时间：2022-09-03 07:11:01
作者：李伟东，狄留庆，姚海峰，蔡宝昌
【摘要】
目的测定通塞脉微丸及中间体中总黄酮的含量。方法采用紫外分光光度法。结果选择甘草苷为标准品，标准曲线方程为：a＝24.667c-0.034 46（r=0.999 9），通塞脉微丸总黄酮的含量范围在17％～21％之间；通塞脉微丸中间体总黄酮的含量范围在27％～29％之间。平均加样回收率为99.44％（n＝6），rsd为0.97％。结论该方法操作简便，结果可靠，重复性好，可作为该制剂质量控制的方法。
【关键词】 通塞脉微丸； 通塞脉微丸中间体； 总黄酮； 紫外分光光度法
abstract：objectiveto determine the content of general flavones in tongsaimai pellets and its intermediate products.methods ultraviolet spectroscopic method was used. resultsliquiritin was served as a reference ,the standard linear equation was a=24.667c-0.034 46(r=0.999 9), the average amount range of general flavones in tongsaimai pellets was 17%～21%,while the average amount range of general flavones in tongsaimai pellets intermediate products was 27%～29%. the average recovery was 99.44% (n=6),rsd was 0.97%. conclusionthis method is convenient, rapid and accurate. it can be used for qulity control in production of tongsaimai pellets.
key words：tongsaimai pellets; tongsaimai pellets intermediate products; general flavones; ultraviolet spectroscopic method
通塞脉微丸是以黄芪、当归、金银花、玄参、甘草等6味药材精制而成的复方制剂，是以缺血性脑中风为主治病症的新型中药制剂，具有清热养阴、活血化瘀的功效［1］。通塞脉微丸组方中各单味药的化学成分研究表明，其主要含有黄酮类、皂苷类、有机酸类等成分，这几类成分群对心脑血管疾病均有较好的治疗和保护作用。为了考察有效成分群的含量，本文对总黄酮含量进行了定量分析，为通塞脉微丸有效部位群的质量控制提供依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器tu-1800s紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；hh-6数显恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；kq-500e型超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）。
1.2 试剂与药品95％乙醇（医用酒精，南京白敬宇实业公司）；亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，甲醇、乙醇、醋酸乙酯（均为ar级，上海久亿化学试剂有限公司）；甘草苷（自制），经hplc面积归一化测定含量大于98%；通塞脉微丸（南京中医药大学中医药研究院制剂研究室提供，批号：031006，031016，031025，031103，031108）；通塞脉微丸中间体（自制，批号：041104，041106，041108）。
2 方法与结果
2.1 实验溶液的制备［2］
2.1.1 对照品溶液的制备精密称取甘草苷标准品7.68 mg，置25 ml容量瓶中，加60%乙醇溶解并定容(c=0.307 2 mg/ml)。
2.1.2 供试品溶液的制备①精密称取微丸约30 mg，置25 ml容量瓶中，加60％乙醇溶解并定容，取3 ml样品溶液进行测定；②精密称取微丸中间体约30 mg，置25 ml容量瓶中，加60％乙醇溶解并定容，取1 ml样品溶液进行测定；③取黄芪、金银花、甘草适量，分别置10 ml容量瓶中，加60％乙醇溶解并定容，取1ml样品溶液进行测定。
2.1.3 空白液制备取10 ml容量瓶，加入5%亚硝酸钠溶液和10%硝酸铝溶液各0.3 ml，摇匀，放置6 min后，加4%氢氧化钠溶液4 ml，用60%乙醇定容至10 ml，备用。
2.2 测定波长的确定及样品测定吸取对照品溶液、供试品溶液、空白对照溶液分别加入5%亚硝酸钠和10%硝酸铝各0.3 ml，摇匀，放置6 min，分别加入4%氢氧化钠4 ml，用60%乙醇加至10 ml，摇匀，放置12 min，置1 cm比色杯中，于200～800 nm范围内测定吸收光谱。结果见图1～2。
结果表明，以甘草苷为对照品测定总黄酮的含量，最大吸收波长宜选择410 nm。
2.3 标准曲线测定分别吸取对照品溶液0，0.5，1.0，2.0，3.0，5.0 ml于10 ml容量瓶中，加入5%亚硝酸钠和10%硝酸铝各0.3ml，摇匀，放置6 min，分别加入4%氢氧化钠4 ml，用60%乙醇加至刻度，摇匀，放置12 min，以空白作对照，置1 cm比色杯中，于410 nm处测定吸收度，并以吸光值a为纵坐标，浓度c为横坐标绘制标准曲线。标准曲线回归方程为：a=24.667 c-0.034 46，r=0.999 9。
2.4 精密度实验将对照品重复测定6次。结果平均浓度为0.030 3 mg/ml，rsd为0.14%。
2.5 重复性实验按供试品测定方法，取同一批样品约10 mg重复测定6份，结果样品中总黄酮平均含量为21.69%，rsd为1.08%。
2.6 稳定性实验取供试品溶液显色后，用60%乙醇定容至10 ml，摇匀，分别于暗处放置10，20，40，60，120，240 min后测定。结果表明,供试品吸收值有在240 min内稳定，实验选择在20 min内测定。
2.7 加样回收率实验精密称取通塞脉微丸（总黄酮含量为21.52％）约10 mg，再精密加入甘草苷对照品(c=0.436 0 mg/ml)5ml，用60%乙醇定容至25 ml，取3 ml该溶液，按“2.3”项下“加5%亚硝酸钠……”方法显色，以空白为对照，测定吸光度，加样回收率测定结果见表1。表1 加样回收率测定结果（略）
2.8 样品测定
2.8.1 微丸的总黄酮含量测定分别称取5批微丸样品，测定样品中总黄酮的含量。结果见表2。表2 通塞脉微丸中总黄酮的含量（略）
2.8.2 微丸中间体的总黄酮含量测定分别称取3批通塞脉微丸中间体，测定样品中总黄酮的含量。结果见表3。表3 通塞脉微丸中间体总黄酮含量（略）
2.8.3 单味药黄芪、金银花、甘草相应部位总黄酮含量的测定结果见表4～6。表4 黄芪相应部位的总黄酮含量测定，表5 金银花相应部位的总黄酮含量测定，表6 甘草相应部位的总黄酮含量测定（略）。
‘
2.9 单味药黄芪、金银花、甘草占全方中总黄酮含量的比例按黄芪、金银花、甘草在全方所占的比例及其各自的出膏率，计算得黄芪、金银花、甘草占全方中总黄酮含量的比例。结果见表7。表7 各单味药占全方中总黄酮含量的比例（略）
3 讨论
实验分别采用3种标准品(甘草苷、芦丁、甘草素)作对照，实验结果表明通塞脉微丸中总黄酮含量，以芦丁和甘草苷作对照时含量较高，而以甘草素为对照时含量较低，但由于通塞脉微丸中不含有芦丁，因此，选择甘草苷作为对照品。
实验同时对通塞脉微丸组方药材——黄芪、金银花、甘草的相应部位总黄酮的含量进行了测定，根据它们在组方中的比例以及各自出膏率的情况，计算出它们占全方总黄酮含量的比例，结果以甘草、金银花贡献较大，而黄芪则贡献小。
【参考文献】
［1］王爱云，陆茵，严令耕，等. 通塞脉微丸改善缺血性中风大鼠血液流变状态的实验研究［j］.中国血液流变学杂志，2007，17（1）：52.
［2］张雪辉，赵元芬，陈建民.甘草中总黄酮的含量测定［j］.中国中药杂志,2001 ,26(11) :746.