豆渣中总黄酮提取工艺的优化

摘要：本试验以大豆豆渣为原料，通过单因素试验和正交试验，对豆渣总黄酮提取工艺中的乙醇浓度、料液比、温度、时间等因素进行探讨，确立出最佳条件。试验结果表明：采用95%的乙醇溶液为提取剂，固液比1：20，在80℃下浸提三次，每次浸提5h，得率为2.01mg/g。

关键词：豆渣；总黄酮；提取工艺；优化

中图分类号： TQ461 文献标识码： A 文章编号： 1674-0432（2013）-10-19-1

1 材料及方法

1.1 主要材料、仪器及试剂

材料：豆渣（购于九站）；主要试剂：芦丁标准品（中国药品生物制品鉴定所）；主要仪器：UV-1600紫外-可见分光光度计；脂肪抽提器；101A-2型数显电热鼓风干燥箱；高速万能粉碎机；电热恒温水浴锅。

1.2 试验方法

（1）原料预处理：将豆渣在烘干箱内烘干，然后用万能粉粹机粉碎，再过40目筛，用沸程为60℃～90℃的石油醚脱脂18h，待石油醚挥发后备用。（2）大豆总黄酮的提取：准确称取5g试样，用滤纸包好，放进索氏抽提器中，加入一定量的乙醇后，在一定的温度水浴中加热回流提取，把回流液倒入蒸馏瓶中进行减压蒸馏至一定刻度，装于容量瓶中，得待测液，放于冰箱中待用。（3） 大豆总黄酮的测定：标准品溶液（0.500mg/mL的芦丁标准溶液）；绘制标准曲线：取芦丁标准品溶液0.00，0.50，0.75，1.00，1.25，1.50 mL，用95%乙醇定容至25 mL，在364nm处测吸光度。以浓度为横坐标轴，吸光度值为纵坐标轴，绘制标准曲线，得回归方程为A=31.740C+0.004，相关系数r=0.9982（n=5）。取（2）中制备的提取液10 mL置于25 mL容量瓶中，测定吸光度值，根据回归方程计算样品中总黄酮的提取率。（4） 提取的正交实验：用L934正交表进行实验，得到优化条件。（5） 数据处理：数据统计采用SPSS17.0进行统计分析。

2 单因素的确定

2.1 料液比对提取效果的影响

本试验选用1：5、1：10、1：15、1：20四种料液比观察其对提取率的影响。结果表明，料液比处于1：10与1：15之间，提取效果随料液比的增大而增强；当料液比超过1：15时，提取效果没有显著变化。因此1：15为最佳料液比，选择料液比1：10、1：15、1：20为较优水平。

2.2 提取时间对提取效果的影响

本试验测定了3h、4h、5h、6h四种提取时间对提取率的影响。结果表明，当沸腾时间过短时，提取不完全；当提取时间过长时，容易导致部分黄酮类化合物分解，使总黄酮提取率降低，因此，以5h为最佳提取时间，选择提取时间为4h、5h、6h作为正交实验较优水平。

2.3 提取温度对提取效果的影响

本试验观察了提取温度在70℃～100℃间对提取率的影响。结果表明在70℃～80℃大豆总黄酮的提取率随温度的升高而增大。若温度进一步提高，大豆总黄酮的活性可能被破坏，其提取率也会随之下降。因此，选取70℃～90℃范围为正交实验最佳温度范围。

2.4 乙醇浓度对提取效果的影响

本试验采用提取剂为65%，75%，85%，95%四种乙醇浓度，观察其对提取率的影响。结果是随着乙醇浓度升高，总黄酮的得率增大，当超过85%时，随着乙醇浓度升高，总黄酮得率明显减小，在85%时达到最高值，所以，乙醇浓度为85%为最佳。选择最佳组合为：75%，85%，95%。

3 正交试验

本研究利用乙醇作为提取溶剂，这样可避免有毒、有害物质的残留。通过对提取过程中乙醇浓度、提取时间、提取温度、料液比等影响因素进行单因素及正交试验，确定出最佳工艺参数。

对表3-2的正交结果进行极差分析可知，各因素极差值大小顺序为RA>RB>RC>RD，四个因素对豆渣总黄酮得率的影响依次为A>B>C>D，其中乙醇浓度的影响最大，料液比的影响最小。分析得知各因素的最优水平组合为A3B2C2D3，即乙醇浓度95%，料液比1：20，提取温度80℃，提取时间5h。

4结论

通过单因素和正交实验设计，在相同试验环境，操作条件下以不同条件提取大豆豆渣中总黄酮，确定了大豆总黄酮的最佳提取工艺；提取温度80℃，提取时间5h，乙醇浓度95%，料液比1：20，并通过实验结果分析，确定了因素的主次：乙醇浓度>提取时间>料液比>提取温度。

根据单因素优化试验和正交试验结果可知，乙醇浓度和提取时间，对总黄酮的提取率有显著性影响，提取温度和料液比有较小影响。

作者简介：王经伟，男，就职吉林市孤店子畜牧站，从事畜牧兽医工作。