复方前列安颗粒的质量标准分析

[摘要] 目的：建立复方前列安颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱法对复方前列安颗粒中的药材淫羊霍、泽泻、延胡索的成分进行定性鉴别；并应用高效液相色谱法测定制剂中芍药苷成分的含量。色谱柱：Kromasil KR100-5 C18 ODS柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：0.01%磷酸水-乙腈（83∶17）；检测波长：230 nm；流速：1.0 ml/min。结果：利用薄层色谱鉴别可检测出药材淫羊霍、泽泻及延胡索。同时测定制剂中芍药苷成分在1.704~8.520 μg范围内呈良好线性关系，r=0.999 4，平均回收率为97.45%，RSD=1.78%(n=6)。结论：该方法简便、准确、灵敏度高，可作为复方前列安颗粒的质量控制方法。

[关键词] 复方前列安颗粒；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法；芍药苷

[中图分类号] R917 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2011）06（c）-078-03

Quality standard analysis of Fufang Qianliean Keli

CHEN Yihua1, YANG Zhihua2

1. Shantou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Province, Shantou 515041, China; 2.Shantou Hospital of Skin Disease Prevention and Cure, Guangdong Province, Shantou 515041, China

[Abstract] Objective: To establish the quality standard of Fufang Qianliean Keli. Methods: Epimedium brevicornu, Alisma orientale and Corydaliis turtschaninovii were identified by TLC; and the content of paeoniflorin in Fufang Qianliean Keli was determined by HPLC. The colum was Kromasil Kp100-5 C18 ODS(250 mm×4.6 mm,5 μm); the mobile phase consisted of 0.01%H3PO4-acetonitrile(83∶17); the detection wavelength was set at 230 nm; the flow rate was 1.0 ml/min. Results: The Epimedium brevicornu, Alisma orientale and Corydaliis turtschaninovii could be distinguished respectively by TLC; while the linear range of paeoniflorin was 1.704-8.520 μg(r=0.999 4), the average recovery rate was 97.45%, RSD=1.78%(n=6). Conclusion: The method is simply operation, accurate and highly sensitive. It can be used for quality control of Fufang Qianliean Keli.

[Key words] Fufang Qianliean Keli; Quality standard; TLC; HPLC; Paeoniflorin

复方前列安颗粒制剂是汕头市中医医院制剂室自制药品，已取得汕头市临床科研用药（试用）项目，批准文号为粤Z20080089。该产品由赤芍、淫羊霍、泽泻、延胡索、制乳香、王不留行等药味组成，具有活血化瘀、理气通络之功效，适用于气滞血瘀型的前列腺炎、前列腺增生等病症。其颗粒采用醇提和传统的水提工艺相结合，再经过浓缩、干燥、一步制粒等现代先进技术制备而成，为了控制复方前列安颗粒的质量，本文参照文献[1-4] 一方面采用薄层色谱法对该制剂中的淫羊霍、泽泻、延胡索药材进行了定性鉴别分析；另一方面采用高效液相色谱法进一步测定制剂中的主要成分之一芍药苷的含量，为控制复方前列安颗粒的药品内在质量提供有效的保证。

1 仪器与试药

1.1 仪器

薄层铺板器；定量毛细血管；瑞士CAMAG Reprostar薄层成像系统； 色谱柱：Kromasil KR100-5 C18 ODS柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；SPD-6A型检测器（日本岛津），P-2000泵；BP211D电子天平；2170AA数据处理软件系统。硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂）；LC-10AVP高效液相色谱仪（日本岛津）。

1.2 试剂

甲醇为进口色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

1.3 试药

芍药苷、延胡索、淫羊霍对照品，泽泻对照药材均购于中国药品生物制品检定所。复方前列安颗粒（20100422、20100425、20100508、20100512）由汕头市中医医院制剂室自制，所用药材均为生产用同批号药材。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 淫羊霍的薄层色谱鉴别 取本品粉末6 g，加醋酸乙酯50 ml，提取3次，合并醋酸乙酯，用水20 ml洗2次，醋酸乙酯提取液蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，即得供试品溶液。精密称取淫羊霍对照品适量，加甲醇制成1 mg/ml的溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水（10∶1∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，阴性无干扰（见图1）。

2.1.2 泽泻的鉴别 取本品粉末5 g，置锥形瓶中，加甲醇50 ml，超声处理30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加水10 ml溶解，以乙酸乙酯提取3次(20、15、15 ml)合并提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇5 ml使溶解，作为供试品溶液。另取泽泻对照药材2 g，加甲醇5 ml，按照供试品溶液制备方法制得对照药材溶液。同样按处方比例，取缺泽泻的其他各味药，按制备工艺加工制成阴性样品，按供试品制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录)试验，吸取上述溶液各8 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶2∶0.7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同紫红色的斑点，阴性无干扰（见图2）。

