不同地区蕨麻中多糖含量的测定

摘要：采用苯酚—硫酸法对青海不同地区蕨麻1号与野生蕨麻中多糖含量进行了对比测定。结果显示，青海蕨麻1号中多糖含量高于野生蕨麻，在南山栽培的蕨麻多糖含量最高，五峰的蕨麻多糖含量最低。通过对不同地区蕨麻中多糖含量的测定，不仅可以对蕨麻的进一步开发利用提供可靠的参考依据，而且还可以找到优质的蕨麻品种。

关键词：蕨麻；多糖含量；测定

中图分类号：O657.32 文献标识码：A 文章编号：0439—8114（2012）19—4361—03

蕨麻是鹅绒委陵菜（Potentilla anserina L）的原变种，属蔷薇科（Rosacrae）委陵菜属（Potentilla），为多年生草本，是一种典型的匍匐茎克隆植物[1]。蕨麻分布极广，常生长于河岸、路边、山坡草地，海拔500～4 300 m处。在青海、等高寒地区块根膨大[2]。蕨麻可入药，亦可用作保健食品。其性平味甘，具有生津止渴、健脾益胃、益气补血、收敛止血之功效[3]。孙洁等[4]用斐林试剂热滴定法测定蕨麻中多糖的含量为13.87 mg/g。研究表明中药多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗辐射、降血糖、降血脂、保肝等多种功能[5—8]。本研究采用苯酚—硫酸法测定蕨麻多糖含量[9]，通过蕨麻多糖含量的测定，研究分析青海不同地区蕨麻1号与野生蕨麻中多糖含量是否存在差异。通过不同产地蕨麻营养成分的比较，研究环境因素对蕨麻营养成分的影响，并找到优质的蕨麻品种。

1 材料与方法

1.1 材料

采集日月乡、边滩、五峰、南山等4个不同地区人工栽培的青海蕨麻1号与野生型蕨麻（对照品），将采集到的蕨麻洗干净，烘干，打成粉末备用。

1.2 试剂

石油醚、浓硫酸、氯仿、95%乙醇、丙酮、乙醚，均为分析纯。

1.3 仪器

752型紫外分光光度计（北京东南设备有限公司）；索氏提取器（北京卓川有限公司）；回流提取装置（自制）；超声振荡仪（广州超声振荡仪厂）。

1.4 标准溶液的配制

称取经105 ℃下干燥至恒重的葡萄糖标准品100 mg置于100 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀。

1.5 苯酚溶液的配制

取苯酚100 g，加铝片0.1 g和碳酸氢钠0.05 g，常压蒸馏，收集178 ℃馏分。精密称取该馏分15 g置于250 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀后过滤至棕色试剂瓶中，置冰箱备用。

1.6 样品溶液的制备

称取蕨麻粗粉0.1 g，加入100 mL 80%乙醇，80 ℃回流提取1 h，热过滤，药渣用80%热乙醇洗涤（10 mL×3）后，挥干溶剂。药渣连同滤纸置烧瓶中，加蒸馏水100 mL沸水温浸提取1 h，趁热过滤，药渣用热水洗涤（10 mL×4），合并滤液于250 mL容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。

2 结果与分析

2.1 蕨麻多糖的提取与精制

称取已干燥的蕨麻粗粉20 g，用滤纸包好后置索氏提取器中，加入150 mL石油醚（沸程为60～90 ℃）在85 ℃的水浴中回流提取1 h，待药粉中的溶剂挥干后置于回流提取装置中，加入80%乙醇85 ℃回流提取2次，每次1 h，过滤，取出药渣，挥干溶剂。将药渣加水后水浴温浸（50 ℃左右）提取2次，每次1 h，用滤纸过滤，合并上清液约200 mL左右。上清液用正丁醇—氯仿轻摇萃取3次，静置，分出氯仿层，除去蛋白质。水液中再加入活性炭，回流1 h。待冷却后用八层纱布过滤，滤液中加入乙醇，使含醇量达80%，即可看到有少量的悬浮物，放置冰箱中过夜。滤出沉淀，依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚反复冲洗2次，60 ℃烘干至恒重，计算得率。

