重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗免疫商品肉鸭和SPF鸭的效果研究

摘要：为了解重组禽流感病毒H5 亚型二价灭活疫苗（H5N1，Re-6 株+ Re- 8株） 的免疫效果，为临床上制定合理的禽流感疫苗免疫程序提供依据，试验选取14日龄樱桃谷商品肉鸭30只和SPF鸭30只，注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-8株）0.4 mL/只作为首次免疫，饲养至28日龄时，樱桃谷肉鸭、SPF鸭随机分成A、B和C、D组，每组均为15只，B、D组再次颈部皮下注射该疫苗0.5 mL/只，均从14日龄起每周采集血清一次，直至56日龄，检测H5抗体情况。结果表明：不同品种鸭对同一亚型禽流感疫苗免疫效果存在差异，首次免疫的日龄可以提至7～10日g，商品肉鸭一次免疫即可满足防疫需要。

关键词：禽流感灭活疫苗（H5N1，Re-6 株+ Re-8株）； 商品肉鸭； SPF鸭； 免疫效果

中图分类号：S852.5+2 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2017）01-0126-04

Abstract To investigate the immune effects of recombinant H5N1 subtype avian influenza inactivated vaccine （H5N1， Re-6 strain + Re-8 strain） and provide clinical basis for formulating the reasonable avian influenza vaccine immune program， thirty 14 days old Cherry Valley ducks and thirty 14 days old SPF ducks were immunized with H5N1 subtype AI （Re-6 strain + Re-8 strain） inactivated vaccine of 0.4 mL each duck. To 28 days old， Cherry Valley ducks were randomly divided into two groups of A and B，and SPF ducks were randomly divided into two groups of C and D. Each group had 15 ducks. The Cherry Valley ducks in B group and SPF ducks in D group were immunized with 0.5 mL H5N1 inactivated vaccine again each duck. The serum sample of each duck was separately collected and detected every week from 14 days old to 56 days old. It was showed that the immune effects were different for different species of ducks. The most suitable time of the first immunization was from 7 days old to 10 days old. For Cherry Valley ducks， immune one time was enough.

Keywords Avian influenza inactivated vaccine （H5N1， Re-6 strain+ Re-8 strain）； Cherry Valley ducks； SPF ducks； Immune effect

我国是养鸭大国，山东省是养鸭大省。2013年山东省商品肉鸭存栏量2.72亿只，出栏量13.15亿只；2014年存栏量和出栏量与2013年持平，占全国总量的30%以上；2015年山东省肉鸭出栏量约为11.4亿只。禽流感（Avian influenza，AI）是由正粘病毒科A型流感病毒引起的一种A类烈性传染病，病原亚型多，临床症状较复杂[1-3]。为提高疫苗与流行毒株的匹配性，更好地防控禽流感，2015年12月10日，农业部办公厅下发了《关于调整高致病性禽流感疫苗种毒的通知》，Re-8株疫苗投放市场。疫苗品种调整后，2016年重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-8株）作为品种之一投放市场，用于预防H5亚型禽流感病毒引起的禽流感。山东地区饲养肉鸭的数量较多，特别是樱桃谷商品肉鸭。由于肉鸭饲养周期很短，一般45日龄内出栏，快的38日龄即可出栏，饲养规模和密度相当大。禽流感贯穿在肉鸭不同饲养阶段，因此，探索樱桃谷商品肉鸭高致病性禽流感的免疫接种程序对高致病性禽流感防控意义十分重大。

1 材料与方法

试验在山东省农业科学院家禽研究所实验动物房进行。

1.1 试验动物

樱桃谷商品肉鸭，由山东省农业科学院家禽研究所饲养；SPF 鸭种蛋，购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，由山东昊泰实验动物繁育有限公司孵化并饲养。樱桃谷商品肉鸭和SPF鸭均采用笼养模式。

1.2 疫苗

重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-8株），某生物制品厂生产。

1.3 诊断抗原及标准阳性血清

禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原：Re-6（生产批号为 2015013）和Re-8（生产批号为 2016001），均为哈尔滨维科生物技术开发公司生产。标准阳性血清： 哈尔滨维科生物技术开发公司生产。

1.4 试剂与仪器

0.1 mol/L PBS （pH 值7.2），1%鸡红细胞悬液； 一次性V型血凝板，微量移液器，微量振荡器，离心机。

1.5 免疫效果评价试验方案

1.5.1 商品肉鸭试验组 樱桃谷商品肉鸭30只饲养至14日龄，颈部皮下注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-8株）0.4 mL/只作为首次免疫；28日龄随机分为A、B两组，每组15只，A组不再免疫，B组28日龄时再次颈部皮下注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-8株）0.5 mL/只作为二次免疫，均饲养至56日龄。

1.5.2 SPF鸭试验组 SPF鸭30只饲养至14日龄，颈部皮下注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-8株）0.4 mL/只作为首次免疫；28日龄随机分为C、D两组，每组15只，C组不再免疫，D组28日龄时再次颈部皮下注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-8株）0.5 mL/只作为二次免疫，均饲养至56日龄。

对A、B、C、D四组鸭分别于14、21、28、35、42、49、56日龄采集血清检测H5抗体情况。用国家禽流感参考实验室提供的Re-6株和Re-8 株血凝诊断抗原测定HI 抗体效价，进行抗体跟踪，分析抗体情况。

