HPLC测定荣心丸中的5种化学成分

[摘要]该文通过HPLC建立了同时测定荣心丸（五味子、丹参）中五味子醇甲，丹参酮Ⅰ，隐丹参酮、丹参酮ⅡA，五味子乙素5种有效成分的方法。Agilent C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，线性梯度洗脱，体积流量1.0 mL・min-1；柱温30 ℃；检测波长240 nm。五味子醇甲，丹参酮Ⅰ，隐丹参酮，丹参酮ⅡA，五味子乙素分别在3.000～48.00（r=1.000），3.985～63.76（r=0.999 9），6.370～101.9（r=1.000），8.690～139.0（r=0.999 9），1.700～27.20 mg・L-1（r=0.999 9）呈良好的线性关系，平均回收率分别为98.44%，100.3%，99.29%，99.07%，98.42%，RSD分别为0.60%，1.1%，0.52%，0.72%，0.97%。实验表明本方法简便、准确、重复性好，可同时测定荣心丸中5种化学成分。

[关键词]荣心丸；五味子醇甲；丹参酮Ⅰ；隐丹参酮；丹参酮ⅡA；五味子乙素；HPLC

荣心丸由玉竹、炙甘草、五味子、丹参、降香、山楂、廖大青叶、苦参组成，具有益气养阴、活血解毒的功效，用于气阴两虚或气阴两虚兼心脉淤阻所致的胸闷、心悸气短等症状，也用于病毒性心肌炎的治疗，收载于国家食品药品监督管理总局国家药品标准第65册[1]。该标准仅用HPLC对丹参酮ⅡA进行了质量控制，且样品处理方法也较繁琐。本试验参考相关方法[2-7]，选择五味子和丹参中五味子醇甲、五味子乙素、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA 5种有效成分，采用梯度洗脱，实现在同一系统中同一波长下同时检测，并对原标准中样品前处理的方法进行优化，缩短前处理时间，且结果更稳定。试验证明本方法简便、准确、重复性好，可用于荣心丸的质量控制。

1 材料

Agilent 1100 高效液相色谱仪，DAD检测器，Satious AG125 电子天平。

五味子醇甲（批号 110857-200709）、五味子乙素（批号110765-201205）、丹参酮I（批号0867-200205）、隐丹参酮（批号110852-200806）、丹参酮ⅡA （批号110766-200609）均由中国食品药品检定研究院提供；甲醇为色谱纯；荣心丸（上海玉丹药业有限公司，国药准字Z10970095，批号110802，120302，130201，130601，120602）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Agilent C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，2.7 μm）；流动相甲醇（A）-水（B），线性梯度洗脱，0～8 min，49%A；8～10 min，49%～62% A；10～32 min，62% A。体积流量1.0 mL・min-1；检测波长240 nm；柱温30 ℃；进样量5 μL。

2.2 溶液的制备 对照品溶液的制备：精密称取五味子醇甲、隐丹参酮、丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇溶解制成每1 mL中含五味子醇甲300.0 μg、隐丹参酮637.0 μg、丹参酮ⅡA 869.0 μg的混合溶液，作为对照品溶液①；取丹参酮Ⅰ、五味子乙素对照品，加甲醇制成每1 mL中含丹参酮Ⅰ 79.70 μg、五味子乙素34.0 μg的混合溶液，作为对照品溶液②。

供试品溶液的制备：取本品适量，剪碎，混合均匀，精密称取4 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声10 min使分散，浸渍30 min，继续超声30 min，放冷，称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，静止，取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

阴性对照溶液的制备：按厂方提供的处方中药味的比例及工艺，再按供试品溶液的制备方法制成不含五味子和丹参的阴性对照溶液。

2.3 专属性试验 吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各5 μL，按上述色谱条件分别进样，结果供试品溶液中在五味子醇甲、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、五味子乙素对照品色谱相同的保留时间处均有相应的色谱峰，各峰与相邻峰之间的分离度均大于2.0，理论板数均大于6 000，阴性对照溶液显示在各对照品主峰保留位置均无相应的干扰峰。说明供试品中其他成分对检测结果均无影响。色谱图见图1。

2.4 线性关系考察 取对照品浓溶液适量，加甲醇制成如下表线性范围的浓度，依法操作，以质量浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，结果见表1。

2.5 精密度试验 精密吸取批号为130201的供试品溶液，按上述色谱条件重复进样6次，记录色谱峰面积，计算五味子醇甲、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、五味子乙素峰面积的RSD分别为0.83%，0.77%，0.63%，0.67%，0.57%，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验 精密吸取批号为130201的供试品溶液，按上述条件分别于0，4，8，12，24 h测定，记录色谱峰面积，计算五味子醇甲、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、五味子乙素峰面积的RSD分别为1.5%，1.2%，0.98%，1.9%，1.3%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验 精密称取3号样品，取6份，按照供试品溶液制备方法制备，测定，计算结果，五味子醇甲、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、五味子乙素峰面积的RSD分别为0.98%，0.76%，0.98%，0.99%，0.70%，表明重复性良好。

