时间：2022-09-12 01:36:04
多糖提取工艺准确称取龙胆预处理样品10g，将样品与水按设定好的提取温度、提取时间、料液比以及提取次数进行浸提后，4000r／min离心20min，收集浸提液。加3倍体积无水乙醇醇沉过夜后，4000r／min离心15min，收集沉淀，沉淀使用无水乙醇洗涤3次，无水乙醚洗1次，充分干燥后即得龙胆粗多糖。单因素试验提取次数对水溶性龙胆多糖提取率的影响：称取10g预处理龙胆粉末，料液比1∶20，提取温度100℃，提取时间2h，提取次数1、2、3、4、5次，考察浸提数次对水溶性龙胆多糖提取率的影响。提取温度对水溶性龙胆多糖提取率的影响：分别称取10g预处理龙胆粉末，料液比1∶20，提取时间2h，浸提2次，提取温度60、70、80、90、95、100℃，考察不同提取温度对水溶性龙胆多糖提取率的影响。
提取时间对水溶性龙胆多糖提取率的影响：分别称取10g预处理龙胆粉末，料液比1∶20，提取温度95℃，浸提2次，提取时间1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、3．5h，考察不同提取时间对水溶性龙胆多糖提取率的影响。料液比对水溶性龙胆多糖提取率的影响：分别称取10g预处理龙胆粉末，提取温度95℃，提取温度2．5h，浸提2次，料液比1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30，考察不同料液比对水溶性龙胆多糖提取率的影响。正交优化实验根据单因素试验结果，在确定提取次数的前提下，取提取温度、提取时间、料液比3个因素的前3个水平，进行3因素3水平正交实验设计。项目测定样品可溶性总糖含量采用苯酚－硫酸法测定［9］。
提取次数对水溶性龙胆多糖提取率的影响由图1可知，提取次数为2次已能够把绝大部分的多糖提取出来。此后继续增加提取次数，提取率增度较小。提取次数的增加还会导致生产周期的延长和生产操作费成本的增加，而且提取次数过多也有可能降低多糖本身的活性。综合考虑确定提取次数为2次。提取温度对水溶性龙胆多糖提取率的影响，多糖提取率在60～95℃范围内呈直线上升，当提取温度高于95℃，水溶性龙胆多糖的提取率降低。因此确定提取温度以95℃为宜。提取时间对水溶性龙胆多糖提取率的影响，龙胆多糖提取率在提取时间为1．0～2．5h内时增幅较大，提取时间大于2．5h时增幅缓慢，一般来说，在扩散达平衡以前，多糖的提取率与提取时间成正比，达到扩散平衡后，提取时间对提取结果不再有影响。而提取时间过长还会增加能耗，延长生产周期，甚至还会引起多糖水解，使水溶性龙胆多糖产率下降，综合考虑确定提取时间为2．5h。
料液比对水溶性龙胆多糖提取率的影响由图4可看出，水溶性龙胆多糖的提取率随料液比的增大呈现先上升后平缓的趋势，料液比为1∶25时，多糖的提取率达到峰值，当料液比超过1∶25时，水溶性龙胆多糖的提取率无明显增加，因此，料液比以1∶25为最佳比例。但应该指出的是，对于中等或大规模多糖提取工艺，配料比的确定将更为复杂，需要进一步研究。正交实验结果根据单因素试验结果，在提取次数为2次时，进行正交设计。Kn表示以n水平试验的结果的均值。R表示因素极差，即K1’、K2’、K3’中最大值与最小值之差。由表2可以看出，根据极差值大小，对多糖影响影因素的主次顺序为A（温度）＞C（料液比）＞B（提取时间）。多糖提取率最高时的最优培养条件为A3B3C2，即提取温度100℃，提取时间为3．0h，料液比为1∶25。通过单因素试验和正交实验设计，确定了提取水溶性龙胆多糖的最适工艺条件为提取温度100℃，料液比1∶25，提取时间3．0h，提取次数2次。此条件下，水溶性龙胆多糖的提取率可达（14．0±0．37）％。
作者：王晨瑜 刘鑫 张晶 王战勇 单位：辽宁石油化工大学