舒肝颗粒毒理学实验研究

摘要：目的：观察舒肝颗粒对小鼠的急性毒性和对大鼠的长期毒性反应，以评价该药物临床用药的安全性。方法：急性毒性试验用小鼠以最大浓度和最大客积24h内灌服3次舒肝颗粒，然后连续观察7天。长期毒性试验将大鼠分4组，分别以24、12、6.0g/(kg・d)3个剂量组和等容积生理盐水组连续灌服12周，处死大鼠，测大鼠体重、血液学、血液生化学、脏器系数各指标，脏器组织病理学变化。结果：小鼠无1例因药物导致死亡，其最大耐受量为96g/(kg・d)，相当于成人的224倍。长期毒性结果显示，各组大鼠体重增长正常，脏器系数、血液学指标和血液生化学指标无显著差异，脏器组织未发现因药物导致病理学改变。结论：中药舒肝颗粒对受试动物未有明显毒性作用，可安全用于临床。

关键词：舒肝颗粒；毒性；动物试验；中药；小鼠；大鼠

中图分类号：R285.1　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2007)09－1862－04

舒肝颗粒是由泸州医学院附属医院消化科根据中医中药理论，结合多年的临床经验研制而成的纯中药制剂，由黄芪、丹参、鳖甲、茵陈等11味中药组成，具有补脾益气、活血通络功效，对酒精性肝病具有良好的防治效果，已在舒肝颗粒灌胃对酒精性肝病大鼠模型动物药效学试验中得到证实，本文对其进行毒理学实验研究，现将结果报道如下。

1　材料和方法

1．1　试验药物

舒肝颗粒成品，由泸州医学院附属医院中医研究所提供，批号20041225，每10g相当于20.25g生药。

1．2　动物及实验条件

KM系小鼠30只，体重为18－22g，雌雄各半：Wistar系大鼠80只，体重130－180g，上述为封闭式、普通级动物，均由泸州医学院动物科提供。动物分笼饲养于清洁的笼架上，自动供水，全价颗粒饲料，室温(28±2)℃，相对湿度为(70±5)％。

1．3　仪　器

电子天平，批号200101064，沈阳龙腾电子称量仪器有限公司；Leitz1516切片机，德国；motic BA300光学显微镜；全自动生化仪，Olympus2700，日本；SAGO全自动血凝仪，法国；雅培3700血细胞分析仪，美国。

1．4　方　法

1．4．1　小鼠急性毒性试验　将20只KM小鼠(雌雄各半)，分2箱笼养，让其自由活动，以适应环境。用药前禁食不禁水12h。将舒肝颗粒碾碎，用细孔网筛筛成粉末，用蒸馏水配成80％混悬液，每毫升相当于原生药1.52g，以能抽取的最大容积0.4mL/10g灌胃。24h灌胃3次，每8h灌胃1次，然后自由进食进水，观察7天，同时记录小鼠用药前后的皮毛、活动状态、饮食、排泄情况，以死亡为最终观察指标，以测得其最大给药量。

1．4．2　小鼠长期毒性试验　将Wistar大鼠80只随机分为4组，每组20只，雌雄各半，分别给予舒肝颗粒24g、12g、6.0g(kg・d)及等容积生理盐水，每天灌胃给药2次，给药体积为2mL/100g，连续给药12周，每周称体重1次。12周后处死一半大鼠，观察血液细胞学：红细胞计数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)、白细胞计数(WBE)、淋巴细胞(L)绝对计数、中性粒细胞(N)绝对计数、血小板计数(PLT)；生化学检查：血浆总蛋白(TB)、血浆白蛋白(ALB)、血浆球蛋白(GLO)、总胆红素(TBIL)、血清丙氨酸氨基转换酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素(urea)、肌酐(Crea)、总胆固醇(TCH)、血糖(GLU)。对重要脏器心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、、卵巢进行称重并计算脏器系数，对心、肝、脾、肺、肾上腺进行肉眼观察并做常规HE染色病理学检查。另一半动物停药观察2周后再处死，作上述同样的指标检测。

1．5　统计学处理方法

应用SPSS11.5通用软件进行分析，实验数据以x±s表示，采用方差分析，t检验。

2　结　果

2．1　急性毒性试验

以最大浓度和最大容积舒肝颗粒灌服小鼠，连续观察同样时间后，发现最初1－2天内小鼠的精神、活动状态差、喜群集、进食进水少、大便稀溏(4只小鼠因操作导致窒息死亡)，以后小鼠大小便、精神状态、饮食转为正常，皮毛光泽，无一例因药物中毒而致死亡，由此测得该药物的最大给药量为96g/(kg・d)，相当于成人用量的224倍[成人临床用量为0.428g/(kg・d)]。

2．2　长期毒性试验

2．2．1　一般状况及死亡情况　在整个用药过程中和停药观察期间其摄食、皮毛、排泄、行为活动等均无异常改变，与对照作用于比较无明显不同。

2．2．2　对大鼠体重的影响　各组动物体重均有增长，各剂量组与对照组均值比较无显著差异(P＞0.05)，3个剂量组间均值比较无显著性差异(P＞0.05)。

2．2．3　对大鼠体重的影响　各组动物体重均有增长，各剂量组与对照组均值比较无显著差异(P＞0.05)，3个剂量组间无显著差异(P＞0.05)；停药14天后与用药12周末无差异。

2．2．4　对大鼠血液生化学的影响　舒肝颗粒对大鼠肝功能：各剂量组用药12周末与对照组比较无显著差异(P＞0.05)；各剂量组停药14天后除血清AST、ALT水平明显比用药12周末高外(P＜0.05)，其余指标无差异。