2.1.3 延胡索的薄层色谱鉴别 取本品粉末5 g，加甲醇20 ml，热溶解，超声处理30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加水5 ml使溶解，加氨试液0.5 ml，调pH值至7.0，加乙醇提取3次，每次5 ml，提取液合并，蒸干，加甲醇2 ml溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品适量，加甲醇溶解，制成1 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。再按处方取不含延胡索的其他药材，按本品制备工艺和上述供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10 μl，分别点于用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿-甲酸(7.5∶4∶1)为展开剂，展距15 cm，取出，晾干，以碘蒸气薰至斑点显色清晰，挥尽碘后(10 min)，置紫外灯(365 mm)下检视，在Rf为0.3处，供试品色谱与对照品色谱显一相同黄棕色荧光斑点，阴性对照品无此斑点（见图3）。

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1~4.供试品，5.延胡索乙素，6.阴性对照

2.2 芍药苷的含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil KR100-5 C18 ODS柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.01%磷酸水-乙腈（83∶17）；检测波长：230 nm；柱温：室温；流速：1.0 ml/min[1,3]。

2.2.2 溶液的制备 取本品2.5 g，研细，加乙醇20 ml，振摇，超声波提取10 min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1 ml溶解，即得供试品溶液。另取芍药苷对照品精密称定，加乙醇制成每1 ml含芍药苷0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方自配不含赤芍的群药，依法制成阴性对照溶液。

2.2.3 标准曲线绘制 精取芍药苷对照品（0.5 mg/ml）2、4、6、8、10 μl注入液相色谱仪，以峰面积Y对进样量X（μg）进行回归处理。回归方程：Y=10 570.95X-836.40，r=0.999 4。结果表明芍药苷的进样量在1.704~8.520 μg范围内与其峰面积呈良好线性关系。

2.2.4 精密度试验 精取一定量的上述芍药苷对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样5次，求得RSD为0.14%(n=5)，仪器精密度良好。

2.2.5 重现性试验 精取同一批号样品溶液5份，按样品含量测定项下的方法操作测定。结果RSD为4.03%（n=5），试验重现性良好。

2.2.6 稳定性试验 精取同一样品溶液，在不同时间连续进样5次，RSD为1.93%，仪器稳定性良好。

2.2.7回收率试验 采用加样回收法测定回收率，取已知含量的样品精密称重，分别加入芍药苷对照品适量。依样品溶液项下方法操作测定，平均回收率为97.45%，RSD为1.78%，结果见表1。

2.2.8 样品测定 取供试品进样，按上述色谱条件测定，测定结果见表2。

3 讨论

复方前列安颗粒中淫羊霍与泽泻的定性鉴别采用TCL法，并分别与各自的阴性对照液进行了对照试验，结果没有干扰，斑点明显，专属性好，收到良好效果。

延胡索薄层色谱鉴别中使用碘薰后，延胡索乙素氧化成更具荧光的氧化物，经试验发现驱赶碘的时间须在5 min以上，否则斑点上仍有棕色碘覆盖，在紫外灯下显黑色暗斑，故定为10 min。

芍药苷作为本制剂的主要成分之一，本文根据《中国药典》2010版一部中赤芍药材项下的含量测定方法，采用HPLC对该成分的含量进行测定，对复方前列安颗粒的内在质量控制有重要意义。结果显示该方法适宜于本制剂中芍药苷的含量测定，色谱峰分离度高、峰型好，且阴性无干扰[5-7]。

在本实验检测过程中，对不同批号的制剂样品的含量进行比较，发现含量相差较大，这可能与所用原药材不是同一批号有关，因此，控制原药材质量与确保制剂的质量关系非常密切。

本文测定方法经各项实验考察，结果表明该方法简便快捷，结果精确，重现性好，可作为复方前列安颗粒制剂的质量控制标准。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社,2010.

[2] 康廷国.中成药薄层色谱鉴别[M].北京:人民卫生出版社,1995:145.

[3] 陈发奎.常用中草药有效成分含量测定[M].北京:人民卫生出版社,1997:123.

[4] 魏璐雪.中药制剂分析[M].上海:上海科学技术出版社,2003:311.

[5] 苗明三,李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京:人民卫生出版社,2003.

[6] 应海燕,沈国兴.前列安颗粒的质量标准研究[J].江西中医药,2009,45(5):156-157.

[7] 沈国兴,应海燕;前列安颗粒的质量标准研究[J].海峡药学;2009;21(6):75-77.

（收稿日期：2011-02-18）

[基金项目] 2008年广东省汕头市重点科技计划项目，批准文号：粤Z20080089。

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