探讨隧道式灭菌干燥机灭菌验证方法

摘 要：目的：确保KSZ620/43-L型隧道式灭菌干燥机按设定的灭菌参数对玻瓶进行灭菌，能有效地达到灭菌除热原效果，保证用于无菌药品灌装的玻瓶的无菌和无热原。方法：用经过校准合格的温度探头分别对隧道式灭菌干燥机进行连续三次热分布、热穿透及内毒素挑战测试，验证过程灭菌温度设定为330 ℃，网带运行速度为43 Hz。结果：灭菌过程，隧道式灭菌干燥机腔体内各探头最大温差小于15℃，隧道烘箱空载热分布均匀。满载热穿透及内毒素挑战结果表明，灭菌过程，在设备满载情况下，各探头温度FH值均>1365，灭菌后所有内毒素检验结果均为阴性，阳性对照检验结果为阳性。因此，按照预期的灭菌参数进行灭菌除热原，灭菌过程隧道式灭菌干燥机热分布均匀、灭菌除热原有效。该设备符合灭菌设备设计及GMP要求。

关键词：隧道烘箱 灭菌验证 热分布 热穿透 内毒素挑战

中图分类号：TQ460.5 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2014）04（b）-0210-02

隧道式灭菌干燥机灭菌验证的目标是，按预期的灭菌工艺参数对冻干粉针剂灌装用玻瓶进行灭菌，能保证用于无菌灌装的玻瓶的无菌及无热原。隧道式灭菌干燥机灭菌验证前应确保设备的预热段、灭菌段及冷却段间的压差符合：预热段压力冷却段压力；灌装间对洗瓶间的压差应≥10 Pa；预热段、灭菌段及冷却段高效过滤器应无泄漏。影响隧道式灭菌干燥机的灭菌效果有诸多因素，如网带走带频率、灭菌温度、风量及压差等。该文就KSZ620/43-L型隧道式灭菌干燥机的验证介绍如下，以便互相学习和借鉴。

1 器材与试剂

1.1 KSZ620/43-L型隧道式灭菌干燥机

该设备系用层流原理和热空气高速灭菌工艺，使整个输送隧道在一密封系统内完成对玻瓶的干燥、灭菌和冷却；它利用层流原理和热空气高速灭菌工艺，可使玻瓶在隧道烘箱内达到国家GB50073-2001标准，即洁净度A级标准。设备走带最大速度149 mm/min（50 Hz）、网带宽度600 mm、灭菌段长度1320 mm）。

1.2 温度验证仪

多通道数据采集器为美国福禄克2635A型，温度计量干井炉为美国福禄克9144，热电偶为英国欧米珈K型。

1.3 玻瓶

双峰格雷斯海姆医药玻璃（丹阳）有限公司生产、规格7 mL、批号201202012。

1.4 内毒素指示剂

湛江安度斯生物有限公司生产、批号110310、效价1000EU。

2 方法与结果

2.1 热电偶校准

热分布前后用三点校准法（低点温度、验点温度、高点温度）分别对验证用的10个热电偶进行校准，校准时间设定为3 min，校准精度为0.5 ℃。校准过程如下：

（1）将验证仪的10个热电偶置于温度干井之中，打开温度干井的电源，待其稳定后，将验证仪打开使之处于测试状态，进行300 ℃校验，记录数据并保持3 min。

（2）将验证仪的10个热电偶置于温度干井之中，打开温度干井的电源，待稳定在330 ℃后，将验证仪打开，使之处于测试状态，进行330 ℃校验，记录数据并保持3 min。

（3）进行350 ℃校验，校验过程同（2）。

合格标准：

热电偶在确认试验前后于300 ℃、330 ℃、350 ℃三个点校验，恒温保持3分钟，各热电偶温差≤±0.5 ℃。

（4）数据分析

在校准的3个温度点，验证用测试热电偶与标准探头的温差最大值没有超过0.5 ℃，因此，验证用测试探头的精度和范围符合规定要求。

2.2 热分布试验

本试验的目的是检查灭菌腔内的分布情况及灭菌腔内不同位置的偏差状况，以确定可能存在的冷点。⑷

（1）设定灭菌温度为330 ℃，网带运行速度为43 Hz，按隧道式灭菌干燥机操作程序运转设备，当温度升至设定灭菌温度后以隧道式灭菌干燥机输送网带为边界，将10个探头分两组用测试支架固定，间隔均匀放置在网带上，启动干燥机手动送带控制，测试探头随网带移动进入走出烘箱灭菌段，用检测仪直接记录各测试探头的温度情况（图1）。

