中性粒细胞及淋巴细胞VCS参数在手足口病诊治中的应用

手足口病是由多种人肠道病毒引起的一种儿童常见传染病，传染性强，常出现暴发或流行，重症病例病情进展迅速，可致死亡或留有后遗症。Beckman Coulter GEN.S五分类血细胞分析仪可在规定时间内分析8 000多个白细胞VCS参数，对白细胞进行分类。其中，V代表细胞体积，采用电阻抗法测定细胞体积大小；C代表射频传导性，可测量细胞内部结构差异，了解细胞内部核质比例、胞内密度和化学成分差异；S代表激光散射，可测得细胞内核分叶状况和细胞质颗粒情况＼[1＼] 。中性粒细胞VCS参数是诊断急性细菌感染的重要指标＼[2＼]，现对手足口病病例外周血中性粒细胞平均体积（MNV）、平均射频传导性（MNC）、平均激光散射（MNS）参数及各自的分布宽度（MNVSD、MNCSD、MNSSD）和淋巴细胞平均体积（MLV）、平均射频传导（MLC）、平均激光散射（MLS）参数及各自的分布宽度（MLVSD、MLCSD、MLSSD）进行分析研究，为疾病诊断和治疗提供参考。

1对象与方法

1.1对象

按入院先后，用随机数字法随机选取2013年3月1日至10月31日绍兴市立医院住院手足口病患儿159例，其中普通型131例，男82例，女49例，年龄0～7岁；重型28例，男17例，女11例。排除手足口病伴感染、血液病等患儿。诊断标准参考《手足口病诊疗指南（2010年版）》＼[3＼]。健康对照者选取同时期健康体检儿童45例，男25例，女20例，年龄1～7岁，均无明显感染症状。

1.2仪器与试剂

采用Beckman Coulter GEN.S五分类血细胞分析仪检测，试剂为原装配套试剂，仪器每年定期参加卫生部室间质量控制评价，每天进行室内质量控制评价，确保检测时仪器状态稳定。

1.3方法

采用EDTAK2抗凝真空管采集全血2 mL，于2 h内完成检测。记录每份标本中性粒细胞和淋巴细胞的VCS参数及各自的分布宽度。疾病分期界定为急性期：入院后发热、皮疹等临床症状明显；恢复期：体温降至正常，临床症状消失。

1.4统计学分析

采用SPSS 19.0统计软件进行统计学分析，正态分布的计量资料用x-±s表示，两两比较采用独立样本t检验及配对样本t检验，检验水准α=0.05。

2结果

急性期普通型和重型手足口病组与健康对照组MNV、MNVSD、MNC、MNS、MLV、MLVSD、MLC、MLCSD、MLS差异有统计学意义，见表1。普通型与重型手足口病组各参数比较差异均无统计学意义（P均>0.05）。

普通型和重型手足口病组急性期与恢复期MNV、MNVSD 、MNC、MLV、MLC参数差异均有统计学意义。见表2。

恢复期普通型手足口病组MNV、MNVSD、MNC、MNS、MLV、MLVSD、MLC、MLSc健康对照组差异有统计学意义；重型手足口病组MNVSD、MNC、MNS、MLVSD、MLC、MLS与健康对照组差异有统计学意义。见表3。

3讨论

手足口病由肠道病毒引起，常见病毒有柯萨奇A组16型（CoxA16）、肠道病毒71型（EV71）＼[4＼]。多发生于学龄前儿童，尤其是3岁以下幼儿＼[5＼]。患者和隐性感染者均为传染源，主要通过消化道、呼吸道和密切接触传播，少数重症病例（尤其是3岁以下者）表现病情进展迅速，发病1～5 d出现脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、肺水肿、循环障碍等，脑干脑炎最为凶险，极少数病例病情危重，可致死亡，存活病例可留有后遗症＼[6＼]。近年来，对于肠道病毒感染后机体体液免疫、细胞免疫功能异常改变的研究报道较多，而引起外周血中性粒细胞和淋巴细胞VCS参数的变化报道较少。本研究对手足口病患儿全血采用五分类血细胞分析仪检测得到的中性粒细胞和淋巴细胞的VCS参数及分布宽度进行分析。

