木瓜子中总黄酮的提取工艺研究

【摘要】本文通过利用甲醇浸提、单因素试验和正交试验探讨了从木瓜子中提取黄酮的最佳工艺条件。实验结果表明：提取时间为3h,料液比为1:80，提取温度为70℃。

【关键字】木瓜子 黄酮类化合物 提取工艺 正交试验

到目前为止，从木瓜子中提取黄酮类化合物方法的研究鲜有报道，本文利用实验数据建立一元线性回归方程、回归直线，并用方差分析法和相关系数法检验回归方程的有效性。采用单因素试验与正交试验方法，对用无水甲醇提取酸木瓜子中总黄酮的工艺进行了探讨。为木瓜子中黄酮类化合物成分的提取提供了理论基础。

一、 材料与仪器

1.试验材料。芦丁：中国医药（集团）上海化学试剂公司（生化试剂）。无水甲醇（AR）：洛阳市化学试剂厂。木瓜子：采集于广东石油化工学院

2.仪器设备。分析天平；电热恒温水浴锅；722-光栅分光光度计；101A-2型数显电热鼓风干燥箱；高速万能粉碎机。

二、实验方法

1.原料的预处理。把新鲜的木瓜子放入干燥箱中，用60℃的温度干燥，然后再用粉碎机粉碎，干燥至恒重后冷却备用

2.分光光度法测定黄酮类化合物的含量。黄酮类化合物具有特定的紫外吸收带，其结构中的肉桂酰环产生的Ⅰ带在300~400nm内，由苯甲酰环产生的Ⅱ带在240~285nm内，不同类型的黄酮类化合物在这两个吸收带的吸收强度不同。对照品芦丁在这两个吸收带都有强吸收，含黄酮类化合物的原料经提取纯化后，可直接于最大吸收波长处测定其吸光度，以芦丁为对照品对照计算其含量。但由于在紫外低波长区容易会有溶剂干扰，可能引起误差，故选择芦丁在Ⅰ带的最大吸收波长359nm作为测量木瓜子中总黄酮含量的波长。

3.工作曲线回归方程的建立。准确称取标准芦丁对照品97.0mg，用无水甲醇溶解，转移入100mL容量瓶中，用无水甲醇定容，摇匀。精确移取10.00mL置于100mL容量瓶中，用无水甲醇定容，摇匀。此时芦丁对照品溶液浓度为0.0970g/mL，准确吸取浓度0.0970g/mL芦丁对照品溶液0.00mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL、6.00 ml，分别置于25 mL容量瓶中，用无水甲醇定容，在359nm波长处测其吸光度。根据测定的芦丁标准浓度与吸光度的关系并用最小二乘法作线性回归，得出芦丁标准浓度C与吸光度A的关系。结果如图1所示。其回归方程为A= 0.008640 + 0.02642C，r = 0.9997。 图1 芦丁标准曲线

1.单因素试验。本研究以无水甲醇作为提取溶剂，探

讨提取温度、提取时间、溶剂用量对总黄酮提取率的影响。(1)温度对总黄酮提取率的影响。准确称取0.5000g样品6份，加入无水甲醇40mL，分别在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃下进行水浴回流提取2h，然后抽滤，定容，测定其吸光度，结果见图2。由图2可见温度在70℃左右为最佳提取温度。

图2 温度对总黄酮提取率的影响

(2)时间对总黄酮提取率的影响。准确称取0.5000g样品5份，在70℃下分别进行水浴回流2h、3h、4h、5h、6h,然后抽滤，定容，测定其吸光度，结果见图3。由图3可知，最佳的提取时间是5h。

图3 时间对总黄酮提取率的影响

(3)溶剂用量对总黄酮提取率的影响。准确称取0.5000g样品5份，在70℃下分别加入20mL、30mL、40mL、50mL、60mL的无水甲醇，进行水浴回流5h，然后抽滤，定容，测定其吸光度，结果见图4。由图4可见最佳的溶剂用量为木瓜子质量的80倍左右。

图4 溶剂用量对总黄酮提取率的影响

2.实验因素对总黄酮提取效果的影响。由于实际操作受温度、溶剂用量、提取时间三个因素交叉影响，为了考察各因素对总提取效果的影响，我们选用三因素、三水平进行正交试验。因素水平设计见表1，各实验处理及总黄酮的提取率见表2。

表1 正交实验因素水平

从表2可知：木瓜子中总黄酮提取的最佳工艺条件为：A1B3C2，即用无水甲醇为溶剂，以1:80的料液比在70℃的恒温水浴中回流5h。

三、结论

1.木瓜子中含有丰富的黄酮类化合物，本文详细地研究了木瓜子中黄酮类化合物的提起工艺，为开发利用提供了有益的参考.

2.木瓜子中总黄酮最佳提取工艺条件为：料液比1:80、提取时间5h、提取温度70℃。在该最优条件下进行平行实验，得出平均提取率为3.0244%。该方法能够直接测定总黄酮的含量，而不需用硝酸铝显色，且方法操作简便，是测定木瓜子中总黄酮含量较佳的方法。

（作者单位：广东石油化工学院化学与生命科学学院）