（2）按上述空载（热分布）测试（1），反复进行3次验证测试过程。

（3）检测后用检测仪读取、打印数据。

合格标准：灭菌过程，隧道烘箱内记录温度数据，各点温差在15 ℃内。

（4）数据分析

空载第一次：冷点探头号为5号、10号，所运行区域为冷点区域（烘箱右侧）；热点探头号为1号、6号，所运行区域为热点区域（烘箱左侧）。两组温度探头达到恒温时，各探头温度间最大温差14.47 ℃，最小温度12.92 ℃，符合最大温差小于15 ℃。

空载第二次：冷点探头号为5号、10号，所运行区域为冷点区域（烘箱右侧）；热点探头号为1号、6号，所运行区域为热点区域（烘箱左侧）。两组温度探头达到恒温时，各探头温度间最大温差14.71 ℃，最小温度9.12 ℃，符合最大温差小于15 ℃。

空载第三次：冷点探头号为5号、10号，所运行区域为冷点区域（烘箱右侧）；热点探头号为1号、6号，所运行区域为热点区域（烘箱左侧）。两组温度探头达到恒温时，各探头温度间最大温差14.54 ℃，最小温度12.05 ℃，符合最大温差小于15 ℃。

2.3 热穿透试验

进行热穿透试验的目的是在热分布试验的基础上，确定各温度探头在灭菌设定时间内能够获得充分的灭菌保证值。温度探头应插入玻瓶底部并将其固定。

（1）设定灭菌温度为330 ℃，网带运行速度为43 Hz，按隧道式灭菌干燥机操作程序运转设备，当温度升至设定灭菌温度后以隧道式灭菌干燥机输送网带为边界，将10个探头用测试支架固定，插入玻瓶中作为验证点，间隔均匀成一直线放置在网带上，启动联动线机组，测试探头随网带移动进入走出烘箱灭菌段，用检测仪直接记录各测试探头的温度情况。

（2）按上述满载（热穿透）测试（1），反复进行3次验证测试过程（图2）。

（3）检测后用检测仪读取、打印数据。

合格标准：热穿透干燥灭菌的灭菌热力强度FH不小于1365。

（4）数据分析（如表1）。

2.4 内毒素指示剂挑战

同步热穿透试验，将10支内毒素指示剂均匀分布在隧道腔室各温度探头附近，连续运行3次，并对灭菌后的各EI指示剂取样送微生物实验室检验，同时做阳性对照。

接受标准：经干燥灭菌后，用灵敏度为0.125EU/ml鲎试剂进行测定，阳性对照应为阳性，样品检验应为阴性，即内毒素下降3个对数点。

检测结果：（如表2）

结果表明，未灭指示剂培养结果呈阳性，被灭指示剂培养结果均呈阴性，指示剂灭菌后均已失活；灭菌结果细菌内毒素挑战合格。

3 结语

三次空载运行结果表明，灭菌过程，隧道式灭菌干燥机腔体内各探头最大温差小于15 ℃，隧道烘箱空载热分布均匀；三次满载热穿透及内毒素挑战结果表明，灭菌过程，在设备满载情况下，各探头温度FH值均>1365，灭菌后所有内毒素检验结果均为阴性，阳性对照检验结果为阳性。因此，按照预期的灭菌参数进行灭菌除热原，灭菌过程隧道式灭菌干燥机热分布均匀、灭菌除热原有效。该设备符合灭菌设备设计及GMP要求。

参考文献

[1] 国家食品药品监督管理局认证管理中心编写，药品生产验证指南（2003）.

[2] 国家食品药品监督管理局编写，药品生产质量管理规范及其附录（2010年修订）.

[3] 国家食品药品监督管理局认证中心编写，药品GMP指南.

[4] 郭桂芳，谷海燕.干热灭菌系统除热原效果验证方法的探讨[期刊论文]-医药与保健.