫力，且与衰老、肿瘤的发生和其他多种疾病有关[1]。在机体健康状况良好的情况下，机体与正常菌群之间保持着生态平衡，各微生物之间维持着稳定的比例。但一旦这种平衡受到破坏，则机体就会容易发生变化而导致疾病的出现。因此，肠道中的细菌菌群比例，可作为机体生理性与病理性监测的指标之一。我们的实验结果显示：IBS患者中，其粪便的需氧菌与厌氧菌菌群数，与健康组相比均有明显的改变，说明IBS患者肠道菌群明显失调，三种亚型的IBS患者虽然肠道菌群紊乱的表现不同，但是总体上表现为乳酸杆菌和双歧杆菌等有益菌菌数减少，而大肠埃希菌等有害菌菌数增加，同时，三型IBS患者还有一些条件致病菌菌数变化的不同，如本实验结果示：拟杆菌菌群数在腹泻和混合型IBS患者中明显增加；肠球菌菌落数在腹泻型IBS患者中明显增加。双歧杆菌和乳酸杆菌数量的减少或消失可削弱肠道细菌之间的生物拮抗作用，有助于肠道兼性菌等的生长。肠道大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，拟杆菌及肠球菌等细菌数量的显著增加，表明双歧杆菌和乳酸杆菌肠道定植抗力有所减弱，抵抗病原菌侵袭能力降低，易于引起感染。究其原因，可能是人类生活方式的跨越式变化，人类肠道菌群的进化程度在一定程度上已难以适应现代的生活方式，各种应激、膳食结构和进食习惯的改变都对肠道微生态平衡直接产生了不良作用，进而影响肠道正常功能。 抗生素的大量应用也是破坏胃肠道微生物菌群平衡的重要因素[2-6]。 这些因素作用的结果是导致胃肠道微生物菌群平衡偏离了潜在的有益或促进健康的细菌，如乳酸杆菌和双歧杆菌，而转向有害细菌或病原菌增加[3, 7-8]，如大肠埃希菌，最终引起肠道功能的紊乱。而IBS肠道功能紊乱的表现形式是腹泻还是便秘或是两者兼有之，可能与紊乱的肠道菌群具体组成有关。从本实验结果可见：无论是何种亚型的IBS患者均存在有益菌的减少，所以立足于精确的鉴定有益菌的具体种甚至亚种，即获得对IBS治疗有效的特异性菌株，这可能是治疗IBS行之有效的方法。

[参考文献]

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（收稿日期：2007-04-11）

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