不同分期肺癌组织中Beclin1\p53\p16表达情况分析

[摘要] 目的 本文旨在通过对肺癌组织中Beclin1、p53和p16表达的分析,为肺癌早期诊断及其恶性度评估提供可靠数据。方法 选择2009年1～12月在山西省汾阳医院就诊的肺癌患者,取肺组织50例,检测样本中不同分期肺癌组织Beclin1、p53、p16的表达情况,对该表达情况与对应的分期进行方差分析与LSD-t检验。结果 不同肺癌分期的Beclin1、p53、p16的表达情况之间的差别有统计学意义(P

[关键词] 肺癌; Beclin1; p53; p16

[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)07-26-02

Expression of Beclinl,p53 and p16 in Different Stages of Lung Cancer

LI Xiaoyan1 WANG Guiqin2

1.Affiliated Fenyang Hospital of Shanxi Medical University,Fenyang 032200,China;2.Teaching and Research Section of Microbiology and Immunology,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China

[Abstract] ObjectiveTo investigate expression of Beclinl,p53 and p16 in lung cancer tissue of different stages and provide reliable data for early diagnosis of lung cancer and the assessment of its m alignant degree. MethodsWe selected 50 patients with lung cancer from Shanxi Fengyang Hospital between Jan.2009 and Dec.2009. The expression levels of tissue Beclinl,p53 and p16 in different stages of lung cancer were detected and the analysis of variance and LSD-t test were used for their expression and their corresponding stage. ResultsThere were significant differences in the expression levels of Beclinl,p53 and p16 in different stages. ConclusionThe expression levels of Beclin1,p53 and p16 in the tissue of lung cancer in different clinical stages are different. With the increase in staging of lung cancer,the p53 expression level is increased,the p16 expression level is down-regulated and the Beclin1 expression level is decreased.

[Key words]Lung cancer; Beclin1; p53; p16

肺癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。多数患者在确诊时已失去根治的机会,早期发现和诊断肺癌及其恶性度的评估对其治疗和预后都有重要意义。肺癌早期诊断与恶性度评估分子标志物的筛选是临床肿瘤工作者亟待解决的课题[1,2]。

自噬现象是一种高度保守的细胞行为,存于所有的物种。研究表明Beclin1是唯一发现的哺乳动物的自噬基因,是自噬的执行者;又是一类新的抑癌基因,只有在双等位染色体都表达时才发挥抑癌作用。Beclin1基因的缺失性突变导致自发性肿瘤发生率提高。Beclin1基因表达异常(减少或缺失)是否为肿瘤细胞早期事件?如果研究结果是肯定的,那么我们可以将其作为早期诊断的指标之一,甚至有可能成为高危人群筛选指标之一。

p53是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的肿瘤抑制蛋白,在多种恶性肿瘤中有异常表达。正常状态下,其效应分子的基因产物可防止细胞转化癌变,当发生突变时可成为一个直接的肿瘤基因,在细胞恶性转化中起作用,被认为是早期癌标志。p16蛋白是迄今为止发现的第一个直接控制细胞增殖周期的固有蛋白,通过调节Rb蛋白的活性防止细胞过度增殖。p16蛋白的丢失、突变广泛存在于人类恶性肿瘤中,因此p16蛋白既可作为早期诊断癌变的指标,也可用于评估预后。

本文旨在通过分析处于肺癌各个分期的50例肺癌患者的Beclin1、p53、p16的表达情况,探讨Beclin1、p53、p16与肺癌恶性度的关系,从而为临床诊断、治疗肺癌提供依据[3]。

1 资料与方法

1.1 标本与来源

选择2009年1～12月在山西省汾阳医院就诊的肺癌患者,取肺组织50例(每期10例)。入选条件和排除条件如下:(1)手术切除标本。所有标本均经病理学诊断证实,术前均未接受放、化疗。(2)均经病理确诊为肺癌。(3)另取癌旁正常肺组织(至少距癌边缘3cm)。(4)病理排除合并炎性改变等的可能。

1.2 方法

1.2.1 分组方法 依据1997年UICC公布的肺癌TNM分期,同时结合临床、胸部CT、X线检查将入选病例进行分组:按肿瘤分期0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分为5组,各组年龄、性别等控制情况基本匹配。

1.2.2 实验方法 肺癌及相应癌旁手术标本经10%甲醛固定,石蜡包埋连续切片,苏木精-伊红染色,进行组织病理学观察后,采用PV-9000通用型二步法免疫组化法进行Beclin1、p16和p53基因表达水平的检测。

1.2.3 结果判断 定性:光学显微镜观察Beclin1、p16和p53,阳性着色部位分别为细胞浆和细胞核,呈棕黄色,而阴性细胞不着色而显示复染的蓝色。定量:每张切片随机地在200倍显微镜下取5个视野,录入GD-6多媒体彩色病理图像分析系统,测定Beclin1、p53、p16的积分光密度。

1.3 统计学方法

用SPSS10.0软件包对Beclin1、p53、p16的表达情况与其各自对应的分期分别进行方差分析与LSD-t检验。

2 结果

肺癌分期的五组Beclin1、p53、p16的表达情况差别有统计学意义(P

本研究显示:各期肺癌组织中Beclin1、p53、p16表达的高低与肺癌的临床分期有关联;随肺癌分期的增高,p53表达量增高,p16表达量下调,同时Beclin1表达量降低。见图1。

3 讨论

国内外学者对Beclin1的研究大多集中在宫颈癌等生殖系统肿瘤,对其与肺癌的关系研究很少。对于p53、p16及Beclin1的测定方法大多是RT-PCR法、Western blot等,这些方法只能判断阳性病例而不能定量诊断[4,5]。Beclin1与肺癌相关性的研究目前国内报道较少,与肺癌病理分期相关的研究尚未见报道。

本文通过检测不同分期肺癌组织中Beclin1、p53、p16的表达情况,揭示自噬蛋白与凋亡蛋白在肺癌发生发展中的相互作用,研究三者之间及其与肺癌临床病理分期的关系,为早期诊断肺癌提供理论依据。通过研究了解肺癌发生、发展过程中Beclin1、p53、p16的表达情况,通过对肺癌组织中Beclin1、p53和p16表达的定量分析揭示自噬蛋白与凋亡蛋白在肺癌发生发展中的相互作用,为肿瘤早期诊断提供一条新思路。

[参考文献]

[1] Gorski DJ,Chittaranjan S,Pleasance ED,et al. A SAGE approach to discovery of genes involved in autophagic cell death[J]. Curr Biol,2003,13(4):358-362.

[2] Tan EM,Zhang J. Autoantibodies to tumor-associated antigens:reporters from the immune system[J]. Immunol Rev,2008,22(5):328-340.

[3] Gadducci A,Ferdeghini M,Buttitta F,et al. Assessment of the prognostic relevance of serum anti-p53 antibodies in epithelial ovarian cancer[J]. Gynecol Oncol,1999,72(3):76-81.

[4] Tang R,Ko MC,Wang JY,et al. Humoral response to p53 in human colorectal tumors:a prospective study of 1,209 patients[J]. Int J Cancer,2001,94(13):859-863.

[5] Lokshin RA,ZaKeri Z. Apoptosis,autophagy,and more[J]. Int J Bochem Cell Biol,2004;36(12):2405-2419.

(收稿日期:2009-12-09)