论文实例：大鼠附睾特异表达基因Binlb和Bin2a的克隆及其表达调控研究

作者简介：，男，1971年12月出生，1996年09月师从于中国科学院上海生命科学研究院张永莲教授，于20__年08月获博士学位。摘要

附睾是成熟、贮存和受到保护的场所。在中完成形态分化的细胞进入附睾，在通过附睾的过程中，获得了前向运动能力和受精能力。这些能力的获得，是表面与附睾区域性表达的基因在管腔中造成的微环境不断相互作用的结果。另外，各种性传播疾病、男性不育一直是威胁人类生殖健康的、全球性问题。人口危机也对安全避孕，尤其是男性避孕也提出了新的要求。因此，对男性生殖机理的研究受到越来越多的重视。

近来，我们实验室在大鼠附睾头部先后克隆了两个基因。其中，Bin1b的全长cDNA为385，编码一个68个氨基酸的多肽。它是一个单拷贝基因，有一个大小约为1.3kb的内含子。在18种不同的组织中，Bin1b只在大鼠附睾头部有表达，表达的组织专一性很高。并且它只表达在附睾头部中段的上皮细胞中。另外，Bin1b在大鼠发育到性成熟时，表达水平最高，并在整个性成熟期维持较高的表达水平。同源性分析表明，它很有可能是哺乳动物体内的一种先天性免疫效应分子b-defein家族中的一员，在灵长类中也有同源分子存在。与香港中文大学合作，利用附睾上皮细胞的体外培养及反义核酸技术证明了它的抗菌性。同时，Bin1b的表达可以被附睾炎症上调。

Bin2a的全长cDNA为2606,编码637个氨基酸。Bin2a的氨基酸序列中包括Glycosylhydrolasesfamily35家族中的9段相对保守的序列,其中包括210位的活性中心Glu（protondonor）,但是缺少另外一个活性中心，279位的Glu（nucleophile）。并且，Bin2a与大鼠附睾中报道的酸性b-半乳糖苷酶显然不同。所以，Bin2a可能是b-半乳糖苷酶家族的新成员。Bin2a表达受雄激素上调，其表达的组织专一性也很高，只在大鼠附睾有表达，并主要在附睾头部。与Bin1b不同的是，Bin2amRNA的水平在45天时，有一个表达高峰。

Bin1b和Bin2a的克隆，为研究附睾中的粘膜免疫过程以及成熟提供了线索。

关键词：附睾，成熟，男性避孕，b-defein，b-半乳糖苷酶

Atract

Epididymisisreoibleforermmaturation,storageandprotection.ermatozoathatemergefromthetesteshadtotraversetheepididymistoacquiremotilityandfertility.Theacquisitionresultsfromtheinteractionbetweenermandtheoptimalmicroenvironmentcreatedbygeneswhichareregionallyexpreedandregulatedalongtheepididymaltubule.Additionally,sexuallytramitteddisease,maleinfertilityandmalecontraceptionremaiworld-widehealthproblem.Somoreattentioarepaidontheresearchofmalereproductivetract.

Ourlabhaveclonedtwogenesinthecaputofratepididymisrecently.Thefull-lengthcDNAofBin1bis385,encoding68aminoacid.Itisasingle-copygeneandhasa1.3kbintron.Of18organtiues,Bin1bmRNAwasonlyfoundintheepididymisandconfinedtoepithelialcellsinthemiddlepartofthecaputregion.Itwasdevelopmentallyregulatedanditsexpreionstartedat30daysofageandreachedamaximumduringthesexuallyactiveperiod,andthen,decreasedintheagedrats.Bysimilarityanalysis,Bin1bisprobablyanewmemberofmamalianb-defeinfamilywhichisinvolvedinhostiateimmunity.Andithashomologsinprimate.ItsantimicrobialactivitywasprovedusingprimaryculturesofepididymalepitheliaandantiseetechniqueunderthecooperationofTheChineseUniversityofHongKong.

Thefull-lengthcDNAofBin2ais2606,encoding637aminoacid.ItsaminoacidsequencehasninecoervedblocksofGlycosylhydrolasesfamily35,includinganactivesiteGlu210ofprotondonor,butlackinganotheractivesiteGlu279ofnucleophile.ItisobviousthatBin2aisdifferentfromacidb-galactosidasereportedinratepididymis.Maybeitisanewmemberofb-galactosidasefamily.Bin2amRNAisupregulatedbyandrogenandalsoepididymis-ecific,majorlyincaputepididymides.Thereisamarkedincrease(aroximatelyfourfold)ofitsmRNAlevelinratof45daysage.

ThecloningofBin1bandBin2agiveusaclueinmucosalimmunityandermmaturationinepididymis.

KeyWords:epididymis,ermmaturation,malecontroception,b-defein,b-galactosidase.