2 结果与分析

2.1 樱桃谷商品肉鸭免疫效果

图1显示，14日龄时，樱桃谷商品肉鸭的母源抗体均为0，而后抗体水平逐渐升高，至28日龄，Re-6抗体几何效价平均值达到2.7 log2。而后，A组抗体水平逐渐升高，35日龄（首免21 d）时，Re-6抗体几何效价平均值达到4.0 log2，平均抗体合格率达到86.7%，高于国家农业部规定禽流感血清抗体合格率≥70%的要求，至42日龄（首免28 d）达最高，Re-6抗体几何效价平均值为5.9 log2，随后下降；B组抗体水平一直呈上升趋势，至56日龄（首免42 d，二免28 d）时，抗体几何效价平均值可达8.0 log2，且B组抗体水平一直高于A组。

图2表明，樱桃谷商品肉鸭Re-8抗体水平变化趋势同Re-6，即二免前均呈上升趋势，而后A组呈先上升后降低的趋势，B组呈一直上升趋势，且B组高于A组。其中，A组35日龄（首免21 d）Re-8抗体几何效价平均值达3.5 log2，平均抗体合格率达53.3%，低于国家农业部规定禽流感血清抗体合格率≥70%的要求， 42日龄抗体水平升至最高，Re-8抗体几何效价平均值达5.6 log2，到56日龄降至4.6 log2；B组56日龄Re-8抗体几何效价平均值达7.8 log2。

2.2 SPF鸭免疫效果

如图3所示，SPF鸭21日龄（首免7 d）Re-6抗体几何平均效价为2.2 log2，28日龄可达4.0 log2；而后随着SPF鸭的生长，C组Re-6抗体水平缓慢上升，上升幅度远小于D组，至42日龄， C组继续增加，增加幅度变大，但D组Re-6抗体水平一直高于C组；56日龄时， Re-6抗体几何效价平均值升至最高，C组达6.2 log2， D组可达8.8 log2。

如图4可见，SPF鸭21日龄（首免7 d）Re-8抗体几何平均效价可到2.4 log2，首免14 d后抗w水平可达4.3 log2；而后随着SPF鸭的生长，C组Re-8抗体水平呈缓慢上升趋势，D组Re-8抗体水平呈曲折上升趋势， 均在56日龄达最大，Re-8抗体几何效价平均值C组达5.5 log2，D组达8.2 log2。

3 讨论与结论

3.1 不同品种鸭的禽流感疫苗免疫效果差异

樱桃谷商品肉鸭和SPF鸭接种重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-8株）后，均能产生一定水平的 HI抗体。试验开始前检测其母源抗体均为阴性，试验是在相同环境中进行，故试验中母源抗体的影响可忽略。一次免疫组35日龄时，樱桃谷商品肉鸭Re-6 和Re-8抗体几何效价分别为4.0 log2和3.5 log2；SPF鸭Re-6和Re-8抗体几何效价分别为4.3 log2和4.5 log2。两次免疫组56日龄时，樱桃谷商品肉鸭Re-6 和Re-8抗体几何效价分别为8.0 log2 和7.8 log2，而SPF鸭Re-6和Re-8抗体几何效价分别为8.8 log2和8.2 log2。SPF鸭所产生的 HI 抗体效价比樱桃谷商品肉鸭略高，显示不同品种鸭对禽流感疫苗免疫效果存在一定差异。

3.2 首免日龄对鸭流感疫苗免疫效果的探讨

由于大多数种鸭场对种鸭禽流感免疫均比较重视，种鸭群通常都拥有比较高的禽流感抗体，其所生产的雏鸭基本拥有比较高的母源抗体，一般能在1～15日龄保护雏鸭，帮助其抵御高致病性禽流感病毒的感染。母源抗体会干扰禽流感灭活疫苗对雏鸭的免疫效果，较严重的可能产生免疫抑制。大日龄再对雏鸭进行禽流感免疫，免疫空档则过长，会提高雏鸭受高致病性禽流感病毒感染的风险。因此笔者选择14日龄进行首次免疫，28 d后Re-6、Re-8抗体水平达到高峰，此时肉鸭已经是42日龄。但实际生产中商品肉鸭一般45日龄内出栏，快的38日龄即可出栏，因此商品肉鸭的首次免疫日龄可以提前。考虑到母源抗体的影响和日龄过小免疫器官不完善的因素，可将首次免疫的日龄提至7～10日龄，这与农业部的《2012年国家动物疫病强制免疫计划》中“商品肉鸭、肉鹅7～10日龄时，用H5N1亚型禽流感灭活疫苗进行一次免疫即可”[4]的规定相符。

3.3 免疫次数及免疫间隔时间对鸭流感疫苗免疫效果的研究

对樱桃谷商品肉鸭和SPF鸭两次免疫的间隔时间为14 d，二次免疫28 d 内，樱桃谷商品肉鸭和SPF鸭的抗体水平一直处于上升趋势，且两次免疫后的效果优于一次免疫。由于商品肉鸭饲养周期短，一次免疫即能满足防疫需要，而蛋鸭要长期维持高抗体水平，因此需要二次免疫。在产蛋前免疫疫苗品种多和免疫次数多的情况下，首次免疫和二次免疫间隔14 d是可行的。

参 考 文 献：

[1] Saif Y M.禽病学[M].第十二版.高福，苏敬良，索勋译.北京： 中国农业出版社，2012： 171-193.

[2] 艾武，亓丽红，王春玲，等. 山东省2011年春季中标禽流感灭活疫苗质量检测及抗体消长规律分析[J].山东农业科学，2012，44（12）：89-92.

[3] 董以雷，徐怀英，刘涛，等.重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗免疫SPF鸡、SPF鸭后抗体消长规律分析[J].山东农业科学，2014，46（6）：123-125.

[4] 2012年高致病性禽流感免疫计划[J]. 家禽科学，2012（2）：52.