2.8 回收率试验 精密称取批号为130201的供试品6份，每份2 g，分别精密加入对照品溶液①0.75，0.75，1.0，1.0，1.5，1.5 mL，对照品溶液②3.0，3.0，5.0，5.0，7.0，7.0 mL，另精密加入甲醇50 mL，按供试品溶液制备方法制备，上述测定条件测定，计算5种成分的回收率，见表2。

2.9 样品测定 取5批样品按建立的方法测定，见表3。

3 讨论

本品的功效是益气养阴、活血解毒，对于气阴两虚或气阴两虚兼心脉淤阻所致的胸闷、心悸气短等症状，及病毒性心肌炎具有较好的治疗作用。处方中的玉竹、甘草、五味子均属君药，丹参和山楂为臣药，玉竹养阴润燥，生津止渴的作用，《中国药典》中检测葡萄糖的含量控制仅用于玉竹中药材饮片，在复方制剂中未有被采用的先例，甘草具有补脾益气、清热解毒的作用，《中国药典》用甘草苷的含量对其进行质量控制，但由于流动相等原因，无法在本系统中同时检测。为了用简便的方法检测更多的成分，本实验以处方中君药五味子和臣药丹参为检测对象，五味子醇甲、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、五味子乙素是五味子和丹参的主要化学成分[1]，起到益气生津、补肾养心、祛淤生新的作用。因此本实验将以上5种成分引入本制剂的含量检测并同时检测，较之原标准中仅检测丹参酮ⅡA具有更好的实用价值，对本制剂的质量控制起到了重要的作用。

通过查阅文献[2-8]得五味子醇甲、五味子乙素的检测波长有250 nm左右，丹参酮的检测波长在270 nm左右，通过在220～270 nm波长处每隔5 nm进行检测，发现丹参酮类在240 nm附近也有较大吸收。综合各成分的吸收情况最后确定检测波长为240 nm，结果稳定，阴性对照无干扰。

通过查阅文献[2-8]检测五味子醇甲和丹参酮ⅡA流动相的组份有乙腈-水-冰醋酸、甲醇-0.1%冰醋酸，还有甲醇-水等，本实验对各系统进行了比较，最后确定采用甲醇-水的系统，梯度洗脱，能使各成分有效分离。由于一般的色谱柱虽然能各组份分离（丹参酮ⅡA和五味子乙素较难分离），但时间较长，一般需60～70 min，本实验试用粒径为2.7 μm的短柱，得到了满意的分离结果，也缩短了分析的时间。

样品处理过程参考原标准[2]中采用超声，但原方法处理需浸渍过夜，并反复超声，反复提取，不仅时间长，过程复杂，结果误差大。本方法比较过超声、回流、索氏提取，回流因为温度高不可取，另由于本品为大蜜丸，虽然已经尽量剪细，但索氏提取由于无法使样品分散开来而效果不好，只有超声的方法能将样品分散开来，且能减少样品所需浸渍的时间。通过试验，采用先超声10 min，使其充分分散，并对浸渍时间15，30，45，60 min，后超声时间20，30，40 min进行交叉试验，确定浸渍30 min，后超声30 min，使有效成分完全溶出，结果稳定，重复性好。

组分中丹参酮I在甲醇中的溶解性相较其他成分弱些，故在制备对照品溶液时将其与其他成分分开处理。丹参酮ⅡA不稳定，见光遇热易分解，故试验中将对照品溶于棕色量瓶中，且超声过程中保持超声水浴的温度保持在40 ℃以下，得到满意的回收率。

[参考文献]

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[8] 李英，. HPLC测定安神补心丸中五味子醇甲和丹参酮ⅡA的含量[J].中成药，2004（7）：24.

Determination of five components in Rongxin pills by HPLC

CHU Zhong-ying*， WU Li-hong， TIAN Lan

（Shanghai Songjiang Institute for Food and Drug Control， Shanghai 201600， China）

[Abstract] To establish a method for determination contents of schizandrin，tanshinone Ⅰ，cryptotanshinone，tanshinoneⅡA and schizandrin B in rongxin pills. The HPLC method was performed on an Agilent C18. The mobile phase was composed of methnol and water wish gradient elution. The flow rate was 1.0 mL・min-1. The column temperature was 30 ℃ and the detection wavelength wash 240 nm. The linear of schizandrin，tanshinone Ⅰ，cryptotanshinone， TanshinoneⅡA and schizandrin B were 3.000-48.00（r=1.000）， 3.985-63.76（r=0.999 9）， 6.370-101.9（r=1.000）， 8.690-139.0（r=0.999 9）， 1.700-27.20 mg・L-1（r=0.999 9），respectively. The average recoveries were 98.44%， 100.3%， 99.29%， 99.07%， 98.42%， and RSDs were 0.61%， 1.1%， 0.52%， 0.72%， 0.97%. The method is convenient， accurate and has good precision. It can be used for determination of the preparation.

[Key words] Rongxin pills； schizandrin； tanshinone I； cryptotanshinone； tanshinoneⅡA； schizandrin B； HPLC

doi：10.4268/cjcmm20140612