HPLC法测定印度蛇根木提取物中利血平含量

摘 要 目的：建立HPLC法测定印度蛇根木提取物中利血平含量的方法。方法：采用Hypersil ODS C18色谱柱，流动相为乙腈-50 mmol/L磷酸氢二钠(用磷酸调pH值为3.0左右)(45∶55)（V/V），流速为0.7 mL/min，检测波长268 nm。结果：利血平对照品线性范围8.0～50.0 μg,r=0.999 9,加样回收率为97.58%,RSD为0.62%(n=5)。结论：本方法准确、可靠，可以用作印度蛇根木提取物中利血平的定量分析方法。

关键词 高效液相色谱 印度蛇根木 利血平

中图分类号：R97 文献标识码：B 文章编号：1006-1533(2008)05-0222-02

印度蛇根木来源于夹竹桃科植物蛇根木的根，利血平是其有效成分（Reserpine）。利血平主要作为降压药的原料，在临床上已得到验证［1］，并且被《中国药典》收载［2］。利血平主要功能是降低血压、减慢心率，对中枢神经系统具有持久性的安定及抗抑郁作用［3］，是目前临床应用较广泛的一种抗高血压药。为了有效控制提取物的质量，本研究建立了HPLC法测定印度蛇根木提取物中利血平的含量方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

HP1100系列高效液相色谱仪；SB2200型超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)；BP211D型电子天平(德国赛多利斯公司)。

1.2 试剂

提取物粉末:桂林莱茵生物制品有限公司提供；利血平对照品从中国药品生物制品检定所购买；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Hypersil ODS C18 （250mm×40mm，5μm），流动相：乙腈-50 mmol/L磷酸氢二钠溶液（用磷酸调pH值至3.0）（45∶55）（V/V）；流速：0.7 mL/min；柱温：25 ℃；检测波长：268 nm；进样量：5 μL。

2.2 标准曲线的绘制

精密称取利血平对照品4 mg，用0.1 mol/L磷酸水溶液溶解，定容至50 mL，取1.0、2.0、4.0、8.0 mL分别置于10 mL容量瓶中，用磷酸水溶液定容至刻度，分别精密吸取

5 μL，注入液相色谱仪中，以峰面积积分值为纵坐标，以利血平浓度为横坐标作标准曲线。其回归方程如下：Y=265.430 5X－99.490 5 , r=0.999 9,利血平在8.0～50.0 μg范围内线性关系良好。利血平对照品在所采用的色谱条件下，无杂峰干扰，峰形良好。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取印度蛇根木提取物粉末适量（相当于利血平5 mg），置于50 mL容量瓶中，加0.1 mol/L磷酸水溶液，于超声波水浴中超声15 min，取出，放冷至室温，定容至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，即为供试品溶液。取5 μL注入高效液相色谱仪。利血平样品峰形对称，无干扰。

2.4 精密度试验

精密吸取上述对照品溶液，重复进样5次。RSD为1.22％，表明方法具有良好的精密度。

2.5 重现性试验

取同一批印度蛇根木提取物样品分别称取5份，依法测定利血平的含量，RSD为1.17％，表明方法具有良好的重现性。

2.6 稳定性试验

将样品溶液在24 h内每隔2～3 h测定1次，其RSD为0.97％，表明样品溶液中利血平在24 h内测定保持稳定。

2.7 加样回收试验

采用加样回收法，取已知含量的印度蛇根木提取物适量分别添加利血平对照品，按“供试品溶液制备”项下的方法操作，测得回收率为97.58％，RSD为0.62％（n＝5）。

2.8样品测定

取不同批号的印度蛇根木提取物粉末，按2.3项下方法进行含量测定，结果见表1。

3 讨论

关于HPLC法测定印度蛇根木提取物中利血平含量的报道作者尚未见过。本研究采用乙腈-50 mmol/L磷酸氢二钠溶液（用磷酸调pH值至3.0）（45∶55）（V/V）为流动相，利血平能与其它组分达到基线分离。

在提取利血平时，作者对比了0.1 mol/L磷酸水、水、甲醇、乙醇等溶剂，结果采用0.1 mol/L磷酸水提取溶媒，其它色谱条件同前，测得利血平含量最高，杂峰较少。

另外，本研究考察了不同超声提取时间(15、30、45 min)所得利血平含量，结果基本一致，故选用超声提取15 min的方法。

本方法准确、可靠、可以用作印度蛇根木提取物中利血平的定量分析方法。

参考文献

1 张兰.高血压危象救治中利血平的应用问题［J］.云南医药，1994，15(3)168-170.

2 国家药典委员会.中国药典(2000年版二部).304.

3 金光亮,周东丰.慢性利血平抑郁模型大鼠脑内游离钙离子、钙调素和环核苷酸含量的变化［J］.中华精神科学，1997，30（2）：67-69.

(收稿日期：2008-01-31)