Notch1、Jagged1在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

[摘要] 目的 探讨Notch1、Jagged1在肝细胞癌组织中的表达及临床意义。 方法 选择2010年3月～2012年6月手术治疗并经病理证实为肝细胞癌的患者35例，每例患者均取癌组织及癌旁组织（距癌组织2～3 cm处），其中肝细胞癌组织35例，癌旁肝硬化组织13例，癌旁正常肝组织22例。采用实时荧光定量PCR法检测Notch1 mRNA、Jagged1 mRNA在肝细胞癌组织、癌旁肝硬化组织及癌旁正常肝组织中的表达；免疫组织化学染色法检测Notch1、Jagged1蛋白的表达，并分析两种蛋白的表达与肝细胞癌临床病理特征的关系。 结果 ①肝细胞癌组织中Notch1 mRNA、Jagged1 mRNA的表达分别为（4.58±0.77）、（4.96±0.87），显著高于癌旁正常肝组织，差异有统计学意义（P < 0.05）；与癌旁肝硬化组织[（1.16±0.37）、（1.42±0.58）]比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；而癌旁正常肝组织与癌旁肝硬化组织比较差异无统计学意义（P > 0.05）。②肝细胞癌组织中，Notch1、Jagged1的阳性表达率分别为71.4%（25/35）、68.6%（24/35）；癌旁正常肝组织中，Notch1、Jagged1的阳性表达率分别为36.4%（8/22）、40.9%（9/22）；癌旁肝硬化组织中，Notch1、Jagged1的阳性表达率分别为30.8%（4/13）、30.8%（4/13）。Notch1、Jagged1的阳性表达率在肝细胞癌组织中明显高于癌旁正常肝组织（χ2Notch1 = 6.81，χ2Jagged1 = 4.24，P < 0.05）及肝硬化组织（χ2Notch1 = 6.55，χ2Jagged1 = 5.57，P < 0.05）。Notch1、Jagged1的阳性表达率在癌旁正常肝组织与肝硬化组织间差异无统计学意义（P > 0.05）。Spearman相关分析显示，肝细胞癌组织中Notch1的表达与Jagged1的表达呈正相关（r = 0.38，P < 0.05）。③Notch1、Jagged1蛋白的阳性表达率与患者的年龄、性别、肿瘤直径、数目、有无癌栓形成无关（P > 0.05）；与有无淋巴结转移、病理分级密切相关。有淋巴结转移者Notch1、Jagged1阳性表达率高于无淋巴结转移者；低分化癌组织Notch1、Jagged1的阳性表达率明显高于中高分化癌组织，差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 Notch信号通路中Notch1、Jagged1对肝细胞癌的发生发展起促进作用，可为判断临床预后提供参考价值。

[关键词] 肝细胞癌；Notch信号；实时荧光定量PCR；免疫组化

[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）07（a）-0004-04

Notch信号通路在肿瘤的发生、发展中起着重要的作用。Notch1、Jagged1是该信号通路中重要的受体和配体。原发性肝癌是临床最常见恶性肿瘤之一，其中肝细胞癌占90%以上，本研究采用免疫组化SP法检测Notch1、Jagged1蛋白在肝细胞癌组织中的表达，实时荧光定量PCR法检测Notch1 mRNA、Jagged1 mRNA的表达，并分析Notch信号与肝细胞癌临床病理特征的关系，以期为肝癌的临床治疗提供有价值的实验依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源

选择2010年3月～2012年6月手术治疗并经病理证实为肝细胞癌的患者35例，每例患者均取癌组织及癌旁肝组织（距癌组织2～3 cm处）。其中，男22例，女13例，平均年龄（53.2±11.1）岁；低分化癌15例，中、高分化癌20例；癌旁组织中正常肝组织22例，肝硬化组织13例。每份标本取部分组织液氮速冻后-80℃保存备用。其余组织4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。

1.2 主要试剂

RNA提取试剂盒RNAprep Cell Kit购自北京TIANGEN公司，AMV第一链cDNA合成试剂盒购自上海生工生物工程公司、SYBR Green supermix购自BIO-RAD公司、扩增引物由上海赛百盛生物技术有限公司合成。山羊抗人Notchl多克隆抗体、Jagged1多克隆抗体为Santa Cruz Biotechnology公司产品；免疫组织化学SP试剂盒，二氨基联苯胺（DAB）显色试剂盒均购自武汉博士德公司；

1.3实验方法

1.3.1 实时荧光定量PCR 每份标本取100 mg组织，按RNA提取试剂盒提取总RNA，2%琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度仪鉴定RNA完整性和纯度。A260/A280值在1.8～2.0之间符合要求。取2 μg RNA样品，Oligo（dT）18作为引物，重组鼠白血病毒逆转录酶（MMLV）逆转录合成cDNA。实时荧光定量PCR反应体系：SYBR Green supermix 10 μL，上、下游引物各0.5 μL，cDNA样品1 μL，dH2O 8 μL，共计20 μL。反应条件：预变性95℃ 15 s，1个循环；PCR反应，95℃ 15 s，60℃ 30 s，45个循环；熔解曲线分析，95℃ 1 min，1个循环，55℃ 1min，1个循环，95℃ 30 s，81个循环。Notch1基因引物序列：上游5'-GGACTGTGCGGAGCATGTACC-3'，下游5'-TTGTCGTCCATGAGGGCACCG-3'，扩增产物750 bp；Jagged1基因引物序列：上游5'-CTCATCAGCCGTGTCTCAAC-3'，下游5'-GGCACACACACTTAAATCCG-3'，扩增产物297 bp；内参基因引物β-action：上游5'-GGCGGCACCACCATGTACCCT-3'，下游5'-AGGGGCCGGACTCG TCATACT-3'，扩增产物202 bp。采用2-Ct分析法。每样品平行3管。

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（收稿日期：2013-03-12 本文编辑：李继翔）