吉林地区丙型肝炎病毒基因分型及临床意义的研究

【摘要】 目的 了解吉林地区HCV基因分型情况，为HCV感染者的诊断和治疗提供重要的科学依据。方法 荧光定量RTPCR检测165例抗HCV阳性血清标本，并对153例HCVRNA阳性的血清标本应用基因芯片法进行HCV基因分型。结果 153例阳性标本中HCV1b型85例，HCV2a型63例，HCV1b/2a混合型5例。结论 吉林地区HCV基因型主要为1b型，2a型次之，同时存在HCV1b/2a混合型。

【关键词】

丙型肝炎病毒;荧光定量RTPCR;基因分型

Genotyping and clinical significance of hepatitis C virus in Jilin

LI Xiaofeng，MA Yinfu,YANG Guangmin. Peoples Hospital of Jilin Province，Changchun 130021，China

【Abstract】 Objective

To investigate the distribution of hepatitis C virus (HCV) genotypes in Changchun and to provide information for the diagnosis and treatment of HCV.Methods Eightynine samples HCVRNA positive from 165 samples antiHCV positive sera by fluorescence quantitative RTPCR were further genotyped by gene chip.Results Fortynine sera was type 1b，63 sera was type 2a and 3 sera was 1b/2a mixedtype among 153 samples with HCVRNA positive.Conclusion HCVlb is the most dominant genotype，HCV2a is the second and HCV1b/2a mixedtype also exists in Changchun.

【Key words】

Hepatitis C virus;Fluorescence quantitative RTPCR;Genotype

作者单位：130021长春，吉林省人民医院

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)是丙型肝炎的病原体, 1989年由美国学者首次分离, 1991年国际病毒分类与命名委员会将HCV归类为黄病毒科丙型肝炎病毒属。HCV是小的有包膜的单股正链RNA病毒，属黄病毒科丙型肝炎病毒属，颗粒大致呈球形，直径约50 nm，在核衣壳外包绕含脂质的囊膜，囊膜上有突起，长约9400个核苷酸1］。人感染丙肝病毒后比感染乙肝病毒更容易转化成慢性肝炎，并可能发展成肝硬化和肝癌。HCV基因型不仅影响着丙肝的临床发展过程，而且与抗病毒治疗和肝细胞癌的发生密切相关。因此，如何尽早、及时和准确地检测出HCV基因型显得非常重要。目前已报道HCV的主要基因型多达11个，基因亚型超过70种2］。为了解吉林地区HCV基因型分布状况，对本地区165例抗HCV阳性血清标本进行了HCV基因型分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 试验组为吉林省人民医院门诊及住院患者165例抗HCV阳性血清标本，其中男98例，女67例，有输血史56例，年龄6～80岁。阴性对照组为20例健康体检者血清标本。

1.2 试剂 丙型肝炎病毒(HCV)核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒：购于中山大学达安基因股份有限公司。丙型肝炎病毒基因分型检测芯片试剂盒：由中科院上海微系统与信息技术研究所研制，宁波瑞芯生物科技有限公司生产。自备试剂：氯仿、异丙醇、75%乙醇。

1.3 仪器 美国PE7300荧光定量PCR，美国HBPχ222U型扩增仪，fresco型低温离心机，BENQ 5000 s扫描仪等。

1.4 方法

1.4.1 HCVRNA定量检测 按照丙型肝炎病毒(HCV)核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒使用说明书进行操作，① RNA提取。②逆转录。③PCR扩增及荧光检测。④结果分析。抽取HCVRNA含量≥1.0×103拷贝/ml的阳性标本进行基因分型检测。

1.4.2 HCV基因分型检测 按照丙型肝炎病毒基因分型检测芯片说明书进行操作：①RNA提取与逆转录。②PCR扩增。③扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。④芯片杂交与显色。

2 结果

2.1 HCVRNA定量检测结果 97例抗HCV阳性标本中HCVRNA含量≥1.0×103拷贝/ml的标本为89例，HCVRNA含量

表1

HCVRNA含量检测结果

HCVRNA含量(拷贝/ml)

标本数122454263217165

2.2 HCV基因分型检测结果 对153例HCVRNA含量≥1.0×103拷贝/ml的标本和20例健康体检者进行基因分型检测。PCR扩增产物电泳阴性对照和阳性标本在芯片上进行杂交、显色，检测结果见表2。

表2

HCV基因分型结果(例，%)

分型例数分型率

1b8555.5

2a6341.2

1b/2a53.3

合计153100

3 讨论

HCV基因型的分布与地域有很大关系。现知欧美国家多数HCV1a型感染，而亚洲国家以1b型为主，2a型次之;3a型在泰国、新加坡较多;中东、南非和香港地区常见的基因亚型分别为4a、5a和6a;中国地区丙肝基因型以HCV1b型为主，其次为2a型，另有少量的2b型存在35］。本文检测153例HCVRNA阳性标本结果显示HCV1b型85例占55.5%，2a型63例占41.2%，1b/2a混合型5例占3.3%。说明长春地区以1b型为主，2a型次之。

本文基因芯片法定性检测HCVRNA与荧光定量PCR检测HCVRNA阳性符合率为100%。20例健康对照者血清基因芯片检测结果均为阴性，阴性符合率为100%。说明基因芯片法定性检测HCVRNA结果可靠。应用基因芯片法进行基因分型不仅具有准确性好、灵敏度高、特异性强的特点，而且简便、快速，不需荧光标记和专用的荧光扫描仪。根据文献报道6］，HCVRNA定量检测的阳性率比抗HCV的阳性率高。本文结果显示：165例抗HCV阳性标本中，HCVRNA含量

HCV是一种全球性传染的、给人类健康带来极大威胁的病原体，是引起人类慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要病原之一7］。国内外研究表明，HCV不同的基因型对肝脏损伤的程度不同，1b型对肝脏的损伤要比其他型严重得多8］。HCV对干扰素的应答率也不同，Kandi等9］报道HCV1b型感染多为慢性活动性肝炎，2a型比1b型对干扰素敏感。综上所述，HCV基因型与肝病严重程度有着密切关系，具有明确的临床意义，并且对抗病毒治疗产生很大影响。因此，HCV基因分型检测可为HCV感染者的诊断和治疗提供重要的科学依据。

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