本研究结果显示，急性期普通型和重型手足口病患儿的MNV、MNVSD、MLV、MLVSD、MLCSD均高于健康者，说明患儿中性粒细胞和淋巴细胞的体积和分布宽度均明显变大，而MNC、MNS、MLC、MLS均低于健康者，说明细胞射频传导性和激光散射值均变小。当病毒感染时，中性粒细胞发生炎性反应以及病毒对中性粒细胞的毒性作用，使中性粒细胞发生空泡变性、退化、中毒颗粒增多等形态学的变化，中性粒细胞大小和分布宽度均变大。在病毒感染时，T淋巴细胞和B淋巴细胞等参与免疫应答，患儿T淋巴细胞、T辅助细胞、T辅助细胞/抑制性T淋巴细胞均低于相应年龄段正常参考值水平，并随病程进展有逐渐上升趋势＼[7＼]，血中IgM升高，IgA和IgG均降低＼[8＼]。病毒感染使淋巴细胞增生并发生形态学上的变化，表现为胞体变大、胞质增多、嗜碱性增加、母细胞化等＼[9＼]。患儿淋巴细胞形态呈异型性改变，比例高达80.2%＼[10＼]，与仪器测得的MLV、MLC、MNS等变化均相符。无论是急性期还是恢复期，普通型和重型之间的VCS参数均无明显差异，因此无法通过VCS参数来判断疾病为普通型还是重型。随着疾病的进展，恢复期患儿MNV、MNVSD 、MNC、MLV、MLC小于急性期，而MNCSD、MLVSD、MLCSD、MLS、MLSSD与急性期比较无明显变化；恢复期MNVSD、MLVSD参数仍比健康者高，MNC、MNS、MLC、MLS比健康者低；普通型手足口病患儿MNV、MLV在疾病恢复期均高于健康者，而重型手足口病患儿MNV、MLV在疾病恢复期已降至健康者水平。说明中性粒细胞和淋巴细胞的体积大小和分布宽度随着病情的恢复也逐渐恢复正常，而射频传导性并未随着病情的恢复而恢复，表明虽然细胞体积大小在恢复，而细胞内部的结构、密度等仍在发生着病理性改变。

综上所述，中性粒细胞和淋巴细胞体积参数（MNV、MLV）及其分布宽度（MNVSD、MLVSD）在手足口病急性期升高，并随着疾病的发展，至恢复期逐渐下降或至正常，可以为疾病的早期诊断和病情转归判断提供线索。而射频传导性和激光散射值参数（MNC、MNS、MLC、MLS）在手足口病急性期降低，并随着疾病的发展，至恢复期继续下降，说明中性粒细胞和淋巴细胞的许多特性变化并没有随着病情的转归而恢复。本研究仅基于医院收住的手足口病患儿与健康组对照分析，对于中性粒细胞和淋巴细胞VCS参数在手足口病患儿总体中的变化以及与其他感染性疾病时变化的对照分析尚待进一步研究。

参考文献

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[2]王剑超，马春芳，吕国才，等.中性粒细胞VCS参数在急性细菌感染筛查中的初步应用＼[J＼].中华医学检验杂志，2009，32（2）：179183.

[3]中华人民共和国卫生部.手足口病诊疗指南（2010年版）＼[EB/OL＼].（20100420）＼[20150505＼].http：///mohyzs/s3586/201004/46884.shtml.

[4]LIU W Y， WU S M， XIONG Y， et al.Cocirculation and genomic recombination of coxsackievirus A16 and enterovirus 71 during a large outbreak of hand， foot， and mouth disease in central China＼[J＼].PLoS One，2014，9（4）： e96051.

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[9]俞善丁.临床基础检验学＼[M＼].北京：人民卫生出版社，1997：81.

[10]付萌，张同华.86例小儿手足口病外周血片异型淋巴细胞检出率分析＼[J＼].临床血液学杂志（输血与检验版），2011，24（2）：236237.

（收稿日期：20150616）