2.2 标准曲线的绘制

吸取0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL标准溶液分别置于50 mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。分别吸取2.0 mL于10 mL带塞试管中，另取2.0 mL蒸馏水作空白对照。各管再加入1.0 mL苯酚溶液，混匀，迅速加入浓硫酸5.0 mL，摇匀后放置5 min，再置沸水浴中加热15 min，取出冷却后于490 nm处测定吸光度，结果见表1。经过计算得回归方程y=0.330 2x—0.005 3（R2= 0.999 7）。

2.3 换算因素的测定

称取干燥至恒重的蕨麻多糖17.5 mg置于100 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀。吸取此液5.0 mL置于50 mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀作贮备液。吸取贮备液2.0 mL，同标准曲线项下方法测定吸光度，从而求出多糖供试液中葡萄糖浓度，按公式f=w/（C·D）计算得换算因素f值，结果见表2。

式中，w为多糖的重量（mg）；C为多糖稀液中葡萄糖浓度（mg/mL）；D为多糖的稀释因子。

2.4 样品含量的测定

吸取2.0 mL样品溶液于10 mL带塞试管中，另取2.0 mL蒸馏水作空白对照。各管再加入1.0 mL苯酚溶液，混匀，迅速加入5.0 mL浓硫酸，摇匀后放置5 min，置沸水浴中加热15 min，取出冷却后于490 nm处测定吸光度，按下式计算样品中多糖的含量，结果见表3。

多糖含量=（C×D×f/w）×100%

式中，C为供试液中葡萄糖浓度（mg/mL）；D为供试液的稀释因素；f为换算因子；w为供试品重量（mg）。

2.5 稳定性试验结果

量取某一浓度五峰对照样品溶液，按样品测定方法进行处理，每隔0.5 h测定1次。结果表明，在波长不变的情况下，2.5 h内测定值不变。结果见表4。

2.6 精密度试验结果

按照样品多糖含量的测定方法，吸取边滩对照蕨麻的多糖溶液进行精密度试验，连续测定6次，结果见表5。

2.7 重现性试验结果

称取5份边滩青海1号蕨麻粉末各0.1 g，按照“2.4”中方法同时制备5 份样品溶液。移取样品溶液各2 mL分置于带塞的试管中，按样品含量测定方法测定吸光度。计算多糖含量。结果见表6。

2.8 加样回收率测定

称取样品粉末0.1 g，精制蕨麻多糖10 mg置于同一烧瓶中，按样品液制备与含量测定方法进行操作。平均回收率为99.4%，RSD为2.53%，结果见表7。

3 小结与讨论

南山青海1号蕨麻的多糖含量为31.37%，南山野生蕨麻多糖含量为21.22%。边滩青海1号蕨麻的多糖含量为34.41%，边滩野生蕨麻多糖含量为15.53%；日月乡青海1号蕨麻的多糖含量为32.32%，日月乡野生蕨麻多糖含量为15.68%；五峰青海1号蕨麻的多糖含量为18.30%，五峰野生蕨麻多糖含量为6.30%。

青海1号蕨麻的多糖含量高于野生蕨麻的多糖含量10个百分点。在边滩采集的青海蕨麻1号多糖含量最高，五峰采集的野生蕨麻多糖含量最低。在南山、日月乡、边滩等3个地区种植的青海蕨麻1号多糖含量相差不大，野生的蕨麻多糖含量也相差不大；五峰种植的青海蕨麻1号比其他3个地区种植的低达13个百分点以上；五峰野生的蕨麻多糖含量比其他3个地区的低达9个百分点以上。

青海蕨麻1号与野生蕨麻多糖含量的差异达到极显著水平，说明青海蕨麻1号的品质较好。应该大力推广。蕨麻多糖含量可能与不同蕨麻种植地区土壤的肥力，如有机质、速效氮、速效磷、速效钾、盐等存在一定差异有关[10]。有机肥的施入可以提高蕨麻的单株产量，促进块根体积的增大，从而提高块根的商品价值[11]。蕨麻属于典型的低温植物，尤其是蕨麻块根的膨大必须是低温刺激方可完成。在蕨麻匍匐茎生长期及块根膨大前期，降水量越多对其生长越有利，但块根膨大后期降水量却对蕨麻的膨大没有意义，反而不利于淀粉等物质的累积[12]。随着降水减少、气温降低、植物停止生长进入枯黄期，物质又逐渐转运到地下贮藏，到10月份根的积累达到高水平[13]。生长在高海拔地区的蕨麻品质较好，多糖含量可能与海拔有关。

参考文献：

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