舒肝颗粒对大鼠肾功能和血清ALP TCH GLU的影响：各剂量组与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)；各剂量组与对照组比较均值无显著差异(P＞0.05)。

2．2．5　对大鼠重要脏器系数的影响　各剂量组间心、肝、肾、肾上腺脏器系数比较无显著性差异(P＞0.05)；各剂量组与对照组比较均值无显著性差异(P＞0.05)。

各剂量组间脾、肺脏器系数均偏高，与对照组有显著差异；停药14天后观察肺的脏器系数比药12周末低(P＜0.05)，而脾则无明显差异(P＞0.05)。各剂量组间、卵巢脏器系数比较无差异，与对照组比较也无差异。

2．2．6　病理组织学检查　用药12周末和停药14天后处死大鼠，各剂量组间心、肝、脾、肺、肾、肾上腺重要脏器外观色泽及质地正常。HE常规病理检查发现心、肝、肾、肾上腺组织结构正常，无细胞水肿、变性；脾在用药组脾小体增多，淋巴滤泡生发中心扩大；大部分肺的支气管无充血、水肿，纤毛上皮无脱落，肺泡结构正常，仅高剂量组2例在用药12周末有小叶化脓性肺炎，中剂量组有1例小叶化脓性肺炎，停药14天后则没有上述改变，另外用药组镜下肺内巨噬细胞增多。

3　讨　论

舒肝颗粒是由黄芪、丹参、鳖甲、茵陈等11味中药组成的纯中药复方合剂，处方中各药材均是广泛使用的传统中药材，符合国家法定标准，无毒性药材，无十八反、十九畏等

配伍禁忌，原药材加工、炮制、提取时未经化学处理，该复方合剂为制备工艺稳定、符合临床试用质量标准规定的中试样品，每10g相当于原生材20.25g。以往动物药效学试验用1g/(kg・d)分2次灌胃对酒精性肝病大鼠模型证实能防止肝细胞脂肪变性、坏死和肝纤维化。急性毒性以能配制最大浓度和最大容积舒肝颗粒灌服小鼠，连续观察7天后，无一例因药物中毒而致死亡，由此测得该药物的最大给药量为96g/(kg・d)该最大给药量相当于成人用量的224倍。由于急性毒性试验受到药物的浓度和小鼠所能容纳的胃容积的限制，本试验难以求得LD50，而药理学上通常将药物5％的致死量(LD5)与95％有效量(ED95)之间的距离来衡量药物的安全性。而该药物在动物试验以最大给药量难以出现药物中毒死亡，说明临床使用量安全系数较高。长期毒性试验结果显示该制剂对动物的饮食、排泄、精神状态、行为活动无影响，体重也随着实验进程而增加，说明该药对大鼠生长发育无抑制作用。在毒理学中，脏器系数可以作为了解脏器生长发育以及病理损伤情况，一般认为脏器系数下降意味着该器官萎缩、退行性变或功能减弱；脏器系数加大，可能是该器官充血、水肿、增生性肥大性变化或功能增强。各组心、肝、肾、肾上腺、、卵巢脏器系数与对照组比较亦无显著差异；脾的脏器系数偏高，各处理组无论是用药12周还是停药14天后均与对照组有显著差异，表明该药对大鼠脏器系数的影响是不可逆的，而病理学检查存在脾小体增生，生发中心扩大。国内董淑英认为与免疫毒性有关，但是否真有免疫毒性还是增强机体免疫力，需作进一步的实验证实。肺的脏器系数在用药12周后各处理组比对照组高，但停药14天后与对照组比较无显著差异，说明该药对大鼠肺脏器系数影响是可逆的。血清TP、ALB、GLO、TBIL、AST、ALT均与文献报道的范围相同，血清TP、ALB、GLO、TBIL与对照组比较元差异，处理组之间也无差异，但各处理组停药14天后ASTALT数据明显比用药3个月后高，推测舒肝颗粒可能有定的降酶作用。血清Crea、Urea、ALP、TCH、GLU水平与对照组比较无差异，表明舒肝颗粒对大鼠肾功能、血脂、血糖无毒性影响。大鼠血液学检查显示RBC、HGB、WBC、LYNEU、PLT、PT与文献报道相似，并且在各处理组与对船组之间比较无显著性差异，3个剂量组间比较无显著性差异，提示舒肝颗粒对造血系统无毒性损害。心、肝、脾、肺、肾、肾上腺重要脏器外观色泽及质地正常，HE染色病理检查未发现心、肝、脾、肾、肾上腺有因药物而导致的病理改变，但用药12W末高剂量组有2例小叶化脓性肺炎，中剂量组有1例小叶化脓性肺炎，推测其原因为：本实验大鼠为封闭群普通级动物，因此在引入实验室时就可能存在潜伏的肺部感染，动物饲养环境如气温、湿度、氨浓度以及动物饲养密度等，灌胃不同程度导致人为的吸入是肺部感染的原因。本实验病理组织学检查可见肺内的细支气管和肺泡腔中出现单核巨噬细胞增多，可能与灌胃过程中舒肝颗粒的误吸有关，作为异物颗粒，肺内巨噬细胞起着吞噬清除的作用，这和尘肺的发病机制相似。目前国内尚缺乏严格、致密的整套毒性病理学的评价规范，上述肺脏病理改变的描述尚属于探索性。舒肝颗粒急性毒性试验未导致大鼠死亡，临床使用量安全系数较高；长期毒性试验对大鼠生长发育无抑制作用，对大鼠血液学、血液生化各指标及重要脏器组织未发现因药物引起的毒性影响，说明该药是一安全性较好的药物。